Способ определения микотоксинов в кормах

СОЮЗ СОВЕ ТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 1664 А 1 9) ЯОПИСА ТЕНИ иИДЕ АВТОРСКОМ а фф,1". ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(71) Казахский научно-исследовательскийветеринарный институт Восточного отделения ВАСХНИЛ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ В КОРМАХ Изобретение относится к ветеринарии,в частности к микотоксикологии,Известен способ определения микотоксинов в кормах, который заключается вскармливании цйплятам токсического корма с последующим наблюдением за состоя: нием птицы.Недостатком данного сйособа является .длительный срок наблюдения за состоянием птицы.Цель изобретения - идентификация вида микотоксина в корме.Цель достигается тем, что готовятводную вытяжку в режиме встряхивания в течение 4 ч, из полученной вытяжки отделяютсупернатант при 17 000 об/мин в течение 15мин и вводят курам, предварительно сенсибилизированным мицелиальными антйгенами из грибов рода Азрегд Пцз, РепСВцв иРцзагйа, а микОтоксин идентифицируют поналичию аллергии.П р и м е р 1. Для исследований необходимо иметь 8 групп кур по 10 голов в каждойв возрасте 4-8 мес. Сенсибилизацию провочас2(57) Изобретение относится к ветеринарной микотоксикологии и может быть использовано для определения микотоксинов в кормах. Сущность изобретения: из исследуемого корма готовят водную йьттяжку в режиме встряхивания в теченйе 4 ч, отделяют супернатан при 17000 об/мин и вводят курам, которые предварительно сенсибилизированы мицелиальнымй антигенами из грибов родов аспергиллюс, пенициллиум, фузариум, а результат учитывают по наличию аллергической реакции. 1 табл. дят путем введения полного мйцелйальНогоантигена внутримышечно в область киля вдозе 2,5 мл. 1-я группа кур сенСибилизирована анти- геном гриба Аспергиллюс фумигатус; 2-я группа кур - антигеном Аспергиллюс фла- вус; 3-я группа кур - антигейом Аспергиллюс нигер; 4-я группа кур - антигеном Пенициллиум гризео-розеум 5-я группа кур (Л - антигеном Пенициллиум исландикум; 6-я фф группа кур - антигеном Фузариум грамина- Ос рум; 7-я группа кур - антигеном Фузариум монилиформе; 8-я группа кур - контрольная . д группа, птица не сенсибилизирована, получают доброкачественный корм.Все птицы содержатся отдельно по д группам. У птиц контрольной группы отсут-.ствуют аллергические реакции на стайдартный аллерген из чистых грибов.. П р и м е р 2, Аллерген (надосадочная жидкость экстракта подозреваемого корма) вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл в правую бородку курам каждой из 8 групп птиц, а левая служит контролем. Результаты учиты1751664 вают через 18 ч. Наличие положительных реакций у птиц 8-ой груп пь свидетельствует о наличии токсинов в комбикорме, а соответствующая группа птиц указывает на вид гриба-продуцента токсинов.По характеру аллергических реакций можно определить степень токсичности пробы комбикорма.Приотсутствии реакции на бородке кур - корм доброкачественный и скармливается без ограничений.При сомнительной реакции - отек ограничен, бородка утолщается в 1,5 - 2;0 раза по сравнению с контрольной. Корм слаботоксичен и скармливается в смеси с доброкачественным (1;1).Положительная аллергическая реакция характеризуется наличием диффузного отека, бородка увеличена, утолщэется в 2 - 3 раза по сравнению с контрольной, Корм токсичен подвергается детоксикации или скэрмливается в смеси с доброкачественным в соотношении 1;3,Резко положительная аллергическая реакция характеризуется наличием диффузного отека, увеличением бородки в 3,0-5,0 раз по сравнению с контрольной, болезненность. Корм высокотоксичен. Весь корм подвергает детоксикации или удаляется из рациона, Зависимость токсичности корма от характера аллергических реакций приведена в таблице.Для приготовления аллергенов-вытяжек гго предложенному методу можно использовано эталонные или любые полевые штаммы указанных видов грибов. обладающие выраженной токсигенностью, В пробу пораженного зерна в стерильных условиях вносим 100 мл стерильной дистиллированной воды, вначале механически встряхиваем в течение 4-6 мин, а затем колбы с содержимым переносим на аппарат "Встряхиватель" и зкстрагируем в течение 4 ч, По окончании экстрагирования фильтровали через ватно-марлевый фильтр, бумажный фильтр, Полученный экстракт центрифугировали при 2 режимах: 6 тыс. об/мин в теУтолщение бородок Характер аллергических ре.акцийОтсутствие реакции Сомнительная Положительная Резко положительнаяНе токсичен Слаботоксичен Токсичен Высокотоксиченв 1,5-2,0 раза в 2,0-3,0 раза в 30-50 азэ Степень токсичности корма чение 30 мин и 17 тыс, об/мин в течение 15 мин. Голученный супернатант сливали во флаконы емкостью 50-100 мл, стерилизовэ.ли методом ти ндал из ации. П риготовлен н ый 5, аллерген-вытяжку использовали для выявления токсинов грибов в кормах.Партии зернофуража(комбикорма), вытяжки из которых показали положительный результат аллергических реакций на сенси билизированных курах, необходимо подвергнуть обезвреживанию или скармливать.смешивая с доброкачественным в соотношении 1:3 - 1:5 в зависимости от уровня его токсичности, что можно определить по ха: 15 рактеру отека бородок у птиц.Таким образом, можно заключить, что впредлагаемом способе применения аллергенов для диагностики микотоксикозов птиц в качестве определителя микотоксинов в 20 кормах повышается специфичность и эффективности аллергена, что можно проследить по степени и характеру аллергических реакций, что дает возможность выявить пораженный корм и установить вид гриба, яв ляющегося причиной отравления изаболевания птиц,Предлагаемый способ приготовленияисключает применение растворов химических веществ для осаждения, промывания 30 аллергенов, что ускоряет и упрощает технологию приготовления его.Формула изобретения Способ опреДеления микотоксинов вкормах, включающий приготовление вытяж ки из исследуемых образцов кормов с последующими введением полученного аллергена в бородку кур и оценкой результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью идентификации вида микотоксина, готовят 40 водную вытяжкув режиме встряхивания втечение 4 ч, изполученной вытяжки отделяют супернатант при 17 000 об/мин в течение 15 мин и вводят курам, предварительно сенсибилизировэнным мицелиальными антиге нами из грибов рода Азрегооз, Репсапи Рщагот, а микотоксин идентифицируют по наличию аллергии.