Способ определения фосфатазной активности микроорганизмов

,06 - 6,25 ,58 - 7,81 18,18, штрих текло, темпеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР САН Е ИЗОБР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 21) 4807319/1322) 27.03.9046) 15.04.92. Бюл, М 1471) Кишиневский государственнцинский институт72) Н,Н.Морарь, В.М,Никитин, Фца и В.Д.Олареску53) 576.8.093.4088.8)56) Никитин В.М. Справочник метхимической экспресс-индикацииКишинев: Картя Молдовеняскэ, 1954) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГА относится к медицинской частности к способам опазной активности микроИзобретениемикробиологии, вределения фосфаторганизмов.Цель изобретения - ускорение споопределения фосфатазной активностироорганизмов.Для осуществления способ исслмую микробную культуру суспендирукапле физраствора в присутствии среддержащей дополнительно полиэтилеколь 4000, сахарозу, бычий сыворотоальбумин и глицерин при следующемношении компонентов, мас. о:Полиэтиленгликоль 6Сахароза . 7Бычий сывороточныйальбумин 6Глицерин 7Фенолфталеинфосфатнатрия 15,63 -и выполненной в виде карандаша,которого. наносят на предметное ссмесь инкубируют при оптимальной 51)5 С 12 0 1/04, 1/42(57) Использование:медицинская микробиология, определение фосфатазной активности микроорганизмов. Сущность: микробную культуру суспендируют в капле физраствора в присутствии среды, выполненной в виде карандаша, Смесь инкубируют 15-20 мин, подщелачивают введением бумажного сухого диска, пропитанного гипероксидом калия, По изменению окраски диска учитывают результаты опыта. Среда содержит (в мас,ф): полиэтиленгликоль 4000 60,6 - 62,5: сахарозу 7,58-7,81; бычий сывороточный альбумин 6,06-6,25; глицерин 7,58-7,81; фенолфталеинфосфат натрия 15,63-18,18. ратуре 15 - 20 мин, подщелачивают введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта.Для осуществления способа предварительно готовят компоненты необходимые для его постановки: субстратный карандаш, содержащий в качестве специфического субстрата фенолфталеинфосфат натрия, и бумажные диски, пропитанные гипероксидом калия для учета результатов опыта,П р и м е р, Для приготовления субстрат- ного карандаша в фарфоровую ступку последовательно вносят полиэтиленгликоль 4000 2 г, сахарозу 0,25 г, бычий сывороточный альбумин 0,15 г и тщательно растирают 10 мин до получения мелкой пудры. Затем ступку вносят Ь мл 10-ного раствора фенолфталеинфосфата натрия и 0,2 мл глицерина и продолжают растирать под струей теплого воздуха до образования однородной массы вязкой консистенции, которую формуют в виде карандаша и оставляют на 5 сут при 4 С для стабилизации физико-хи1726516 Для определения фосфатазной активности микроорганизмов на чистое предметное стекло наносят субстратным карандашом штрих длиной до 1 см. Затем на штрих наносят каплю физраствора и в ней эмульгируют полную бактериологическую петлю суточной агаровой исследуемой микробной культуры, Предметное стекло помещают во влажную камеру чашки Петри и инкубируют при 37 С 15-20 мин, после чего извлекают чашку из термостата и вносят в культурально-субстратную смесь бумажный диск, пропитанный гипероксидом калия, Учет результатов опыта проводят по хромогенной реакции. При положительном результате диск мгновенно окрашивается в розовый цвет вследствие взаимодействия фенолфталеина с гипероксидом калия. При 50 Составитель Н,МорарьТехред М.Моргентал Корректор И,Муска Редактор Н.Горват Заказ 1249 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 мическ их свойств. Субстрат н ый кара нда ш приобретает твердопластичную консистенцию, имеет белый цвет и обладает хорошими пишущими свойствами по стеклу, фарфору и другим поверхностям.Все субстратные карандаши на фосфатазу, содержащие ингредиенты в пределах граничных значений их количественного содержания, изготовляются строго аналогично приведенному примеру и обладают хорошими пишущими свойствами, пластичностью, длительной сохранностью и обеспечивают высокую скорость прохождения реакции.Бумажные диски для учета результатов опыта готовят следующим образом.Берут обеззоленный фильтр площадью 70 - 80 см, опускают в чашку Петри с 1 гным раствором гипероксида калия и выдерживают 3 мин для равномерного пропитывания щелочью, затем диск высушивают и разрезают на диски или квадратные пластины площадью 1 см и хранят в темном, сухом месте при комнатной температуре,отрицательном результате диск сохраняет инициальную белую окраску.Сравнительное определение фосфатазной активности микроорганизмов с по мощью субстратного карандаша иклассическим способами 13 музейных и 351 клинических штаммов показало 100-ное совпадение результатов, что свидетельствует о высокой специфичности способа.10 Кроме того, способ отличается экспрессностью анализа, экономичностью и простотой в постановке, что делает его доступным для любой лаборатории.Формула изобретения 15 Способ определения фосфатазной активности микроорганизмов, предусматривающий внесение исследуемой культуры в среду, содержащую субстрат - фенолфталеинфосфат натрия, инкубирование получен ной смеси при оптимальной температуре,подщелачивание и учет результатов по хромогенной реакции, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения способа, исследуемую культуру суспендируют в капле физ раствора в присутствии среды,дополнительно содержащей полиэтиленгликоль 4000, сахарозу, бычий сывороточный альбумин и глицерин при следующем соотношении компонентов, мас. О :30 Полиэтиленгликоль 4000 60,6 - 62,5 Сахароза 7,58 - 7,81 Бычий сывороточныйальбумин 6,06 - 6,25 35 Глицерин 7,58 - 7,81Фенолфталеинфосфатнатрия 15,63 - 18,18 .и выполненной в виде карандаша, штрих которого наносят на предметное стекло, 40 смесь инкубируют 15 - 20 мин, подщелачивание проводят введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта.45