213256

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ооав Советекив Социелиотичеокиз РеоптблииЗависимое от авт, свидетельстваКл, 301 т, 204 Заявлено 10 Х.1963( 835442/31-16с присоединением заявкиМПК А 61 КУДК 615,361,37(088,8) итет Комитет по делам обретений и открытий ри Совете Министров СССРопубликовано 12.111.1968. БюллетеньДатл опубликования описания 7 У.1968 Авторыизобретения С. Б, Катковский, С. И. Шварц, И. Г, Саркисова, Э. С. Шубинская,Г. В. Самсонов, Л. В. Дмитренко, А, Б, Замиховский, С. С, Тугунов,Е, Б, 1 ростянская и А, С, Тевлина явитель ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОГО ИНСУЛ Известны способы получения кристаллического инсулина путем сорбции из экстрактов инсулинсодержащего сырья на ионообменных смолах. Указанные способы имеют сложнуо технологию и не обеспечивают удовлетворительной активности инсулина.С целью упрощения технологического процесса и повышения активности целевого продукта, первичный кислый экстракт поджелудочных желез пропускают через сульфокатио- т 0 нит, например, типа СДВТ в водородной форме, после сорбции смолу промывают органическим растворителем и буферным раствором (рН порядка 6,0 - 6,5) и элюируют щелочным раствором, например, 0,25 н. раствором аммиака, содержащим 10 - 20 оо ацетона, Из элюата при рН около 4,5 или 6,1 - 6,5 отделяют примеси, после чего осаждают цинк-инсулин, отделяют его от маточного раствора и кристаллизуют. 20В качестве исходного сырья используют спирто-водный или любой другой (например, водный) экстракт поджелудочных желез, прошедший стадию обезбелочивания и доведенный до рН 2,5 - 3,5. Подготовленный таким образом экстракт пропускают через колонку, заполненную сульфокатионитом, из расчета 0,5 л экстракта на 1 г смолы, После отмывки смолы от остатков экстракта спиртом инсулин десорбируют охлажденным 0,25 н. раствором 30 аммиака или другим буферным раствором аналогичной ионной силы. Для увеличения избирательности к элюирующему раствору добавляют 15 - 200/о ацетона. Полученный элюат, составляющий 0,01 - 0,02 о/о от объема пропущенного экстракта, подкисляют до рН 2,5 - 2,6, фильтруют, подщелачивают до помутнения (рН 4,5 или 6,1 - 6,5) и вновь фильтруют. Из фильтрата известным способом осаждают цинк-инсулин, который отделяют центрифугированием и перекристаллизовывают. Полученный кристаллический инсулин удовлетворяет существующим требованиям.В качестве сульфокатионита используют смолы с большим коэффициентом набухания, например СБС, СДВи т. п. Наилучшие результаты получают при использовании сульфокатионитов, полученных сополимеризацией стирола с дивинилбензолом в присутствии телогена (СДВТ).П р и м е р. 10,5 л обезбелоченного сернокислого спиртового экстракта инсулина с рН 3,2 пропускают через колонку (И=3,7 мм) со скоростью 90 мм(час на 1 см 2. Колонка содержит 25 г смолы СДВТ с коэффициентом набухания 5,5 и размером зерен 0,1 - 0,25 мм в водородной форме. Смолу предварительно промывают 300 мл 65-го спирта. По оконча. нии сорбции смолу промывают 150 мл 96-гл спирта и 300 мл ацетата аммония (рН 6,5),Заказ 1012/20 Тираж 530 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4Типография, пр. Сапунова, 2 а затем пропускают 0,25 н. раствор аммиака, содержащий 200/, ацетона. Объем фракций элюата с рН 7,2 - 9,0 равен 150 мл, После подкисления до рН 2,6 и фильтрования раствор подщелачивают до рН 4,5 и вновь фильтруют. После добавления к раствору 4,2 мл 100/оного раствора ацетата цинка и установления рН 6,0 осаждается цинк-инсулин. Через 20 час осадок отделяют центрифугированием и кристаллизуют из 0,26 мл цитратного буферного раствора с ацетоном (15 Я,) при рН 5,8 - 6,3. Получают 370 мг кристаллического инсулина с активностью 24 ед/мг.Предмет изобретенияСпособ получения кристаллического инсулина путем его сорбции из экстрактов инсулинсодержащего сырья на ионообменных смолах, отличающийся тем, что, с .целью упрощения технологии и повышения активности целевого продукта, первичный кислый экстракт поджелудочных желез пропускают через сульфокатионит, например, типа СДВТ в водородной форме, после сорбции смолу промывают 10органическим растворителем и буферным раствором (рН примерно 6,0 - 6,5), элюируют щелочным раствором, например 0,25 н. раствором аммиака, содержащим 10 - 200, ацетона, в элюате отделяют примеси при рН около 154,5 или 6,1 - 6,5, осаждают цинк-инсулин, отделяют от маточника и кристаллизуют.