Среда для гипотермического хранения изолированных гепатоцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 51 51)5 С 12 1 к 1 5/ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР САНИЕ ИЗОБРЕТЕНРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ АВ 2(54) СРЕДА ДЛЯ ГИПОтЕРМИЧЕСКО ХРАНЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ ГЕПАТ ЦИТОВ и икри- (57) Использование; биотехнология. С ность изобретения: для повышения мор иенко, функциональной сохранности гепатоци используют среду, которая содержит сле ющие компоненты, г/л, трис-НС 1-буфе рН 7,4: хлористый калий 0,300-0,400; х(71) Институт проблем криобиологиомедицицы АН УССР(56) Авторское свидетельство СССРМ 1053803, кл, А 01 1/02, 1983,Укр. биохимический журн, 61.1, с в а,л евиеВ(ЛИзобретение относится к биотехноло- гации печени пластинчатым пестиком при гии, в частности к способам длительного возвратно-поступальном движении его со хранения изолированных гепатоцитов вус- " скоростью оборота вала 3000 об/мин.Я ловиях гипотермии, Свежевыделенные клетки оценивали поИзвестно использование среды 199 для, . степени интактности плазматической мембгипотермического хранения гепатоцитбв, раны и метаболической активности по слеОднако эта среда не обеспечиваетвысо.- дующим тестам, окрашивание клеток кой морфофункциональной сохранности ге-0,60-ным раствором трипанового синего в (Л патоцитов, условиях 10-15-минутной инкубации при ОНаиболее близкой к изобретению явля- комнатной температуре, скорость эндпгенется среда для гипотермического хранения:. ного дыхания, содержание АТФ, степень гепатоцитов, включающая на 1 л трис-НС 1- связанности ЛДГ, Г 1 осле этого клеткй пере- "ф ф буфера: сахароза 0,125 бЛ; хлористый на- водили в стерильные растворы среды, разтрий 0,075 М; хлористый кальций 1,2 М, литой в бакпечатки 5-10 мл и содержащейОднако иееестнек среде не ооеспениееет следующие компоненты мес.ч. клористый )2 и высокой морфофункциональной сохранности калий 0,300-0,400; хлористый магний 0,100- гепатоцитов, что обусловлено наличием в ней 0,200; хлористый кальций 0,100-0,200; фосИаС 1 неблагоприятно влияющего на клетки. Форнокислый калий 0,050-0,100;Целью изобретения является повыше- фосфорнокислый натрий О,О 50-0,100; сахание морфофункциональной сохранности роза 70,0-100,0; альбумин 5,0-10,0; трисгепатоцитов. НС-буфер - до 1000 мл,П р и и е р. Выделение гепатоцитов Концечтрация клеток составляла проводили неферментативным методом с . (5-10) 10 кл/мл. Еакпечатки хранили в использованием ЭДТА и щадящей дезагре- течение 3 сут в битовом холодильнике. Тем1756351 Формула изобретения Таблицэ 1 Метаболические параметры изолированных гепатоцитов до и после 3 сут гипотермического хранения (л=б)лиц Метаболическое состояние консервированных клеток после нормотерческой инкубации (о=б) После инк ба оинк ба ии Параметры Из вестсеа длагаесеаПредлагаемаяс е а звестнаяс е а Жизнеспособност Скорость зндог нМОгlмлн клеток Содержание АТФ, Степень связанно 1 мг белка,% енног,3 й 2,О 10 +2,10 22 15 й 2 б,б ф.3,533 й 31 М/млн клеток ти ЛДГ, мкгl 4,3 ф 0,3 3,2 й 49+05 З,О + Составитель А.РоманченкоТехред М.Моргентал Корректор С.Патруш едактор .Н,Рогулич Заказ 3062 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКЯТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4 й Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужго пература раствора 4-5 С, Стерилизацию среды проводили с использованием микро- пористых капроновых мембран,Результаты представлены в табл,1, Из табл.1 следует, что предлагаемая среда обеспечивает более высокую морфофункциональную сохранность гепатоцитов, чем известная, Это подтверждается тем, что изолированные гепатоциты в заявляемой среде хорошо- переносят нормотермическую инкубацию (табл,2),ПолучейнЫбфезультаты свидетельствуют о том, что предлагаемая среда позволяет сохранять структурно-метаболический статус гепатоцитов в процессе хранения их при 4 ОС в течение 3 сут, которые являются максимальны сроком этой системы клеток,Среда для гипотермического храненияизолированных гепатоцитов включающая 5 хлористый натрий, хлористый кальций исахарозу, о т л и ч а ю щ а я с я тем. что, с целью повышения морфофункциональной сохранности, она дополнительно содержит хлористый калий, хлористый магний, 10 фосфорнокислый калий, фосфарнокислыйнатрий, альбумин при следующих соотношениях, мас.: хлористый калий 0,300- 0,400; хлористый магний 0,100-0,200; хлористый кальций 0,100-0,200; фосфорно кислый калий 0,050-0,100; фосфорнокислыйнатрий 0,050 - 0,100; сахароза 70,0-100,0; альбумин 5,00-1 ОЯ; вода - до 1000 мл,