Способ выделения растительных клеточных ядер

(5)5 С 12 й 9/50 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ялитка 20%олаС 2аС; выхода ремен ения, ихся, 1- невных ей пще- Москови сорта вировали АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт биологии Башкирского научного центра Уральского отделения АН СССР(56) Маринова Е. и Калева С. Современниметоди за изолиране на ядра от висши растения. Физиология на растенията, 1983, т. 9,М 3, с. 89-90.(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РАСТИТЕЛЬН ЫХ КЛ ЕТОЧ Н ЬХ ЯДЕР(57) Изобретение относится к физиологии ибиохимии растений и может быть применено при анализе механизмов молекулярнойбиологии развития, а именно в исследоваИзобретение относится к физиологии и биохимии растений и может быть применено при анализе механизмов молекулярной биологии развития, а именно в исследовании взаимосвязи структурно-функциональных Элементов клеточных ядер в процессе развертывания генетических программ. Цель изобретения - повышение очищенных клеточных ядер с однов ным сохранением их нативности. Пример осуществления изобрет Работа проводилась на покоящ 2-дневных проростках, а также 3-4-д тканях колеоптилей, листьев, корн ниц Мироновской яровой и озимой,ской - 35, ржи Чишминской озимой Чулпан. Проростки и ткани консер при 1 - 250 С в 80 - 90% глицерине, нии взаимосвязи структурно-функциональных элементов клеточных ядер в процессе развертывания генетических программ. Цель изобретения - повышение выхода очищенных клеточных ядер с одновременным сохранением внутриядерной ферментативной активности и физиологических свойств структурно-функциональных элементов клеточных ядер. Для достижения цели первоначально производят консервацию растительных тканей в 80-90% глицерине с последующей гомогениэацией в забуференной 20% глицериновой среде для выделения клеточных ядер, очистку которьх производят через пятислойный (50, 60, 70, 80, 90 мас.%/обьем) забуференный глицериновый градиент,Ядра из растительн х тканеи выдел путем трехступенчатойомогенизации ни 7 с, 15 с, 45 с при 15000 об/мин в глицерине, содержащем 0,02 М триэтан мин (ТЗА). НС рН 6,8; 0,005 М Мц 0,025 М КС; 0,003 СаС 2, 0,005 М М 0,004 М н-октиловый спирт и 0,004 М,о-мер каптоэтанол. Растительный материал, отфильтрованный через 4 слоя капрона размером пор в 70 мк, центрифугировали при 500 об/мин в течение 5 мин с целью освобождения от грубых неразоушенных тканей и целых клеток, затем надосадок центрифугировали при 2700 об/мин в течение 20 мин. Осадок ядер бьл очищен через пятислойный глицериновый градиент (50, 60, 70, 80, 90 мас./обьем), приготовленный на ТЭАф НС рН 6,8 со всеми перечисленными компонентами гомогенизационной сре1101141 Формула изобретения Составитель Н.Родова Редактор Т.Пилипенко Техред М.Моргентал Корректор М,ШарошиЗаказ 4513 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 ды, исключая 20 глицерин. Градиентное центрифугирование проводили при 2000 об/мин в течение 1 ч. Прохождение ядер через пятислойный глицериновый градиент контролировали микроскопически. Осадок ядер промывали 0,5 тритоном Хна среде гомогенизации, без глицерина, с последующим центоифугированием при 700 об/мин в течение 15 мин, после чего дра промывали трижды в среде следующе,о состава: 0,005 М М 9 С 2, 0,025 М КС 1; 0,003 М СаС 2; 0,005 М МаС; 0,01 М трис-НС рН 8,8, с последующим центрифугированием при указанных условиях, Степень чистоты аыделенных препаратов клеточных ядер определяли микроскопически, спектрофотометрически и по компонентному составу белок/ДНК, РНК/ДНК,Способ выделения растительных клеточных ядер, включающий консервацию 5 растительных тканей при температуре минус 25 С в присутствии глицерина, гомогенизацию, фильтрование и низкоскоростное центрифугирование гомогената и последующую очистку ядерной фракции методом гра диентного центрифугирования, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения выхода очищенных клеточных ядер с одновременным сохранением их нативности, для консервации используют 80-90 глице рин, гомогенизацию проводят в буфере, содержащем 20 глицерина, а очистку ядер осуществляют в градиенте плотности глицерина 50, 60, 10,80,90 мас,/.