Способ моделирования синтеза ревматоидного фактора

Союз Советских Социалистических Республик1 (2) 1701938/31-1 22) Заявлено с присоединением заявки1 асударственный камитеСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий(088,8) та опубликования описания 12.04.75. Бененсон и Л. К. Буренков Заявител мский государственный медицинский инст 54) СПОСОБ МОД РЕВМАТОИИРОВАНИЯ СИНТЕЗОГО ФАКТОРА сти медицины. ревматоидного рганов путем гстемы аллоИзобретение относится к облаИзвестна модель индукциифактора при трансплантации остимуляции клеток иммунной сггенной тканью.0Однако известная модель затрудняет изучение механизмов образования ревматоидного фактора.С целью упрощения и стандартизации методики его получения по предлагаемому способу 10 производят гп юго взаимодействие культуры лимфоидных клеток периферической крови человека с первичной культурой аллогенных фибробластов с последующим определением ревматоидного фактора в надосадочной жид кости.Способ моделирования синтеза ревматоидного фактор гп чго включает следующие этапы: получение лимфоцитов периферической крови здоровых лиц; приготовление первичной 20 культуры фибробластов эмбриона человека; методику внесения и культивирования лимфоцитов в культуре аллогенных фибробластов, в числе и в прггсутствии винбластина; методику обнаружения ревматоидного фактора. 25Получение лимфоцитов периферической крови здоровых лиц. Культуру лейкоцитов получают методом осаждения венозной гепари. низированной крови. Лейкоконцентрат дважды отмывают от плазмы средой 199 центрифуги- З 0 рованием ири 000 оо/лгнн в течение 5 лгггн и заливают 10,ц.г этой среды на 20%-ной телячьей сыворотке. На следующий день надосалок сливают, и лейкоцитарнуго массу, состоящую из лимфоцитов, )есусггеггдиругот в этой питательной среде из рачета 2 лг,г иа 2 Х 10 клеток.Приготовление триисинизированных культур тканей эмбриона человека. Шести-лвеналцати недельные человеческие эмбрионы сразу ггосле доставки трижлы отмывают раствором гидролизат-лактальбумина с высокой коггцентрацией антибиотиков 000 ел пенициллина и 1000 ел стрептомицина на 1 .ц.г среды), затем отбирают кожнозгышечнуго ткань, отмывают этим раствором, измельчают стерильными ножницами до кашеобразного состояния и помещают в колбу для трипсинизации, В эту колбу добавляют иологретый до 37 С 0,25%-ный раствор трипсгша Дцфто в таком количестве, чтобы осевшая ткань была покрыта слоем жидкости 1,5 - 2 с,ц. Во время инкубации ткань постоянно в течение 5 лшн встряхивают, затем трипсинизироваиную взвесь клеток удаляют и в ткань вносят свежую порцию трипсина. Взвесь клеток в обеих порциях трггпсина центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 лгин, ресуспендпруют и разводят питательной средой (гилролизат-лактальбузгггна, 10 - 15%-ггая телячья сыворотка с лобавчеРедактор Н. Суханова Корректор Л, Котово Заказ 135 Изд, Ло 1957 Тираж 482 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открьпий Москва, Ж, Раушская иаб., л. 4/5Обл. тип. Костромского управления издательств, полиграфии и книжной торгованием 00 ед пенициллгина и 100 ед стсптомщпна с таким расчетом, чтобы в 1 мл содерж.тлось 500 000 клеток), Полученную взвесь в количестве 2 мл разливают в стерильные пенициллиновые флаконы, которые помещают в термостат при 3 С.Методика внесения и кулыивирования мелифоцитов в культуре аллогенных фибробластов, в том числе и в присутствии винбластина. Лимфоциты периферической крови в количестве 2 Х 10 клеток в 2 м г среды 199 па 20%-ной телячьей сыворотке, вносят в одноа точную первичную культуру аллогенных фиоробластов после удаления из пее питательной среды. В ряде опытов взвесь лимфоцитов, вносимая в монослой фибробластов, содержала 1 .г пЬ)агапе зи 1 цгс. Кулыивировапие производят в термостате при 3 С. Одновременно с основным опытом, включающим пробы с винбласт:ном, ставят контроли на отсутствие спонтанной продукции ревматоидного 1)акора: взвесь лимфоцитов периферической крови здоровых лиц; первичная культура аллогснных фибробластов.Через 24 - 96 час культивирования в иадосадочных жидкостях опытных и контрольных проб производят обнаружение ревматогидного фактора.Методика обнаружения ревматопдпого фактора. Дерматоловую пробу используют как дающую наиболее специфические результаты. Суспензию дерматолога ( г дерматолога в 25 мл натрпй-боратного буфера рН 8,2) тщателыо размегпиваот и оставляот а 1 час при комнатной температуре, После оседания крупных частиц верхиоо прозрачную жидкость отсасывают пипеткой, а средний слой сливают и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 лин, Надосадочную жидкость сливают и взвесь дерматола ресуспендируют в 1 мл натрий-боратного буфера. К суспензии частиц осторожно по стенке добавляют 0,2 м г 0,5%-ного ампульного раствора человеческого у-глобулина и оставляют на 30 гин при комнатнои температуре, Реакцию ставят на стекле, К по;ледоватсльным двойным разведениям (1:2, 1:4, 1:81:128) сследуемого образца тзех-, чет 1 зехсуО пой надосадочной жидкости добавляют дермаголовые частицы, нагруженные у-глобулипом, Результат учитывают визуальнопод микроскопом через 2 - 4 .гин, Оценивают рсакцгио по разведениям падосадочной ждкости, вызывающей агглОтпнацию половины и более дерматоловых частиь Предмет зобретснияСпо;об моделирования синтеза ревматоидного фактора путем стимуляции клеток иммунной системы аллогенной тканью, от.гичагогциися тем, что, с целью упрощения и стандартизации методики его получения, производят и л 1 го взамодействие культуры лимфоидных клеток 30 ге)иферпческо кров человека с первчнойкультурой аллогенных фибробластов с последующим определением ревматоидного фактора в надосадочной жидкости.