Способ получения протеинов из яичного белка

и.О П И С А Н И Е 242203ИЗОБРЕТЕНИЯ Союе Соеетскиз Социалистические РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Зависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 02 Л.1968 ( 1206158(28-13)с присоединением заявкиКл, 451 т, 45/00 ЛПК А 011 сУДК 637.443 (088.8) орите Комитет по целизобретении и откр публиковано 04.Ч 1.1969, Бюллетень Ъ ри Совете Министре СССРата опубликования описания 20,Х 1,19 Автор1 зобретсни Я, Степка явитель ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕИНОВ ИЗ ЯИЧНОГ А ммони може ечеИзобретение относится к способам комплексного получения протеинов (например лизоцима, овоглобулина, овальбумина), которыеиспользуются для получения протеиновыхфракций из яичного белка путем осаждения 5содержащихся в нем протеиновых фракцийсульфатом аммония. Однако по известномуспособу в первую очередь выделяют менееценные фракции, например глобулин, овальбумин, кональбумин, овомукоид с последующим выделением наиболее ценной фракциилузоцима из глобулиновой фракции,Предложено перед осаждением сульфатомаммония проводить выделение лизоцима изяичного белка в виде кристаллов путем обработки яичного белка растворами хлористогонатрия и едкого патра с последующим отделением кристаллов лизоцима из раствора однимиз известных способов, например центрифуги.рованием. Осаждение сульфатом аммония остальных фракций производить в следующемпорядке,Сначала осаждают овоглобулин из раствора, отделенного от кристаллов лизоцима, затем - овальбумин из раствора, отделенного 25от осажденного овоглобулина в присутствиисерной кислоты, а затем - кональбумин иовомукоид аналогичным методом. Лизоцимвыделяют при рН 9,5 и температуре, равной4 С, в течение 48 - 72 час, а овальбумин при 30рН раствора 5,1 - 5,6 в течение 12 - 24 час. Соотношение сульфата а я к яичному белку преимущественно т быть равно 1,05 - 1,07: 1.Это способствует выделению более ценных фракций, например лизоцима, овоглобулина, овальбумина, повышению чистоты этих фракций, а также ускорению и упрощенгпо процесса нх выделения.Способ заключается в следующем.К яичному белку добавляют хлористый натрий до получения 5%-,ного раствора и раствор едкого патра до установления рН 9,5 при температуре 4 С. В течение 48 - 92 час осаждается кристаллический лизоцим путем центрифугирования.К центрифугату добавляют насыщеннын раствор сульфата аммония в соотношении 1: 1,05 - 1,07 для осаждения авоглобулина, который собирают центрифугированием. Следующая операция - выделение овальбумина.К центрифугату добавляют насыщенный раствор сульфата аммония и раствор серной кислоты до установления рН 5,1 - 5,6, Кристаллизация овальбумина завершается в т ние 12 - 24 час.Центрифугат используют для получения кональбумина и овомукоида.Предлагаемый способ по сравнению с известными обеспечивает получение более ценных фракций протеинов и максимальный выход лизоцима (75 - 80% из общего количества в247703 пр. Сапунова, 2 Типография,яичном белке), упрощает процесс, снижаеттрудоемкость, поскольку при его применениине требуется повторная фильтрация и центрифугирование при удалении овоглобулина, также диализ и экстракция при отделении лизоцима. Способ обеспечивает 100/О-ную кристаллизацию овальбумина.П р и м е р 1. Получение лизоцима,Яичный белок в количестве 2,5 л гомогенпзируют и добавляют 1 н. раствора едкого патра до рН 9,5. Добавляют хлорпстый натрий,для того чтобы получить окончательную5/о -ную концентрацию, Смесь выдерживаютпри 4 С после предварительного введения нескольких кристаллов лизоцима для обеспечения кристаллизации, Кристаллизация происходит в течение 48 - 72 час, Кристаллы собирают центрифугированием при 4"С и перекристаллизовывают путем растворения кристаллов в 0,05 н. раствора уксусной кислоты, удаления нерастворимого материала и снова доведения рН до 9,5 и добавления хлористогонатрия до 5% -ной концентрации. После третьей перекристаллизации кристаллы высушивают в вакууме над фосфорным ангидридом.Выход лизоцима 6,25 г, т. е, 80 - 85 изобщего количества лизоцима в яичном белке.