Способ электрофоретического разделения белковмышечной ткани

ш 1 4292 Союз Советски оциалистически ЗОБРЕТЕН И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(22) Заявлено 27,03,72 ( исоединением заявкиооударотвенный комитетСовета й 1 инистрое СССРно делам изобретенийи открытий.865 (088.8) летеньата опубликования описания 03,09.74) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИС целью ускорения методики разделения, а решающей способности буферном растворе 92 об.% смеси 0,0030 - лоты и 0,013 - 0,019 М си 0,015 - 0,025 М гидр 0,080 М борной кисло вины, а в качестве гид талла, входящей в сос ра, берут гидроокись ли процесса и упро также повышенигеля, его готов с содержанием ,0035 М лимонно триса, 8 - 12 об.7 оокиси лития и 0ы, 0,75 - 4,60 М роокиси щелочно ав электродного тия. щения я разят на88 - " кис- сме 065 - мочео ме- буфеИзобретение относится к области биохимии белковых веществ, а именно к способам электрофоретического разделения белков мышечной ткани.Известен способ электрофоретического разделения саркоплазматических и миофибриллярных белков мышечной ткани, например, убойных животных, в крахмальном геле, включающий приготовление геля на буферном растворе, содержащем лимонную кислоту, 10 трис и мочевину, и применение электродного буферного раствора, содержащего борную кислоту и гидроокись щелочного металла.Недостатками известного способа являются низкая разрешающая способность (геля) да же в условиях вертикального электрофореза, длительность процесса разделения, сложность методики приготовления геля. При этом с целью обеспечения возможности разделения саркоплазматических белков гель готовят на буферном растворе, содержащем 0,75 - 1,50 М мочевины, а для разделения миофибриллярных белков гель готовят на буферном растворе, содержащем 3,2 - 4,6 М моче- вины,При этом электрофорез в предложенной буферной системе приводит к увеличению разрешающей способности геля и ускорению разделения белков мышечной ткани, причем методика приготовления ге.чя и проведения электрофореза упрощается в связи с возможностью использования горизонтального электрофореза.П р и м е р. Гель для разделения саркоплазматических белков готовят следующим образом: к 23 г частично гидролизованного крахмала в литровой колбе добавляют 250 мл буфера (90% смеси 0,0033 М лимоннон кислоты, 0,016 М триса и 10% смеси 0,02 М гидроокиси лития и 0,076 М борной кис,чоты, 1 М мочевины, рН 8,5) и, нагревая над газовой горелкой при помешивании, доводят до кипения в течение 30 - 40 сек, после чего удаляют воздух под вакуумом. Полученный продукт заливают в кювету. из плексигласа (270 М 110 Х 6 мм), выдерживают 1,5 - 2,0 час при комнатной температуре и используют в качестве гелевой пластины при горизонтальном электрофорезе.421923 Предмет изобретения Составитель В. КлючниковТсхред Е. Борисова Корректоры: А, Николаеваи О, Данишева Редактор Г. Тимофеева Заказ 2111/15 Изд, Мз 1447 Тираж 651 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 Разделение миофибриллярных белков мышечной ткани проводят в гелевой пластине, полученной из 24,5 г частично гидролизованного крахмала и 220 мл буфера, содержащего 4 М мочевины,3 - 4 мг исследуемого белка саркоплазмы растворяют в 0,04 мл трис-боратного буфера, содержащего 0,5 М сахарозы. При исследовании миофибриллярных белков используют раствор белка в 8 М мочевине. В раствор белка помещак)т полоску хроматографической бумаги ватман 3 мм (ЗХ 10 мм), которую затем вставляют в гель с прорезанными обычным путем лунками. Крахмальную пластину покрывают смазанной силиконовым маслом полиэтиленовой пленкой так, чтобы закрыть гель и электродные камеры. Последние устанавливают по обоим концам гелевой пластины и заливают буферным раствором (0,38 М борной кислоты и 0,1 М гидроокиси лития, рН 8,5), Для подключения электродных ванн к блоку питания (типа ЭФА) используют платиновые электроды. Разделение проводят при силе тока 30 ма и напряжении 950 в, продолжительность электрофореза 2 час. Протеинограмму окрашивают 0,0125 о/,-ным раствором нигрозина в смеси, содержащей этанол, воду и уксусную кислоту (5: 4: 1) . 1. Способ электрофоретического разделениябелков мышечной ткани, например, убойных животных, в крахмальном геле, включающий приготовление геля на буферном растворе, содержащем лимонную кислоту, трис и мочевину, и применение электродного буферного раствора, содержащего борную кислоту и гидро окись щелочного металла, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью ускорения процесса и упрощения методики разделения, а также повышения разрешающей способности геля, его готовят на буферном растворе с содержанием 15 88 - 92 об.% смеси 0,0030 - 0,0035 М лимоннойкислоты и 0,013 в ,019 М триса, 8 - 12 об 7 о смеси 0,015 в ,025 М гидроокиси лития и 0,065 - 0,080 М борной кислоты, 0,75 - 4,60 М мочевины, а в качестве гидроокиси щелочного гО металла, входящей в состав электродного буферного раствора, берут гидроокись лития,2. Способ по п, 1, отличающийся тем,что, с целью обеспечения возможности разделения белков саркоплазмы, гель готовят на 25 буферном растворе, содержащем 0,75 - 1,50 Ммочевины.3. Способ по п. 1, отличающийся тем,что, с целью обеспечения возможности разделения белков миофибрилл, гель готовят на ЗО буферном растворе, содержащем 3,2 - 4,6 Ммочевины.