314356

( " гчц.,и Ф т," ., -. ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Соиз Соеетокиз Социалистическик Республиквисимый от патента Ле д 13/0 Заявлено 15.И 1.1968 ( 1259048/31-1 МП 1 2 А,67, Итал Приоритет 19 Х 11.19 Опубликовано 07.1 Х Комитет по делам изобретений и открыти ори Совете Мииистрое СССРК 615.45:615.711.7 (088.8) 71. Б летець27 Дата опубликования описа 16,Х 1.197 Авторыизобретени Иностранцы чи, Анаклето Мингетти,и Селестино Спалла(Италия) Иностранная фирма та Фармацеутики Италба Мариа ЛЛИО СКОТ Лаявител Сосие СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЬ 1 Н ИзобретИзвестенспорыньикультурыях на питники углепри темпепосл едующта. ние относитсяспособ получпутем глубинода С 1 аисерз втельной среде,ода, азота и матуре до 30 Сим выделением к медицине.ения алкалоидов ой ферментации аэробных условисодержащей источицеральные соли и кислой среде, с целевого продукхарактеризуется1 ачсерз рцгрцгеа 25 на теПредложенцыи обиспользованием шт а С1, 1. 32/17.Штамм Сдлсеря рцгрцгеа 1, 1, 32/17 выделен из спорыньи в стадиии покоя, собранной на колосьях ржи близ Брунико (Больздно),Мицелий молодых культур состоит из гифов диаметром 2,5 - 4 мк с мало здметцымп перегородками. Молодые гифы обычно нс имеют ветвей. Растущие гифы ветвятся, и перегородки становятся более отчетливыми, гифы утончаются, и диаметр их получает значительное искривление, обусловленное наличием клеток различных диаметров. Время от времени гифы разрываются на уровне перегородок и образуют искривленные фрагменты, которые проявляют свойства автоспор. В зависимости от состава среды штамм Г. 1. 32/17 образует или не образует конидии, ко.торые имеют правильную овальную форму размером от 2,5 - 3,5 до 5,3 - 6,5 лк.Штамм С 1 аисерз рцгрцгеа Р. 1. 32/17 вы ращивают глубинным методов в аэробныхусловиях ца питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли. Источниками углерода могут служить глюкоза, сахароза, декстрин, сорбит, маннит, 0 лицерин, лимонная кислота, яцтдрцая кислота, а исго шиком азота - дммцд:, дспарагин, пептон, творожные гидролцздгы, дрожжевой экстракт, мясной экстракт, соевая м ка, соли аммония, например дзотцокислые, 5 серцокислые цли хлориды. Минеральными солями являотся лориды, цитрдты, карбонаты, сульфаты, фосфаты щелочных металлов, магния, железа, цинка ц марганца.П р и м е р 1. Исходную культуру, выра цепную цд скосе питательной среды, содержащей глюкозу 40 г, (хн 4) 2 нРО 4 5 г, К нРО 4 1 г, Мд 504 7 Н 20 2,5 г, КС 1 0,5 г, Ге 504 7 НзО 10 лг, Хп 304 7 НО 10 мг, агар-агар 18 г, дистиллированную воду до 1000 смз, высеваютскос аналогичной среды, выдерживают вчецие 8 дней при 28 С. Полученную такимобразом культуру высевают в колбы объемоа3141356 Предмет изобретения Составитель В. МуравьеваТехред Л. В. Куклина Корректор В. И. Жолудева Редактор Т. Фадеева Заказ 355/16 Изд.1321 Тираж 473 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб д. 4/5 Типографии, пр. Сапунова, 2 300 ил, в каждой из которых находилось по 50 снз ЬС среды (глюкоза 80 г, пептон 16 г, водопроводная вода до 1000 ял, рН 5,9, Колбы выдерживают в течение 4 дней при 24 С во вращающемся аппарате при непрерывном встряхивании, скорость вращения 220 об/,иин. От полученных таким способом культур 10% высевают в колбы объемом 300 лил со средой (сахароза 60 г, глицерин 60 с,из, глюкоза 80 г, дрожжевой экстракт 0,1 г лимонная кислота 15 г, КС 0,125 г, К 2 НРО 4 0,5 г, Мд 504 7 Н 20 0,5 г, ге 504 7 НвО 7 лг, Уп 504 7 Н 20 6 мг, дистиллированная вода до 1000 л 1 л), Колбы 13 дней выдерживают. Содержание смеси алкалоидов в культуре составляло 2000 у ил, в которой эрготамина 48% и эргокриптина 52%.П р и м е р 2. Содержимое 120 колб с титром 2000 - 2500 у смз соединяют и полученные 5 л культуры отфильтровывают. Фильтрат и мицелий экстрагируют порознь. Фильтрат при рН 9 экстрагируют дважды 3 л хлороформа (каждый раз). Хлороформ откачивают при 20 - 30 С до 1/в первоначального объема и экстр агируют 2% -ным водным раствором янтарной кислоты. Мицелий смешивают с 50%- ным водным ацетоном, содержащим 2 з/о янтарной кислоты, и отфильтровывают. Филь- трат при рН 9 экстрагируют хлороформом. Экстракт и фильтрат сливают, упаривают до небольшого объема и осаждают гексаном, Полученный сырой продукт растворяют в 13 смз ледяной уксусной кислоты и добавляют к нему метанол в количестве 110 сиз. Далее добавляют 5%-ный раствор сернойкислоты в метаноле в количестве 13 с,из, и реакционную массу выдерживают в течение ночи при 3 С, Маточную жидкость концентри руют в атмосфере азота при пониженном давлении до малого объема. Остаток разбавляют водой и при рН 9,5 экстрагируют хлороформом. Экстракт концентрируют в вакууме при 30 С до малого объема и пропускают через 10 колонку с 400 г силикагеля в хлороформе,Элюируют с помощью хлороформа эргокриптин, который упаривают досуха. Остаток растворяют в бензоле, взятом в соотношении 1: 20, и концентрируют до 1/1 исходного объема, Ре акционную массу оставляют на ночь при 5 С,При этом получают 4,8 г эргокриптина. При продолжительном элюировании из силикагеля хлороформом с 4% метанола получают другие фракции, выход которых при испаре нии досуха составлял 0,7 г. 25 Способ получения алкалоидов спорыньи,например эрготамина и эргокриптина, путем глубинной ферментации культуры рода С 1 аисерз в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, 30 азота и минеральные соли при температуредо 30 С и кислой среде, с последующим выделением целевого продукта, отлачающийся тем, что используют штамм Саисерэ рцгрцгеа Р, 1. 32/17.