Получение овоглобулина. К 1 л белка послевыделения лизоцима добавляют насыщенныйраствор сульфата аммония в соотношении1: 1,06 - 1,0. Осадок, состоящий из овоглобулина, через 24 час собирают центрифугированием, растворяют в воде и снова осаждаютсульфатом аммония для очистки препарата ивысушивают. Выход овоглобулина 3,8 г.Получение овальбумина. К центрифугатупосле отделения овоглобулина добавляют насыщенный раствор сульфата аммония, сернуюкислоту до рН 5,5 и раствор оставляют при20 С для кристаллизации. Кристаллизацияовальбумина идет 12 - 24 час. Кристаллы собирают центрифугированием и перекристаллизовывают растворением в воде и осаждениемсульфатом аммония. После перекристаллизации диализируют и высушивают лиофилизацией. Выход овальбумина 27,8 г или примерно 50 О/, из общего количества в яичном белке.Центрифугат используется для получения кональбумина и овомукоида.П р и м е р 2, Получение лизоцима.Яичный белок в количестве 15,0 л гомогенизируют и добавляют 135 мл 1 н. раствор едкого натра до рН 9,5. Добавляют 796,5 г хлористого натрия, для того чтобы получить окончательную 5/,-ную концентрацию. В растворвносят кристаллическую заправку лизоцимаи смесь выдерживают 48 - 72 час при температуре 4 С. Кристаллы собирают центрифугированием при температуре 4 С и перекрпсталлизовывают с растворением кристаллов в0,05 н. раствора уксусной кислоты с удалением нерастворимого материала и снова доведе.нием рН до 9,5 и добавлением хлористого натрия до 5 О/о-ной концентрации. После третьейперекристаллизации лизоцим высушивают в ЫНИИПИ Заказ 3052/14 вакууме над хлористым кальцием. Выход лизопима 36 г, т, е. более 80/о из общего содержания лизоцима в яичном белке,Получение овоглобулина. К 7 л белка послевыделения лизоцима добавляют насыщенныйраствор сульфата аммония в соотношении1: 1,7 (7,49 л) и оставляют при 20 С, Осадокчерез 24 час собирают центрифугированием,растворяют в воде и снова осаживают суль 10 фатом аммония для очистки препарата. Овоглобулин высушивают. Выход овоглобулина28,0 г.Получение овальбумина. К центрифугатупосле удаления овоглобулина добавляют на 15 сыщенный раствор сульфата аммония до помутнения 0,2 н., серную кислоту до рН 5,2 ираствор оставляют при температуре 20 С длякристаллизации.Кристаллизация овальбумина завершается20 в течение 12 - 24 час. Кристаллы собираютцентрифугированием и перекристаллизовывают с растворением в воде и с осаждениемсульфатом аммония. После перекристаллизации диализируют и высушивают лиофилиза 25 цпей, Выход овальбумина 227,5 г материала,т. е. 55% из общего содержания овальбумина в яичном белке.Центрифугат после удаления овальбуминаиспользуют для получения кональбумина и30 овомукоида. Предмет изобретения 1. Способ получения протеинов из яичного 35 белка путем осаждения содержащихся в немпротеиновых фракций, например глобулина, овальбумина, кональбумина, овомукоида, сульфатом аммония, отличающийся тем, что, с целью выделения в первую очередь более 40 ценных фракций, например лизоцима, овоглобулина, овальбумина, повышения чистоты этих фракций, а также ускорения и упрощения процесса их выделения, перед осаждением сульфатом аммония проводят выделение лизоцима 45 пз яичного белка в виде кристаллов путем обработки яичного белка растворами хлористого натрия и едкого натра с последующим отделением кристаллов лизоцима из раствора одним из известных способов, например цен трифугированием, а осаждение сульфатом аммония остальных фракций производят в следующем порядке: сначала осаждают овоглобулин из раствора, отделенного от кристаллов лизоцима, затем - овальбумин из раствора, 55 отделенного от осажденного овоглобулина вприсутствии серной кислоты, а затем - кональбумин и овомукоид аналогичным методом.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтолизоцим выделяют при рН 9,5 и температуре, 60 равной 4 С, в течение 48 - 72 час, а овальбумин при рН раствора 5,1 - 5,6 в течение 12- - 24 час.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтосоотношение сульфата аммония к яичному 65 белку преимущественно равно 1,05 - 1,07: 1. Тирак 480 Подписное