Реагент для обнаружения белка в моче

/16 23) Приоритет 2) 12. 03.7 Государстеенный комитет Совета Ниннстроа СССР по делам иэооретений и отнрытий(45) публикования о ния 1 Ь.11 ранцыВернер Гюгляйн Вой и Петер Рикман(72) Авторы изобретени ганг Вернер,-иггерсйорф,Ханс-Георг Ре(54) РЕАГЕНТ ДЛЯ В качестве способного всасывать носителя применяют фильтровальную бумагу, но также может быть применен волокнистый прочес, асбест и подобные материалы. Полипропиленгликоли, которые используют для реагента, должны иметь молекулярный вес примерно от 500 до 10000, могут быть использованы линейные полипропиленгликоли, блокполимерные продукты, полученные из окиси пропилена и окиси этилена, а также разветвленные соединения, в которых окись пропилена заполимеризована с такими многоатомными спиртами, как, например, триметилолпропан, глицерин или пентаэритрит, и которые в некоторых случаях модифицированы дополнительно окисью этилена. В качестве индикатора используют октагалогенсульфофталеины, например октабромфенолсульфофталеин (тетрабромфеноловый синий), октахлорфенолсульфофталеин (тетрахлорфеноловый синий), а также смешанные галогенированные соединения, например 3,3" - 5,5" -тетрабромфенол,4.5,6-тетрахлорсульфофталеин, 3,3" - 5,5"-тетрахлорфенол,4,5,6-тетрабромсульфофталеин и 3,3 -дихлор,5"-дибромфенол,4,5,6-тетрахл орсульфофтал си н. Изобретение ким средствам и в диагностике по Известен реа ка в моче, состо тора и буфера ( Однако изве реакцию как с продуктами.относитс может чечных гент длядиагностичесиспользовано еваний.ружения белтеля, индикак ыть або, она ос ящии и 1.стный р белком,еаге ак и вступаетс побочными ляется повышение путем устранения 1 О с побочными проЭта цель дости гает качестве индикатора енсульфофталеии д жит полипропиленгликатель при следующем диентов в г на 100 млОктагалогенсульф офталеинПолипропиленгликольБуферСмачиватель ся тем, чтсодержитополнительоль, а таксоотношенраствора: о реагент октагалоно содерже смачиии ингре,2 0,5 - 510 - 300,11,0 Целью изобретенияспецифичности реакци взаимодействия реаген дуктами. 22) Заявлено 05,03.76 (21)633501 1 - 215 - 200,05 - 0,1 0,2 - 0,5 Особенно предпочтительными являются индикаторы, которые содержат в положениях,З,3,5,5"четыре атома хлора,Реагент для обнаружения белка требует применения сильного буфера, который да. же при погружении в содержащуюся в те. ле жидкость, имеющую другое значение рН, сохраняет постоянное значение рН. При при. менении сульфофталенновых индикаторов буфер устанавливают на значение рН, которое лежит несколько ниже области рН перехода индикатора и тогда индикатор мало окрашивается, По отношению к очень малым концентрациям белка лучшая чувствительность достигается тогда, когда значение рН буфера лежит в области перехода индикатора, рН должно быть от 2,5 до 4,5. При более низких значениях рН в большинстве случаев происходит ослабление белковой реакции при большем усилении реак. цик с азотистыми основаниями и обычной мочей. Предпочтительное значение рН. зависит от индикатора, а также от типа про. пиленгликоля и прочих реагентов, при которых значение рН и количество буфера изменяют таким образом, чтобы индикатор после погружения в свободную от присутствия белка мочу имел еще чистую окраску,В качестве буфера могут быть использованы смеси, состоящие кз лимонной, яблоч, Пропнленглкколь 0,5 - 5,Буфер 10 - 30 Индикатор 0,02 - 0,2 Поверхностно-активное вспомогательноесредство О,О - 1,0 В качестве растворителя для ингредиентов применяют смеси, состоящие кз воды и низшего спирта, в которых они растворимы, Но можно также сначала осуществлять предварительную пропктку буфером из воды и после этого производить последующую пропитку остальными составными частями из органического раствора. Готовый реагент может применяться известным способом, может быть приклеен кручке или запечатан между синтетическимполимером и сеткой с мелкими отверстиями.Пример 1. Фильтровальную бумагу(Шляйхер и Шюль 2316) последовательнопропитывают следующими двумя растворамии к в каждом случае производят сушкупри 60 С,Раствор 1..Цимонная кислота,моиогкдрат,г 20Ам миак, 25%-ный вод.кый раствор, мл Около 1 ОВода дистиллированная, мл До 100Раствор имеет значение рН 4,1 ной, винной кислот и других, а также. изих щелочных или аммокийных солей.Для лучшего диспергирования добавляют поверхностно-актн вные вещества. Для5 этого могут быть применены неионогенныеагенты смачивания, а именно этоксклированные спирты жирного ряда и фенолы с1 - 4 оксиэтиленовымн группами.Агенты смачивания аннокного типа усиливают реакцию с азотистыми основаниями,в то время как поверхностно-активкые вещества катионного типа вызывают сильноискаженную положительную реакцию индикатора в том случае, когда применяют неочень кислый буфер, который тормозит бел.1 ковую реакцию. По этой причине эти поверхностно-активные вещества не пригодны,Дополнительно можно также вводитьагенты набухания кли загустители, которые29могут затруднять сход реагентов с носителя,такими агентами может быть гидрооксиэтнлцеллюлоза и гкдроксипропклцеллюлоза.