Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторным методом

СООЗ СОВЕТСКИХ00 аиаЮМКИИРЕСПУБЛИК ае ив(51)5 С 01 Я 33/48 хиатриисихичесп ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт клиВсесоюзного научикого здоровья АМ.8)Р 42998131979. Пзобретение относится к медицине и биологии, в частности к биологической химии, касается способа измерения уровня амитриптилина в биологических жидкостях, и может быть использовано в лечебной практике для проведения лекарственного мониторинга путем определения в крови и иных биологических жидкостях концентраций амитриптилина и других антидепрессантов и лекарственных средств, имеющих сродство к М-холинорецепторам.Цель изобретения - повьппение чувствительности.Способ осуществляют следующим образом.Дпя анализа берут рецепторный материал, содержащий М-холинорецепторы (в качестве источника рецепторного материала используют хвостатые ядра бычьего мозг 1), их гомогенизируют в 40 объемах холодного трис-НС 1 буфер(54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ УРОВНЯ АМИТРИПТИЛИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ РАДИОРЕЦЕПТОРНЫМ МЕТОДОМ(57) Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к биологической химии. Цель изобретения - повышение чувствительности определения амитриптилина - достигается за счет,проведения последовательной инкубации ,рецепторного материала с радиоактивным лигандом в два этапа при 23-25 С. Способ дает увеличение чувствительности в 8-14 раз по сравнению с прототис рН 7,4 с использованием гомогениза-.,1 ф тора типа 01 йга - Тцггах" при макси- Я мальной скорости в течение 40 с. Гомогенат центрифугируют при 30000 я во течение ЭО мин при 4 С, Супернатант сливают, осадок ресуспендируют в 40 объемах буфера и повторяют процедуру гомогенизации и центрифугирования еще два раза в тех же условиях. Конечный осадок ресуспендируют в 10 объемах трис-НС 1 буфера с использованием гомогенизатора,Для измерения уровня амитриптилина в сыворотке используют стандарты не- радиоактивного амитриптилина, Из исходного 810"1 рраствора амитриптилина в 50 мМ фосфатном буфере с рН 7,4 путем разведений в том же буфере готовят следующие стандарты: 81 О 2 ю 510 е 110 ф 5 10 ф 2 е 510 ф 1 ф х 10 М растворы амнтриптилина.4 1649430 Формула изобретения Составитель С.РыбалкинРедактор Т.Ла эоренко Техред М,Иоргентал Корректор Л Латай Заказ 1518 Тираж 417 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Иосква, 3-35, Раущская наб., д, 4/5Яроизеодстзенно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина, 101 В качестве меченого лиганда используют Н-ЯЯВ (квинуклидинил бензилат), 39 К/ммоль (фирма ИЕБ).Определение проводят в стеклянных пробирках при комнатной температуре 23-25 С. Смешивание ингредиентов инкубационной среды проводят последовательно в два этапа: .сначала в каждую пробирку вносят по 25 мкл стандарта и 400 мкл рецепторного материала, содержимое пробирок перемешивают на встряхивателе и инкубируют в течение 15"30 мин. После этого в пробирки добавляют по 50 мкл Н-ЯНВ, пробы пере мешивают и инкубирают 60-65 с. После инкубации в каждую пробирку добавляют по 7 мл холодного фосфатного буфера с рН .74. Содержимое пробирок тотчас фильтруют под вакуумом через ЖаСшап СГ/В фильтры. Фильтры промывают холодным буфером трижды по 7 мл и затем помещают в сцинтилляционные флаконы, содержащие 8 мл сцинтиллято-ра "ВЗАД"Через 18 ч радиоактивность 25 просчитывают на жидкостном сцинтилляционном счетчике.Процент ингибирования определяют как ----- , где Во и В; - величиныРо30 связывания Н-лиганда в отсутствии и в присутствии амитриптилина. По калибровочным кривым (зависимость ингибирования связывания "НАИВ от концентрации амитриптилина) определяют значение концентрации амитриптилина в сыворотке крови.Способ дает увеличение чувствительности определения уровня амитриптилина в 8-14 раэ по сравнению с прототипами,Способ измерения уровня амитриптилина в сыворотке крови радиорецепторным методом, заключающийся в инкубации рецепторного материала с радиоактивным лигандом з Н-квинукпидинил бензилатом и исследуемым образцом, определение радиоактивности связанно" го с рецептором лиганда, расчете процента ингибирования связывания лиганда образцом и определении концентрации амитриптилина по калибровочной кривой, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности, инкубацию проводят в два этапа: вначале инкубация рецепторного материала с исследуемым образцом в течение 15-30 мин при 23-25 С, затем добавление радиоактивного лиганда и инкубация в течение 60-65 с.при той же температуре.