Способ разделения биологических жидкостей

Союз СоветскикСоцмалмстммаскмнРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯ К ВТОРСКОМУ СЗИДИПЛЬСТ 1 еУ(И) М, Кл,е С 12 К 1/00// //С 01 Н 33/16 присоединением заяи ееудерстеенный кемететСееетн Мннньтрье СССРее леиам ееьбретеннйн еткрытнй(4 в) Дата опубликования описания 28.09.7(72) Авторы изобретен Каменская, Н. А. Сизо и Л. А. Кулико Новосибирский государственный медицинский институт 71) За явител(64) СПОС ЭДЕЛЕНИЯ БИОЛОП.ЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ ый способ не обесющей способнооИзобретение касается разделения .биологических жидкостей, напримеркрови, н может быть использовано при исследованиях в медицине, клинической и теоретической биофизики и биохимии. 5Наибодее близким решением к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является известный способ разделения , биологи ческих жидкостей путем отбора клеточных 6 частиц по их физико-химическим показателям 1,Ц. Однако однократное прйменение извесь ного способа часто не обеспечивает эффек - 5 тивного разделения, Необходимо использо ванне многоступенчатого варианта известного способа, например, противоположног распределения, что явлются трудоемким повторением процесса распределения частиц. еяКроме того, для разделения смеси необходимо потряхивание взвеси, что может отрицательно действовать на свойства и состояние разделяемых биологических частиц. Ю В. Столяров, В. И, 4 Ьденков При этом процесс полного разделения на фазы по известному способу ддитеден и сопровождается образованием труднодносоцируемых комплексов разделенных частиц с полимерами, в связи с чем необходима дополнительное введение этапов отделения частиц от полимеров,Таким образом известнпечивает высокой разрешати и является сложным.С целью повышения разрешающей способ ности и упрощения способа исследуемую биологическую жидкость помещают в термостатируемый сосуд, создают температурный градиент и затем отбирают клеточные частицы, локализованные в зоне нагрева.Способ осуществляют следующим образом, Исссдедуемую среду, например, взвесь клеток кровн-аритроцитов в растворе пома шают в пробирку, которую в свою очередь помещают в термоститнруемый сосуд, прец ставдятощий собой кювету, расположенную и водяной бане.В исследуемую среду на заданном рас стоянии от слоя взвеси вводят тепловойГи 1 срозонд (микротерморезистор), герметизир ванный в тонком стеклянном капиляре,что позволяет пойвести точечную энерги, )к системе за счет достаточно высокогозлектри .ес 1 сОГ О сопрэтииения этих ,дтчи ков с одновременной изоляцией их от биологической жидкости посредством стеклян- БОЙ Оболочки.. С помощью микротерморезистора создают температурный градиент путем подачи к щ 0 не 1 у постоянно.о тока мо костью около 30 мвт при этом локальная температура на 4-5 С больше температуры жружающейсреды,Возбуждаемые в исследуемой биологической жидкости конвективные потоки :. увлекают более легкие частицы в областьменьшей пл тности в зоне микротерморезистора, при этом в последнейобразуетсяхарактерное "облако из клеток с меньшейпГ 1 отностью, регистрируемое визуально. Опти.ческий эффект усиливается благодаря поме-. щению пробирки в термостатируемый сосуд,атакжегдадкой поверхности кдеток с меньшей плотностью. 25Через 1-2 мин Отделившиеся от основной взвеси клетки, докализованньсе в зсне нагрева, отбирают микропипеткой и переносят в приготовленную для них емкость.