Способ моделирования вич-инфекции

(я)5 6 09 В 23/28 ННОЕ ПАТЕНТНОЕ СР СВИДЕТЕЛЬСТВУ блиния итах АНИЕ ИЗОБ 21) 4899623/14 22) 04.01.91 46) 30.08.93. Бюл.М 32 71) Институт вирусологии им.Д;И.Ивановкого 72) А,Г.Коломиец, М,М.Гараев, Н.Д.Коломиц, В,И.Вотяков и Г.П.Добойская, Т.В,Саицкая, А.А.Ржанинова, В.Ф,Еремин С.А, Попов 6) Егапздепс воцзе тобез ащег 9 пц 1 ооз г А 0 гезеагсЬ/Сцгг,Сопипептз: Мерзеи. зсочегу апс ппоча 1, 1989, 3, М 1, р,4. 4) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВИЧ-ИН- ЕКЦИИ Изобретение относится к области медиины и может быть использовано для изучеия патогенеэа СПИД и разработки новых етодов диагностики и лечения заболеваия.Целью изобретения является приение к клиническому течению заболева а счет персистенции вируса в лимфоц рови, паренхиматоэных органов, ЦНС. ель достигается путем введения вируса в остный мозг.Известно, что в организме человекаИЧ. поражает Т-лимфоциты, поэтому ввеение его в орган, где формируются В-лимоциты не должно было бы приводить к аэвитию патологического процесса, В проивоположность этому, у животных неожи- анно развивается качественно новый атологический процесс, заключающийся в фформировании ВИЧ-инфекции и заболева, что является неожиданным. Таких данх в литературе нет..,Ж 1837355 А 1 к области медивляется получеодели инфекемого ВИЧ, на тных, Сущность лижении к клиевания эа счет нодефицита че- паренхиматозрных животных рь берцовой коь использовано ПИД и при разностики и лече(57) Изобретение относится цины. Целью изобретения я ние экспериментальной м ционного процесса, вызыва мелких лабораторных живо изобретения состоит в приб ническому течению забол персистенции вируса имму ловека в лимфоцитах крови ныхорганах, ЦНС лаборато путем введения вируса внут сти, Изобретения может быт при изучении патогенеза С работке новых методов диаг ния заболевания. Сущность способа заключается в следующей последовательности операций:1. Животное фиксируют.2. Волосяной покров в области бедра дезинфицируют.3, Вируссодержащий материал вводят шприцем в берцовую кость.П р и м е р 1, 5 морских свинок массой 150-200 г были заражены в трубчатые (берцовую) кость концентрированным образом ВИЧ 1 штамма ЕМВ с содержанием белка 5,3 мг/мл в дозе 0,1 мл. Через 2 месяца у двоих животных отмечено снижение массы, потускнение волосяного покрова, адинамия. Через 7 дней одно из пало, Животное М 2 погибло через 23 дня после первых клинических проявлений, при этом потеря в массе по сравнению с контролем составила 28. Животное М 3 погибло без каких-либо клинических проявлений заболевания через 3,7 месяца после заражения, Животные М 4 и М 5 наблюдались 6 месяцев без клиниче1837355 тные оставались здоровыми. При вирусологическом исследовании никаких признаков ВИЧ инфекции не выявлено.Как видно из примеров 1-3 у животных после заражения их ВИЧ в берцовую кость 25 развивается ВИЧ-инфекция, которая сопровождается образованием антител, диссеминацией вируса во все органы и ткани и на последнем этапе клинической манифестацией, Таким образом, в результате пред 30 ложенного способа удалось получить экспериментальную модель инфекционного процесса ВИЧ на мелких лабораторных животных. Эта модель может быть использована для изучения патогенеза СПИД и разработки методов диагностики и лечения. 35 Ф ор мул а и зоб рете н ия Способ моделирования ВИЧ-инфекции путем заражения лабораторных животных, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью приближения к клиническому течению заболевания за счет персистенции вируса в лимфоцитах крови, паренхимотозных органах, ЦНС заражение осуществляют введением инфицированного материала внутрь берцовой кости. 40 45 Составитель А, РжаниноваТехред М.Моргентал Корректор С, Лисина Редактор Заказ 2869 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного, комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 нических проявлений заболеваний, На вскрытии у свинки Мт 1 отмечено увеличение селезенки и лимфоузлов; В 2 - увеличение селезенки и пневмония; В 3 - увеличение брыжеечных лимфоуэлов, М 4 и М 5 - изменений,не выявлено. При исследовании сывороток на наличие антител к ВИЧ в .иммуноблотинге выявлены антитела к следующим белкам ВИЧ - М 1, 2 - 9 р 120, р 55/53, р 24- р 17: М 3 - 9 р 120, р 55/53, р 24; М 4 - р 66, р 55/53, р 24;М 5 - р 66, р 24; М 6 - р 24. При помощи цепной полимеразной реакЦии (РСВ) с праймерами 816, 817 и 818, 819 показано наличие интеграции генома ВИЧ 1 в ДНК лимфоцитов крови животных М 1, 2, 3, 4, При патоморфологическом исследовании в головном и спинном мозге - выраженная пролиферация макроглии, дегенеративные изменения в нейронах и их частичная гибель, образование много- ядерных клеток. Периваскулярная инфильтрация лимфоидными клетками, микроглиальные узелки (М 1, 2, 3). В селезенке - образование периартериальных фолликулов (М 1, 2, 3, 4), В лимфатических узлах - атрофия фолликулов с истощением паракортикальной зоны (й. 1, 2, 3, 4). В печени - дистрофия гепатоцитов, периваскулярная инфильтрация (М 1, 2, 3),Заключение: результаты серологического, молекулярно-биологического и морфологического исследований свидетельствуют о наличии у животных М 1, 2, 3, 4 ВИЧ-инфекции.П р и м е р 2,Три морских свинки массой120-150 граммов были заражены, как описано в примере 1, Через 2,8 месяца у животного ЬВ 1 отмечено резкое похудание (потеря в массе 20 ф ), развитие адинамии, спустя 3 дня свинка погибла при наличии пневмонии. Оставшиеся два животных по. гибли через 4, 5,5 месяца после заражения от истощения и развития пневмонии. Антитела в сыворотках крови были обнаружены у всех 3 животных к белкам цр 120, р 66, р 55/53, р 24. Методом РСВ геном ВИЧ в ДНК лимфоцитов обнаружен у животных М 1 и М 3, в клетках селезенки у морской свинки М 2. Морфологические изменения соответствовали описанным в примере Ь 1,Заключение; у всех животных этой группы установлено наличие ВИЧ-инфекции,П р и м е р 3. Три морских свинки, массой 100-200 г были заражены, как описано .в примере М 1, через 1,6 месяца животное М 1 погибло от диспепсии. Животное М 2 10 погибло через 3,7 месяца после зараженияот пневмонии. Животное М 3 оставалось клинически здоровым в течение всего периода наблюдения (6 мес.), Присутствие гена ВИЧ в ДНК клеток почки и селезенки отме чена у морских свинок М 1 и 2.П р и м е р 4. Пяти морским свинкам,массой 150 - 200 г как описано в примере 1 Ф 1 было введено плацебо (неинфицированные ВИЧ клетки и тимоген), На протяжении 20 всего периода наблюдения (8 мес,) живо