Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего глобулина в сыворотке крови человека

(й)5 0 01 й 33/534 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт биоорганической хиБССР(54) СПОСОБ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕКССТЕРОИДСВЯЗЫВАЮЩЕГО ГЛОБУЛИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА(57) Изобретение относится к области медицинского микроанализа и может быть использовано в биохимии, медицине и Изобретение относится к медицинскому микроанализу, а именно к способам радиоиммунологическога определения ССГ в сыворотке крови человека, и может быть использовано в.биохимии, медицине и физиологии человека для оценки эндокринного статуса организма.Цель изобретения - ускорение и упрощение способа,Способ осуществляют следующим образом.Анализируемые образцы сыворотки к 2 оови и калибровочные пробы инкубируют с1-ССГ, антисывороткой к ССГ и вторыми антителами в буферном растворе полиэтиленгликоля при комнатной температуре в течение 1 ч, центрифугируют и проводят радиометрию осадков,Ы, 1603307 А 1 физиологии человека для оценки эндокринного статуса организма, Цель изобретения заключается в ускорении и упрощении способа, Сущность изобретения состоит в том, что при радиоиммунологическом способе определения сексстероидсвяэывающего глобулина (ССГ) в сыворотке крови . человека разделение свободного и связанного с антителами ССГ осуществляют с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля, которые вносят в инкубационную среду вместе с антителами к ССГ перед началом инкубации анализируемой пробы. При этом инкубационная среда содержит следующие компоненты, мас,о; "1 - ССГ (10 - 20 мКи/ммоль) (1 - 2) 10; антитела к ССГ (2 - 3) 10; вторые антитела 0,09 - 0,18; Трис 0,9 - 1,2; НС 1 0,07 - 0,08; полиэтиленгликоль 4,5 - 5; дистиллированная вода остальное,Инкубационная среда для радиоиммунологического определения ССГ содержит1-ССГ, антитела к ССГ, вторые антитела и полиэтиленгликоль в буферном растворе при следующем соотношении компонентов, мас. О:1-ССГ(10 - 20 мКи/ммоль) (1 - 2) 10Антитела к ССГ (2 - 3) 10 Вторые антитела 0,09-0,18 Трис 0,9-1,2 НС 0,07-0,08 Полиэтилен гликоль 4,5-5. Дистиллированная вода Остальное Расчет концентрации антител в системе проводят по известному методу (К.МШегер. а 1, 1. 1 пипи по. МетЬ., 1980, ч. 34, р 345-352), 1603307/ССГ в конечной концентрации 1:5000, рН 8,6.1,2, Обозначают по две пробирки для подсчета общей активности -ССГ Щ, для калибровочных проб ССГ и для анализируемых образцов сыворотки крови.1,3. В аналитические пробирки вносят по 0,05 мл калибровочных проб, содержащих 0; 10; 20; 40; 80; 160; 320; 640 нмоль/л ССГ, и анализируемых образцов сыворотки крови согласно маркировке,1.4. Во все пробирки вносят по 100 мкл раствора.-ССГ ( 40000 расп,/мин).1.5, Во все пробирки, кроме Т, вносят по 1 мл раствора полиэтиленгликоля, приготовленного по и, 1.1, Содержимое пробирок тщательно перемешивают,1.6, Инкубируют все пробирки при комнатноЧгтемпературе в течение 1 ч.1.7. Все пробирки, кроме Т, центрифугируют при ускорении 1500-2000 д в течение 20 мин.1.8; Супернатант. удаляют, измеряю скорость счета в каждой пробирке. Расчеты. Находят среднее арифметическое значение скоростей счета для каждой пары пробирок. Рассчитывают величину В/Во для каждой пары пробирок калибровочного графика и неизвестных проб, где Во - средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочную пробу "О нмоль/л"; В - средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочные или неизвестные пробы.В полулогарифмических или одй-оц координатах строят для калибровочных проб график зависимости В/Во от концентрации ССГ в этих пробах. Для неизвестных проб сыворотки крови на основании соответствующих значееий В/В 0 по калибровочному графику определяют концентрацию ССГ. Для образца анализируемой сыворотки крови значение В/Во составляет 40%, что соответствует концентрации ССГ 117 нмоль/л.-ССГАнтитела к ССГВторые антитела 1 10 2 10 0,09 П р и м е р 2. При.использованииданно,го способа и инкубационной среды следующего состава, мас.%: Трис 0,9 НС 0,07 Полиэтиленгликоль 4,5 Дистиллированная вода остальное,5 концентрация ССГ в анализируемомобразце сыворотки крови составляет 130 нмоль/л.П р и м е р 3. При использовании данно го способа и инкубационной среды следующего состава, мас.:"5-ССГ 2,10-7 Антитела к ССГ 3 10 Вторые антитела 0,18 15 Трис 1,2НС 0,08 Полиэтиленгликоль 5 Дистиллированная вода остальное,концентрация ССГ в анализируемом образ це сыворотки крови составляет 120 нмоль/л,Таким образом, предлагаемый способи инкубационная среда позволяют проводить радиоиммунохимический анализ ССГ в сыворотке крови человека в течение 1,5- 25 2 ч по сравнению с 27 ч в прототипе. Диапазон определяемых концентраций способа (10-640 нмоль/л) охватывает все уровни ССГ в сыворотке крови человека при различных физиологических состояниях орга низма, что упрощает способ определения. Формула изобретения Способ радиоиммунологического определения сексстероидсвязывающего гло булина в сыворотке крови человека,включающий инкубацию пробы с меченным-сексстероидсвязывающим глобулином и специфическими антителами в буферном водном растворе, разделение свободного и 40 связанного с антителами антигена с помощью вторых антител и полиэтиленгликоля и радиометрию осадка, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, перед инкубацией вносят вторые 45 антитела и полиэтиленгликоль вместе соспецифическими антителами, при этом в качестве буферного раствора используют трис-НС буфер при следующем соотношении компонентов. мас.0 :50