Штамм бактерий sтарнylососсus aureus, используемый для изготовления стафилококковых диагностикумов

(19) (И) О РЕТЕН ЛЬСТВУ вленные на о тарные диагности отличаются больчем аналогичны енные из штамм к биотехно зовано при предназна ел к антивыи штамм1986, неем самым и чувстви- диагностик 6 выделен онией и сударстельского и контро.: опье чазГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИ(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ БТАРНУ 1,0 СОССЦБАЦКЕПБ,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯСТАФИЛОКОККОВЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использованодля приготовления диагностическихтест-систем, предназначенных для тестирования антител к антигенам микробной клетки стафилококка. Целью Изобретение относитс логии и может быть испол приготовлении препарато ченных для детекции ант генам микробной клетки. Цель изобретения - н БгарЬУ 1 ососсцз ацгеизсодержащий протеин А и повышаюший специфичносттельность препаратов для стафилококковой инфекцииШтамм Б. аигеиз198 больного хронической пне депонирован в коллекции венного научно-исследова института, стандартизаци( ) С 12 Б 1/20, А 61 К 39/08 изобретения является новый штамм Б(:арЬУ 1 ососсиз ацгецз1986, не содержащий протеин А и тем самым повышающий специфичность и чувствительность препаратов для диагностики стафилококковой инфекции. Штамм БС. ацгеиз1986 депонирован в коллекцииГНИИСК им, Л.А.Тарасевича под номером 182. При иммунохимическом сравнительном изучении сывороток, полученнь.х к данному штампу и к известному А-дефицитному штамму Бг. ацгепзБоои, только в последних выявлены в небольшом количестве антитела к пратеину А. Приготнове штамма эритроцикумы и тест-системы шеи специфичностью, препараты, приготов 1 оса. 2 табл. ля медицинских оиологических препаратов им. Л,А.Тарасевича под182.Штамм Б.ацгецз ГИСК82 имеет следующие морфологические и культу- ральные свойства: при выращивании на мясопептонном агаре образует непрозрачные, желтоватого цвета коло-.- нии с ровными краями, размером 2 - 4 мм в диаметре, окрашивается положительно по Граму, Штамм обладает коагулазной и гемолптической активностью, ферментирует маннит в аэробных и анаэробных условиях, обладает образующим фактором, лецитов ной активностью. Чувстви 157819040 тЕлен к левомицину, мономицину,номицину, канамицину.Биологические свойства. Штаммвирулентен для белых мышей. При внутрнбрюшинном введении мышам массой512-14 г в 0,4 -ном агаре ЬЭ егосоставляет 18 10 + 6 10 млрд. микуробных клеток. Штамм иммуногенен,обладает слабой аллергенной активностью.Отличительной особенностью штамма является то, что он не содержитоДного из антигенов клеточной стенкисгафилококка-протеина А.15Изобретение иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Определение активности протеина А в штамме производятв реакции диффузии в геле в сравнении с другими штаммами Б.ацгеця. Дляэтого получают гипериммунные антимикробные кроличьи сыворотки к штаммам У 1986, Моори другим штаммамБ.аигеця и ставят реакцию противочищенного протеина А, Сыворотки кштамму У 1986 не взаимодействуют спротеином А, сыворотки к штамму1 оойобразуют слабые преципитаты,с сыворотками к другим штаммам стафилококка, например У 9 199 1 и 5 реакция выражена очень сильно, ВозможНо определение в сыворотках антителк протеину А и в других серологических реакциях, например, в ИФА иммуно 35ферментном анализе (ИФА) .П р и м е р 2. Штамм Я. аигепяГИСК У 182 использован для получения антигенных препаратов наряду соштаммом оооо.Используя методику, предусматривающую депротеинизацию препаратов,ыз биомассы обоих штаммов выделяюткапсульные полисахариды (ПС) и тейхоевые кислоты клеточной стенки (ТК). 