Способ количественного определения гормонального препарата в мясных тканях

(1 п 438928 Союз Советских Социалистических Республик(51) М. Кл. б 01 п 33 с присоединением заявки М Государстеееыи комитет Саеета Мииистрае СССР па делам изобретений и открытий) Авторы изобретени Л. Ф. Адигамов и Нестери 71) Заявитель нститут питания АМН ССС(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОРМОНАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА В МЯСНЪХ ТКАНЯХспособ осуществляют следуага емыибразом.три пропечении первыНзО - Киз трехную тк) мясной ткани кстракцию, гидстки в системепроводят для . Тщательно изкстрагируют в бы (по 250 г или почек). Э й этап очи азСОз - Ха ОН проб отдельно ань дважды Изобретение относится к мясной промышленности, а именно к способу количественного определения диэтилстильбэстрола в мясе и субпродуктах.Известен способ количественного определения гормональных препаратов в мясных тканях путем экстракции препарата из тканей, гидролиза, его перераспределения в растворителях, хроматографической очистки и последующего денситометрического исследования,Однако такой способ не обеспечивает достаточной чувствительности и надежности анализа,Для устранения указанного недостатка в предлагаемом способе экстракцию осуществляют в 2 этапа: в поле центробежных сил и на адсорбционной колонне, гидролиз проводят в растворе неорганической кислоты с добавлением растворителя, а хроматографическую очистку ведут последовательно распределительным и адсорбционным методами. 2центробежном экстракторе 96%-ным этанолом(500 мл). После фильтрования через бумажный фильтр ткань смешивают с равным повесу количеством целита - 545, переносят на5 экстракционную колонну (0,86,0 см) и вновьэкстрагируют 96% -ным этанолом (1000 мл на250 г ткани). К 1500 мл объединенного этанольного экстракта каждой пробы добавляют50 мл 2 н, НС 1, выпаривают до объема 100 -10 150 мл и проводят очистку в системе хлороформ в вода в углеки натрий в гидр окиси натрия. К гидролизату добавляют 100 млхлороформа и 300 мл воды. После встряхивания и разделения слоев хлороформную фа 15 зу переносят в делительную воронку и промывают 100 мл воды. Экстракцию хлороформоми его промывание повторяют еще дважды (по50 мл хлороформа), Водные фазы отбрасывают. Хлороформные фазы объединяют и их20 дальнейшую обработку последовательно проводят в трех делительных воронках. Перваяворонка содержит 20 мл 107 О-ного ИазСОз,вторая и третья воронки по 40 мл 1%-ногоИаОН. После встряхивания и разделения фаз25 СНС 1 з-слой и ХазСОз-слои отбрасывают. Объединенные КаОН слои подкисляют 2 н. НС 1и трижды экстрагируют 30 мл хлороформа,При наличии желтой окраски конечных хлороформных экстрактов обработку в системе30 Иа,СОз - КаОН повторяют,438928 Составитель С, Белая Редактор Л. Гончарова Техред 3, Тараненко Корректор Н. Аук Заказ 3711 г 15 Изд Мз 126 Тираж 651 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 В дальнейшем экстракты трех проб (соответствующей ткани) объединяют и выпаривают в вакууме. Сухой остаток растворяют в 30 мл 70/о метанола и интенсивно встряхивают в делительной воронке с 8 мл гексана. Гексан дважды промывают равным объемом 70 о/о метанола и отбрасывают. Метанольные экстракты объединяют и выпаривают в вакууме; водный остаток после подкисления 2 н. НС 1 дважды экстрагируют хлороформом (по 30 мл). Водную фазу отбрасывают, Хлороформ обезвоживают, выпаривают до объема 1 - 2 мл и наносят на колонку силикагеля Л (0,6 К 8,0 см) . Элюирование проводят (0,5 мл/мин) 20 мл хлороформа (фракция 1, не содержащая диэтилстильбэстрол) и 30 мл 1% этанола в хлороформе (фракция 2, содержащая диэтилстильбэстрол), Фракцию 2 выпаривают на роторном испарителе до минимального объема и наносят на пластину силу- фола. Хроматографируют в системе растворителей эфир - бензол (1: 4). Пластину силуфола облучают в УФ-свете в течение 30 мин, вырезают полосу хроматограммы (4 К 15 см) с проявленными пятнами специфического продукта фотохимической реакции - 3,4,5,6,12,13- гексагидро,6-диоксо - 9,10-диэтилфенантрен; денситометрируют в отраженном свете на экстинкционно-регистрирующем приборе ЕЮ.При отсутствии условий для денситометрии количественное определение после хроматографии на бумаге (в системе бензол - метанол - вода, 5; 7; 3) или в тонком слое силикагеля (этанол - бензол, 1: 9) проводят спектрофотометрическим или фл 1 оорометрическим методами. Спектрофотометрически (при Л 910 нм) измеряют (после УФ-облучения в смеси 96%-ный этанол - 1,8%-ной КНРО, 1; 1) окрашенный в желтый цвет продукт фотохимической реакции; флюорометрически оп ределяют 3,6-дигидрокси,10-диэтилфенантрен (возбуждение флюоресценции при Л 360 нм, измерение при Л 400 нм),П р едм ет изобретения 101. Способ количественного определения гормонального препарата в мясных тканях, например диэтилстильбэстрола, путем экстракции препарата из ткани, гидролиза, перерас пределения в растворителях, хроматографической очистки и последующего денситометрического исследования, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и надежности анализа, экстракцию осу ществляют в два этапа: вначале в поле центробежных сил, а затем с помощью адсорбции, гидролиз проводят в растворе неорганической кислоты с добавлением растворителя, а хроматографическую очистку ведут последова тельно распределительным и адсорбционнымметодами.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что перераспределение гидролизата проводят последовательно в двух системах растворите лей; вначале в системе хлороформ - вода - углекислый натрий в гидр окиси натрия, а затем в системе метанол в гексан в хлоро.3. Способ по п. 1, отличающийсятем, что денситометрическое исследование 35 проводят с применением фотохимической реакции.