Способ культивирования микроводорослей

(5)5 И ии растений им, ененко и И.П.Маси растений РАНСемененко В,Е, Инэ одноклеточных воство СССР12, 1990,концентраци ществляют с хому весу, о 200-300 Вт/ кращения прПовторнной биомасс де свещение с м 2, э культив ироста биома е эасевание й на свежей интенсивностью рование до прессы,ведут выращен- питательной среГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРК ПАТЕНТУ(56) Владимирова М.Г.,тенсивная светокультурдорослей, М., 1962.Авторское свидетелЬ. 1555354, кл, С 12 И 1 Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам культивирования микроводорослей, и может бытьиспользовано для получения биомассы,меченой стабильными изотопами, применяемой для изучения пространственнойструктуры природных молекул, их информационных превращений, функциональныхвзаимодействий и в медицинской диагностике,Цель изобретения - получение меченыхазотсодержащих соединений в биомассемикроводорослей.Это достигается новым способом культивирования микроводорослей, предусматривающем засев микроводорослей напитательной среде, содержащей изотопы,культивирование их при барботировании гэзовоэдушной смесью и освещении, причемв качестве изотопов используют изотоп Ъв аиде ээотнокислого натрия или калия в(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРОВОДОРОСЛЕЙ(57) Использование: биотехнология, получение биомассы микроводорослей. Сущность изобретения; готовят питательную среду, содержащую азотнокислый калий или натрий, меченый изотопом 1 Ъ, в концентрации 1,5-2,0 г/л и другие соли, необходимые для роста водорослей, среду засевают водорослями, такими как СЫогеа зр., Яр)го)па р)а 1 епзз, с плотностью 30-50 мг/л по сухому весу и культивируют при освещении 250- 300 Вт/м до прекращения прироста биомассы. Способ позволяет получить биомассу с равномечеными азотсодержащими соединениями. 1,5-2,0 г/л, засев среды осулотностью 30-50 мг/л по суЦьП р и м е р 1, Культуру микроводоросли в СЫоге)а зр К из коллекции ИфР АН СССР, в количестве 30 мг/л по сухому весу засевают на питатель 1 ную среду следующего состава (г/л): К йОЗ,0; М 9307 Н 20-2,5;кнгоо.1,го; оояотн,о-о.ооо, одтд -,Р 0,037; раствор микроэлементов 1 мл. Выра- (Д щивание микроводоросли проводят при 36 С с интенсивностью освещения 250 Вт/м круклосуточно при непрерывном барботировании воздушной смесью до прекращения прироста биомассы. Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна13 мг/л. Полученную биомассу исследуют; белок - 44;6, свободные аминокислоты - 8,7; нуклеиновые кислоты - 1,1; пигменты - 3,2; липиды - 16, углеводы - 307 ь,П р и м е р 2, Культуру микроводоросли СЫогеИа С, из коллекции ИФР АИ СССР, в количестве 40 мг/л по сухому весу эасеивают на питательную-среду следующего состава (г/л): К 15 МОэ - 2,0; М 980 а 7 Н 20 -2,25; КН 2 РОа - 0,63; Ре 8047 Н 20 - 0,005; ЕДТА - 0,037; раствор микроэлементов 1 мл. Выращивание микроводоросли проводят при 36 С с интенсивностью освещения 300 Вт/м круглосуточно при непрерывном бэрботировании гаэовоэдушной смесью Щ СО 2) до прекращения прироста биомассы, Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна 21 мг/л. Полученную биомассу исследуют: белок - 48; свободные аминокислоты - 5,2; нуклеиновые кислоты - 1,5; пигменты - 1,5; липиды - 18; углеводы - 25,8.П р и м е р 3. Культуру микроводоросли Зругц 11 па р 1 атепз 1 з из коллекции ИФР АН СССР в количестве ЬГ мг/л по сухому весу засевают на питательную соеду следующего состава (г/л): Ма ЧОэ - 1,8; МаНСОа - 16,8; М 9504+7 Н 20 . 0,2: К 2 НРО 4 - 0,5, К 2504 - 1,0; Ма О 1,0 СэС 12 - 0,04; Ге 3047 Н 20 - 0,01; =ДТА - 0,08; раствор микроэлементов 1 мл Выращивание микро- водоросли проводя г,ри 31 С с интенсивностью освещения 25 ) Вт/м круглосуточно2при непрерывном барботировании воздушной смесью до прек; ащения прироста биомассы. Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна 28 мг/л. Полученную биомассу исследуют; белок - 63, свободные аминокислоты - 4,4; нуклеино вые кислоты - 1,1%; пигменты - 2,5 флипи ды - 10; углеводы - 12,, П р и м е р 4. Культуру:аикроводоросл. ЗругоПпа гп 1 п 1 аа из коллекции ИФР АН СССР в количестве 40 мг/л по сухому весу засевают на питательную среду следующ".- госостава(г/л), Ма МОэ,8: МаНСОаа М 930 а 7 НгО - 0,2; К 2 НРОа 0,5; К 23 г.0,5; МаС - 1,0; СаО 2 - О,п 4еЯОа 7 НрС,01; ЕДТА - 0,08 раствор микрсэлемен;ов 1 мл. Выращивание микроводоросли проводят при 26 С с интенсивн стью освещения 200 Вт/м 2 круглосуточнс и ри непрерывном барботировании воздушнсй смесью до пре5 10 15 20 25 30 35 кращения прироста биомассы, Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна 22 мг/л. Полученную биомассу исследуют: белок - 52 , свободные аминокислоты - 9,4; нуклеиновые кислоты - 2,0%; пигменты - 3,0, липиды - 15,6; углеводы - 18%.П р и м е р 5. Культуру микроводоросли СЫоге 11 а зр К, полученную по примеру 1, в количестве 500 мг/л по сухому весу засевают на питательную среду следующего состава (г/л); К МОэ - 2,0; М 93047 НгО - 2,5; КН 2 РОа - 1,25; РеЗОа 7 Н 20 - 0,009; ЕДТА - 0,037; раствор микроэлементов 1 мл, Выращивание микроводоросли проводят при 36 фС с интенсивностью освещения 250 Вт/м круглосуточно при непрерывном барботировэнии воздушной смесью до прекращения прироста биомассы. Полученную биомассу исследуют, белок - 44%; свободные аминокислоты - 8,7 о ; нуклеиновые кислоты - 1,1%; пигменты 3,2%; липиды - 16; углеводы - 30%,Результаты примеров 1-4 свидетельствуют о том, что заявляемый способ культивирования микроводорослей позволяет получить биомассу микроводорослей, содержащую меченые азотсодержащие соединению, Потери изотопа азота не превышают 1,4.Пример 5 доказывает воэможность использования клеток микроводорослей, содержащих меченые азотсодержащие соединения, в качестве инокулята для повторных засевов на среду, содержащую.изотоп азота,Ф ор мул а и зоб рете н и я Способ культивирования микроводорослей, предусматривающий посев микро- водорослей на питательную среду, содержащую изотопы, культивирование их при барботировании гаэовоздушной смесьюиосвещении, отличающийся тем, что, с целью получения меченых азотсодержащих соединений в биомассе микроводорослей, из изотоповв используют изотопы 15 М в виде аэотнокислого натрия или калия в концентрации 1,5-2,0 г/л, посев на среду осуществляют с плотностью 30- 50 мг/л по сухому. весу, освещение - с интенсивностью 200-300 Вт/м, а культивирова 2ние - дс прекращения прироста биомассы,