Способ нефелометрического определения количественного содержания белков в ячмене

ОПИСАН ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 181843 СОюз Сееетсиих Сециалиетичесиил Реепублинетельства14403 ависимое от авт,Сл, 42 Ь, 17/06 42 г, 9,01 5042/28 итет по делам МПК О 011 Ст 01 п УДК 663.421;543 43ПриоритетОпубликовано 21.1 т,1966. Бюллетень10Дата опубликования описания 15.И.1966 иаеоаетеи 13 и етирытийпли Оееетз Юиииетрев Авторыизобретения А. Кечек. Севру вител СПОСОБ НЕФЕЛ ИЧЕСТВЕННОГО ЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ В ЯЧМЕНЕ Заявлено 01,111.1965 (с присоединением заявки Известен нефелометрический способ определения количественного содержания белков в ячмене по авт. св,144039 на имя тех же заявителей.Сущность предлагаемого способа состоит в том, что, с целью определения качественного состава белковых веществ по их растворимости в различных растворителях, количественное определение белков каждой фракции производят после экстрагирования ее соответствующим растворителем.Способ осуществляют следующим образом.Определягот расчетный коэффициент белковых фракций по способу, описанному в авт. св.144039,С этой целью производят щелочную экстракциго нескольких (2 - 3) образцов ячменя с известной концентрацией белка, ранее определеннои по методу Кьельдаля.Из приготовленного экстракта исследуемого образца отбирают микропипеткой 0,2 лл и замутняют заранее приготовленный 2,5%-ный раствор сульфосалициловой кислоты, взятый в объеме 5 лл.Полученный мутный раствор наливают в нефелометрический стаканчик, сравнивают в нефелометре со стойким эталоном мутности; заранее приготовленным и прокалиброванным по стандартному способу, и определяют высоту столба мутного раствора. Для нахождения коэффициента среднюювысоту столба мутного раствора умножают на концентрацию белка в нем, Расчетный коэффициент для определения общего количест ва белка является средним арифметическимиз нескольких полученных таким же образом коэффициентов из взятых двух-трех образцов ячменя.Расчетный коэффициент белковых фракций О вычисляют путем деления полученного коэффициента общего белка на эмпирическое число 2,8, выведенное путем разведения экстрактов общего белка с учетом увеличения объема экстракта при замутнении.5 Далее приступают к экстрагированню белковых фракций в ячмене соответствующими растворителями.Вначале извлекают солерастворимую белков 1 ю фракцию. Для этого навеску тон 1 оиз" О мельченного материала растирают в фарфоровой ступке с небольшим количеством (2,5 лл) 5%-ного раствора сернокнслого калия. Затем к смеси доливают 2,5 дгл раствора той же соли и после перемешивания оставля ют на 30 лин для экстракции. После экстракции смесь снова растирают, переносят в пробирку и цептрнфугируют в течение 5 аан.Полученный солевой экстракт сливают вобычную пробирку, градуированную на 10 лл, 30 а к осадку добавляют 5 лл раствора серно181843 Предмет изобретения Составитель В. НижегородневаРедактор Р. С. Чистова Техред Л. К. Ткаченко Корректоры: Т, Н. Костиковаи В. В. Крылова Заказ 160616 Тираж 1800 Формат бу м. 60 Х 90/8 Объем 0,16 изд. л. ПодписноеЦНИИПИ Комитега по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д, 4 Типография, пр. Сапунова, 2 кислого калия и после перемешивания смеси оставляют на 15 л 1 ан на вторую экстракцию, После этого смесь центрифугируют и полученный экстракт приливают к первому экстракту, перемешивают и затем, в случае надобности, доливают до метки раствором этой же соли. Для экстракции спирторастворимой фракции белка к оставшемуся после солевой экстр акции осадку добавляют 5 мл 70 "о -ного спирта, взбалтывают и оставляют на 30 лик для экстракции, После экстракции спирторастворимой фракции смесь центрифугируют и сливают экстракт в градуированную на 10 лл пробирку.Далее проводят вторую спиртовую экстракцию.К, оставшемуся осадку после спиртовой экстракции добавляют 5 лл 0,05 и. раствора едкого патра и производят две щелочные экстракции. Из исследуемых экстрактов отбирают микропипеткой по 0,6 мл и замутняют ими заранее приготовленный 2,5;4-ный раствор сульфосалицило вой кислоты, взятой в объеме 5 жл, и энергично перемешивают до получения однородной мутной взвеси.Полученные мутные растворы сравниваютв пефелометре с прокалиброванным стойким5 эталоном мутности, измеряя при этом высоту каждого столба мутного раствора,Замутнение каждого исследуемого раствора производят в 2 - 3 раза, и для расчета берут среднее значение полученных высот стол 10 бов.Для вычисления количества белка в каждой фракции находят отношение ранее найденного коэффициента белковых фракций ксреднему значению полученной высоты стол 15 ба,Способ нефелометрического определения 20 количественного содержания белков в ячменепо авт. св.144039, отличающийся тем, что, с целью определения качественного состава белковых веществ по их растворимости в различных растворителях, количественное опре деление белков каждой фракции производятпосле экстрагнрования ее соответствующим растворителем.