Могут быть также добавлены в реагентком плексообразователи, например сульфатм агния.25 Про пилекгликолн, а также остальные составные части применяют в следующих количествах, в расчете ка 100 мл пронитывающего раствора, г:предпочтительна 35Раствор 2.3,3",5,5 -тетрахлорфенол,4,5,6-тетрабромсульфофталеин (рН =3,9), мг 5046 Полкпропиленгликольсо средиим молекулярным весом 1200 (Полигликоль П 1200 (Р), г 2Меткловый спирт, мл до 100Реагект реагирует с нормальной мочой,принимая желтый цвет, а с содержащейальбумин мочой цринимает окраску от зеленой до сине-зеленой с сильной интенсивностью.Моча с содержанием хинина примерно50 100 мг% дает такую же зеленую окраску,что и моча с содержанием 5 мг%. альбумина,Реактивная бумага такого же состава,но без пропиленглнколя реагирует с кор мальной мочой, принимая зеленую окраску.Зеленая окраска от 5 мг% альбумина с на.дежностью ке может быть отличека от этой отрицательной окраски. Поэтому сравнивают с реакцией 25 мг альбумина; уже прн 63350150 До 100 Около 16 0,6 Формула изобретения мерно 25 мг% хинина имитируют это количест о белка.случае обычного быстрого теста 25 мго хинина уже имитируют присутствие 5 мг% альбумина.5Пример 2. Фильтровальную бумагу(Шляйхер и Шюль 2316) последовательнопропитывают следующими двумя растворами и производят сушку при 60.С.Раствор 1.16Лимонная кислота,моногидрат, г 20Аммиак, 25%-ный водныйраствор, мл Около 6Вода дистиллированная, мл15рН раствора устанавливают на значение 3, .Раствор 2.3 ,3",5,5",3,4,5,6-0 ктабромфеиолсул ьфофталеин (тетрабромфеноловый синий, рН =3,6),мг 50Полипропиленгликоль,средний молекулярныивес 2000, г 1 .2Нонилфенол, этерифицирова нный 1 - 2 окси.этиленовыми остатками,г 0,4Метиловцй спирт, мл До 100Оба указанных раствора применяют также с половинным количеством растворителя и перед пропиткой производят их обьединение,Реагент реагирует с нормальной мочой, принимая желтую окраску, и с содержащей альбумин мочой реагирует, принимая зеленую окраску высокой интенсивности.Моча с содержанием хинина примерно 50 мг% дает такую же зеленую окраску, как и моча с 5 мг% альбумина, 40Реагент такого же состава, но без пропиленгликоля реагирует с нормальной мочой, принимая слабую зеленую окраску. Примерно 10 мг % хинина в случае этой реактивной бумаги имитирует 5 мг% альбумина.Если вместо нонилфенола, этерифицированного 1 - 2 оксиэтиленовыми остатками, применяют 0,4 г кокосового спирта, этерифицнрованного 2 окснэтиленовыми остатка ми, нли 0,2 г трнбутилфенола, этерифицированногб 4 оксиэтиленовыми остатками, то получают практически идентичный реагент.Пример 3. Фнльтровальную бумагу (Шляйхер и Шюль 2316) сначала пропитывают 15%-ным водным раствором натрий дигидроцитрата (рН 3,5) и сушат при 60 С. Последующую пропнтку производят раствором следующего состава, после чего каждый раз производят сушку при 60 С: А. 3 ,3",5 ,5 ,3,4,5,6.0 кта- хлорфенолсульфофталени, мг 50Полипропиленглнколь, г 1Метиловый си яр гмл До 00Свойства полученного реагента соответствуют свойствам реагента, полученного впримере .Б, 3,3"-Дибром,5-днхлорфенил,4,5,6-тетрахлорсульфофталеин, мгДесмофен 7200(й), г 1Иетиловцй спирт, мл До 100Свойства полученного реагента соответствуют свойствам бумаги, полученной в примере 2.С. 3,3,5,5 -Тетрабромфенол -3,4,5,б-тетрахлорсульфофталеин, м г 50Десмофен 7200(Й), г 1Метиловый спирт, мл До 100Свойства полученного реагента соответствуют свойствам бумаги, полученной в примере 2.Пример 4. Фильтровальную бумагу(Шляйхер и Шюль 2316) пропитывают при.веденнцми ниже двумя растворами и производят сушку прн 60 С,Раствор 1.Чблочная кислота. г 15б н,раствор гидроокиси натрия, млГидроксиэтилцеллюлоза Натрозоль2500 (К), г 2Вода днстиллированая,мл До 100рН раствора устанавливают на значении 3,5.Раствор 2.Тетрабромфеноловыйсиний, гПолигликоль Р 1200(К), г 3Хлороформ До 100Свойства полученного реагента соответствуют свойствам бумаги, полученной в примере 2.Предла гаемый реагент обладает высокой чувствительностью по отношению к белку, не вступая во взаимодействие с побоч-.ными продуктами.,Реагент для обнаружения белка в моче, состоящий из носителя, индикатора и буфера, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности реакции путем устранения взаимодействия реагента с побочн ымн продуктами, в качестве и ндикатора63350 Составитель С. Малютина Редактор Т. Девятко Техред О. Луговая Корректор М. немчик Заказ 6426/50 Тираж 1070 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4содержит октагалогенсульфофталеин, дополнительно содержит полипропиленгликоль, а также смачиватель, при следующем соотнощении ингредиентов в г на 100 мл раствора:Октагалогенсульфофталеин 0,02 - 0,2 Полипропиленгликоль 0,5 - 5 Буфер 10 - 30 Смачиватель 0,1 - 1,0 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. Составлено В. Е. Предтеченским. Медицина, 1964, с. 351.