Способ получения целлюлозного антигена

9543 Союз Советских П ИЗОБРЕТЕ Н И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ иалистицескихРеспублик исимое от авт, свидетельства.Х 1.1971 ( 1 ВЛЕН 15 он присоединением заязкн асударстеенный камит Савета Миниатрав ССС па делам изобретенийи аткра 1 тий нтст УДК 576.8.097(088,8 о 28.Ч 1 Н.1973. Бю3 э Опубликов Дата опубликования оннсяння 4 х 1.107 Авторыизобретени Никитин М. Никит Заявитель ПОСОЬ ПОЛУЧЕН Изобретение относится к област:. меднц;1- ны, а именно к микрооиологни.Известен способ получения гептенцсллюлозного антигена путем совмест;ого гидролпза нитроцеллюлозы 51 мнкробной массы в 1 л,г 10%-ного раствора КОН, добавле:1;1 я раствора бриллиантовой зелени 1: 500,ейтралнзации щелочи уксусной кислотой, це:1 трифугнрования и разведения осадка физиологнческгим раствором.Однако гептенцеллюлозные антигены, полу чаемые нз 5 икробов указанным способом, не сохраняют специфичности антигенов.Предлагаемый способ отличается от известного тем, что .микробную массу вносят в раствор гидролизованной нитроцеллюлозы после ее цейтрализации и пидролизуют на водяной бане при рН 5 и 100 С в течение 2 - 3 шн.П р и м е р. В пробирку, помещают 50 лг высушенной нитроцеллюлозы в виде пленк: (или один мембрагеный фильтр) и затем туда же добаВляют 1 л,г 3,5% КО 11. Пробирку, легко встряхивая, подогревают на пламени горелки до буферного,вскипания щелочи и полного растворения пластинки нитроцеллюлозы с образованием желтоватой жидкости. В пробирку вносят пастеровской пипеткой сначала 2 капли бриллиантовой зелени 1: 100, затем добавляют 2 капли крепкой уксусной кислоты и заливают 1 л 1,г дистиллирован 51 ой воды, В реЛЛЮЛОЗНОГО АНТИГЕНА ЗУЛЬТЯТС В НР 001 Р 1 СЕ ООР 11 ЗУЕТСЯ НОННЯ 51 СРСД 11 цветного раствора цсллголозы, имеющая слабо кислый р 1-1 5. В эту среду вносят необходимое количество микробов в объеме 0,1 - 0,2 л.г, которос под 011 ряют Опытным путсз 1. Тяк, 1,Ол 11- ЧССТВО м 11 крОООВ Гул яре 1 ни долкно СОСГЯВ- лять 2 - 5 млрд по кишечному оптическому стя 1 дарту нр: использовании бяктерняльного диагност:кума; чумы (вакина ВУ) - 2 - 2,5 10 млрд м:крооых клеток; холеры (вакц;на)20 - 40 млрд микрооных тел. Пробирку со смесью помещают в водяную башо, доводят до 100 С и кипятят 2 - 3 лпн, Зятем нробирку с суспснз:ен охлаждают, центр:фуг:1- руют н;1 н 1500 - 2000 оо,лггн 5 - 1 О лин, сливают 1 ядосядочную жидкость, а осадок промываот 2 раза днст.ллнрованной водой.С этОЙ целью 1 Осадку доояВляют 3 - 5,1 н 1 д 11- ст 1 Лл 1 рованной,воды, ресуспенднруют его и взвесь цетрнфуг:1 руют. Процедуру повторяют дв;жды. Пос этого,к пол; чепцова, осядк част 1 ц зеленого цвета добавляют 1 л.г 1",Ъ-ного раствора нормальной сывороткиресуспендируют путем встряхиван 11 я, и цветной целлолозный ант;ген-днагностпкум готов к применению, Это Оудет концентрированный ЦАГ-днягностикум, "1 з которого приготовляют рабочее разведение его путем доразведення в 5 - 10 раз тем же раствором нормальной лошадино"1сыворотки.395438" Предмет изобретения Составитель С. ЩеневаТехред Е, Борисова Редактор Д. Пинчук Корректор М. Лейзерман Заказ 689/2271 Изд.940 Тираж 467 Подписное ЦН 1 ИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк. фил. пред. Патент Для постановки реакции агглютинацнн применяют оба антигена, если используют концентрированный ЦЛГ-диагностнкум, то он заканы вается с помощью пастеровской пипетки с тонко оттянутым капилляром, а в случае применения рабочего 1 раствора ЦЛГ - его наносят обычаой .пастеровской пипеткой. Препараты ЦЛГ-диагностнкумов представляют сооой цветную, взвесь частиц целлюлозы со специ. фпческими свойствами. Црн стоянии онн оседают, образуя достаточно плотный цветной осадок, надосадочная яидкосгь просветляется, становится прозрачной или слегка окрашенной. Перед применением цветные целлюлозные анти гены ресуспендируют с помощью знертнчного встряхивания в пробирке с закрытой резиновой пробкой.Хранение ЦЛГ-днагностнкумов осуществляют в проопркак (нра 1 длительном хранении целесообразно добавить в препарат мертиолат в конечной концентрации 1О тыс) на холоду прн 4 - 10 С. Препараты длительно сохраняют свою активность.5 1. Способ получения целлюлозного антнгена из микробов путем гидролиза нитроцеллю 10 лозы щелочью, добавления красителя, нейтрализации щелочи уксусной кислотой и центрифугирования, от,1 ичаюцийся тем, что, с цельюсохранения специфичности ангигенов, микробцу 1 о массу вносят в раствор гидролизованной15 нигроцеллюлозы после ее нейтрализации игидролизуют на водяной бане,2, Способ по п. 1, отличпюи 1 ийсл тем, чтогидролиз микробной массы проводят прн рН 5и 100 С в течение 2 - З,яин,