45Выход ТК иэ биомассы обоих штаммоводинаков (70 мг из 50 г сырой микроб"ной массы), выход ПС иэ штамма ГИСКУ 182 вьппе, чем аналогичного препарата из штамма Исоа(350 мг против200 мг).50Использование выделенных препаратов в ракетном электрофорезе показало,что активность кроличьих сыворотокк штамму 1986 (ГИСК У 182) в отношенииТК и ПС обоих штаммов в 4-8 раз вьппе, 55чем сывороток к штамму Ъ 1 оой(ана,пиз проводят по величине, пиков, об-.разованных преципитатами)Выделенные антигенные препараты используют в реакции торможения иммуноферментного анализа (ИФА). Результаты ингибирования показывают, что 507-ное торможение ИФА (в системе с ТК) вызывают ТК Иоос 1-46 в концентрации 0,6 мкг/мл, а ТК из штамма ГИСК 182 в концентрации 0,07 мкг/мл. Аналогичное торможение ИФА (в системе с ПС) вызывают ПС Моорав концентрации 0,3 мкг/мл, а ПС штамма ГИСК В 182 - в концентрации 0,015 мкг/мл. Полученные данные свидетельствуют о том, что антигенные препараты, выделенные из штамма ГИСК Р 182, обладают более высокой специфической серо- логической активностью. П р и м е р 3. Получение эритроцитарного диагностикума. Штамм 81 арЬу 1 ососсця аигеця ГИСК В 182 выращивают в матрацах на плотной среде иэ триптического гидролизата казеина.18-20-часовую культуру смывают дистиллированной водой, стандартизируют до содержания 40+10 млрд, микробных клеток в 1 мл и прибавляют солянокислый гидроксиламин из расчета 0,05 мг на 1 млрд. клеток, Ставят в термостатопри 37 С на 2 сут при помешивании 4-5 раэ в 1 сут,Затем лизат центрифугируют, центрифугат подвергают диализу против дистиллированной воды с 6-кратной сменой, затем разливают во флаконы и подвергают лиофильному высушиванию из замороженного состояния. Сухим антигеном сенсибилизируют таннизированные формалинизированные эритроциты из расчета 10 мг антигена на 100 мл 57. эритроцитов. Готовый диагностикум разводят до 2,5 Х содержания эритроцитов.Эритроцитарный диагностикум исполь" зован в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) для определения стафилококковых антител в сыворотках вакцинированных кроликов и коров.В табл. 1 и 2 представлены данные сравнительного изучения специфической активности диагностикумов из штаммов Моораи ГИСК У 182.Из данных табл. 1 и 2 видно, что в случае титрования сывороток крови после введения физиологического раствора животным (коровы, кролики) или до введения вакцины с диагностикумом из штамма Мооримели место существенно более высокие титры антител по .5 1сравнению с диагностикумом из штамма ,ГИСК У 182.Полученные результаты свидетельст вуют о том, что более специфические результаты получены при использовании диагностикума на основе штамма ГИСК У 182,578190 6 формула изобретения Штамм бактерий БарЬу 1 ососсцз ацгеиз ГИСК У 182, используемый для изготовления стафилококковых диагностикумов. Таблица 1 Обратные титры антител в РПГА с диагностикумами на основе штаммовНомеркроликов ГИСК У 182г Уоой Г 640 320 640 640 640 640 640 640 40 640 640 640 физиологичес160 160 160 160 160 320 498 458 448 413 458 472 20 40 20 40 20 40 П р и м е ч а н и е. 1 - срок забора крови доиммунизации, 2 - после иммунизации кроликов стафилококковой вакциной. Т а блица 2 Номер коров Обратные титры антител в РПГА с диагностикумами на основе штаммов ГИСК У 182 2 320 320 320 320 320 640 20 3200 3200 3200 12800 12800 3200 80 758 781 792 794 793 796 561 3200 6400 1280 25600 6400 6400 160 80 40 80 80 80 160 20 408 469 410 417 484 492 433 415 499 453 424 28 64016040401608080160203204030При введении8060202020160 40 40 20158190.Продолжение табл,2 Номер Обратные титры антител в РПГА с диагностикумамикоров на основе штаммов ГИСК У 182 Роом г П р и и е ч а н и е, 1 - забор крови до иммунизации,2 - забор крови после иммунизации (при этом коровы привиты стафилококковой вакциной, кролики - клебсиеллеэной вакциной). Составитель В.РомановаТехред М,Ходанич Корректор С.Черни Редактор М.педолуженко,Заказ 1891 Тираж 504 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 11303 5, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 570 573 576 16080160 16080320 го 20 40 40 20 40