Далее через несколько секунд наблюдают 30образование сдедуюсцего "облака" клетоккрови,. плотность которых несколько большечем плотность клеток первого "облака и,т,д,П р и м е р . Пробирку Вчдадя обьемсм 351,5 мд нанолняют буферной смесью. Составб,веерной смеси: 3 ч,физиологического растьвора и" ч. Гсалий=фосфатного буфера 1/15 М,рЛ 7,.27,.4., Б эту смесь вносят0.2 мл сусГ 1 еизии От. Гь 1 тых эрктрОцитов. сДПробирку погружают в стекдяннуэ водяну 1 обаню д 1 я достижения режима постояннойтемпературы микротерморезистора (тецлового мигрозонда). После осаждец 11 я эритроцитов в пробирку погружают ми сротерморезистор типа МТиди МТ-.64, конструкции Б. Г, Карманова на глубину 2-3 ммог поверхности слоя эритроцитэв. Включаютмостовую схему, в измерительное плечокоторой присоединен микротерморезистори последовательно с ним милдиамперметр,контродиру 1 оший ток микротерморсзистора,Например, ддя микротерморезистора типаМТпри токе 4,5 ма, сопротивлениемикротерморезкстора, 1500 Ом, что соот- Мветствует мощности рассеяния порядка 30 мвт,а температура среды в микрозоне микротеромо 1,езистора на 4-5 С превышает температуру окружающей среды, Все исследованияпроводят при комнатной температуре, Ввиду того, что нахождение микротер морезистора вне жидкой среды приводит к немедленному его повреждению в.указанном режиме работы, периодически при отборе последних фракций в пробирку вносят путем наслаивания по стенкам буферную смесь,Отобранные фракции эритроцитов используются ддя из" чения дипидного состава клеток и для их микроскопического изучения.Полученные биохимические данные по определению содержания холестерина диги тониновым методом дают следующие реэультаты. В первой, верхней ракции содержание ходестерина 6,8 10 мг на одну клетку.-1 ОВо второй фракции - 4,610 мг на одну клетку. В эритроцитах, лежащих на днефЮ пробирки, содержание хопестерина 2,6 ф 10 Мг на одну клетку,Полученные результаты хорошо согчасу ются с; литературными данными, показывающими что содержание липидов и в частности холестерина зависит от возраста и со- кращается при старении.Параллельно проводят микроскопические исследования, .Приготовляются. мазки с использованием в качестве красителя раствора бриллианткризилбляу, что позволяет оонаружить Ретикулоциты в самой первой фракции.Этот результат наиболее четко наблюдают при разделении эритроцитов животных с экспериментальной гемолитической анемией (содержание ретикулоцитов в верхней фракции В 2%).Предлагаемый способ разделения кидких биологических систем по сравнению с изьестными способами обеспечивает возможность минимального воздействия на исследуемую среду благодаря исключению дополнительных ингредиентов участников реак ции, а также за счет применения микрозонда с малой мощностью рассеяния, при этом эффект разделения на фракции проявляется весьма быстро, в течение 1-2 мин.Способ легко осуществим в аппарату ном отношении и дает вобможность фракци онировать клетки (эритроциты, лимфоциты)по возрасту. 50 В образовавшуюся зону вводят пастеровскуюмикропипетку, снабженную отсасывающимустройством, и отбирают данную эритроцитариукГ взвесь, котору о перенося Г пробирку. После отбора в зоне микротерморезистора формируется очередная фракция клеток,Эту и последующую фракции отбираютаналогичным методом, Формула изобретения Способ разделения биологических жидкостей, например крови, путем отбора клеточьх частиц по их физико-хилическил показателям, о т л и ч а ю и и й с я тем, что, с целью повьниения разреиаюие способности и упрощения способа, исследумую жидкость помещают в термостатируемьй сгсг л, созпакт11 с ра,1,диент н зй ел отбирйт кетоии %флии, локализотанин,е в зоне иаира. 5 Источники иифорлниии, и; ия.:е н; нмание при эксири.".:.Пер-Рке Лльбтси "Рази "ииклетоипх частиц и якоо г; ", л 1Составитель А, БражниковаРедакторЛ, Гончарова Техред ц, Бабурка Корректор М, ЛемчикЗаказ 1662/139 Тираж 541 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открьтий113035, Москва, Ж 35, Раушская: набд. 4/5Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4