Способ получения кератиназы

(21) 4358177/30- (22) 08.12.87 (46) 23.05,90, Б (71) Воронежский технологический ин титутн ия,а ом. получениюжет быть биохимии ретение относитсятов кератиназы ино в биотехнологи з препар примеь микрооДел чение я увелиащение ьтивир е анияоб кул гер 832 ивированияев Б.я. ЛИАующим образомава, мас.%:50; соеваяслый кальции у птусев сЬготпо 8 е ществляют следВ среде сос фельный крахма перо 10; углек Ф картомука 54; Аос ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯПРИ ПНТ СССР Долидзе Д.А., Патарая Д.Т., Турманидзе И.С., Квеситадзе Г.И. Отбпродуцентов протеолитических фермтов у актиномицетов. - Иикробиоло1983, т, 52, Р 1, .с. 83-86.Так 1 пвп 1 Б НЦцсЬ 1 Р., Бе 1 СКо 8 а И. Бо 1 аг 1 оп ой ап ехггасе 11 црогоге 1 паве (Кегаг 1 паве) Ггов Идсярогщп Сапов. - БаЬоигапй 1 а, 1982ч. 20, Р 4, р. 281. рганизмов, медицине.ью изобретения являетвыхода фермента и соки ведения процесса ку яО, 1 йы 1)5 С 12 И 9/50 // (С 12 И 9/50 С 12 Н 1:465)(57) Изобретение относится к получению препаратов кератицазы и может быть применено в микробиологической промышлецности, биохимии микроорганизмов и медицине. С целью сокращецпч времени ведения процесса и увеличения выхода кератиназы в качестве продуцента используют Бггергог 1 усея СЬгогпорепев Б.нгаесоя ЛИА 0832, культивирование которого осуществляют ца питательной среде, содержащей минеральные источники азота и углерода и,воду, при начальном значении рН от 10 до 11. Предлагаемый способ получения кератиназы позволяет повысить выход Аермента в 11 раз (34 ед./мл) и сократить время культивировация с9 сут. до 48 ч по сравнению с известным способо 1 табл. форцокислый калий одцоэамещенцьи 0,8сульФат железа 0,01, сульфат ц адика0,02; водопроводная вода сстальцое,доводят величину рН 1 ц.едким нат 1 идо 10,0-11,0, Затем стерцлцзуютпри давлении 0,1 ИПа в течению 1 ч,После охлаждения засевают 5% 48-часового госевцого материала Бгергонусея сЬгощоВепея Б,В. ЛИА 0832культивируют в колбах обнемом 7 О члсодержащих по 100 мл среды на качалке (220 об/мнц) при " С в т ение 48 ч. КоНечное значение рН Ь,6,8,обре р мул а ени Способ ппредусматрпродуцентадержащей миуглеродногоду, при оптдостиженияфермента, отем, что, сфермента иния процессиспользуют Сощусез с ЛИА 0832, ствляют и рН 10-11,пособ п пример Начальнозначение Протеолитическая активностьед/мл мя кульир ова.ния,атиназнаяивность,ед/мл01,10 8 т су 7,8 7,8 78 9,0 10,0 1 5 0,142 0,996 О, 158 1,956 2,622 3,111 6,044 5 5 5 2,8 11,0 78(из В ест ный За единицу протеолитической акивности принимают такое количество ермента, которое за 1 мин при 30 С атализирует переход в неосаждаемое ТХУ состояние количество каэеина, содержащее микроэквивалент тирозина.За единицу кератинаэной активности принимают такое количество фермента, которое в результате протеоли а 200 мг кератина при 37 С в течее 3 ч в присутствии 5 мл О, 1 М боатного буфера рН 9,2, 0,5 мл 10 ЗМ лорида магния и дистиллированно ы (для доведения объема до 10 ает повышение оптической плотности пытных проб над контрольными, равое О, 1, при измерейии на спектрофо-. ометре ( Л = 280 ммк)П р и м е р 1. Продуцент кераинаэы Я.сйгощояепез Яя. ЛИА 0832 ыращивают в течение 11 сут при наальном значении рН 7 8. Протеолитическая активность через 11 сут сотавляет О, 142 ед/мл, а кератиназная 1 авиа нулю.П р и м е р 2. Я,сЬгощо 8 епез Б.я, 3 ИА 0832 выращивают 48 ч. Протеоли 1 ическая активность составляет ), 158 ед/мл, а кератиназная 0,8 ед/мл. Условия культивирования аналогичныпримеру 1.П р и м е р 3. Я.сЬгощо 8 епез Б,В. ДИА 0832 выращивают 120 ч. Условия культивирования аналогичны примеру 1. Протеолитическая активность 35 0,996 ед/мл, кератинаэная 1,1 ед/мл.П р и м е р 4. Б.с 1 тощо 8 епез Б.я. ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 9. Протеолитическая активность 1,956 ед/мл, кератиназная 40 1,1 ед/мл.Пример 5. БЛИА 0832 выращивают ном значении рН 10. Протеолитическая активность 2,622 ед/мл, кератиназная 2,7 ед/мл.П р и м е р 6Б,сЬгощодепез Я.я, ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 11,О, Прот олитическая активность 3,111 ед/мл, кератиназная 8 ед/мл.П р и м е р 7. Я.сЬгощо 8 епез Б,я. ЛИА 0832 выращивают 48 ч при начальном значении рН 11,0. Протеолитическая активность 6,044 ед/мл,. кера-, тиназная 34 ед/илВ таблице представлены результаты, показывающие преимущества предлагаемого способа по сравнению с известным.Выращивание Б.сЬгощо 8 епез Я.8. ЛИА 0832 в предлагаемых условиях повышает протеолитическую активность в 5,2 раза, а кератиназную в 11,3 раза по сравнению с известным способомФ и сокращает время выращивания на 9 сут. олучения кератиназы, ивающий культивирование .на питательной среде, сонеральные соли, источники и азотного питания и воимальной температуре до максимальной активностит л и ч а ю щ и й с я целью повышения выхода сокращения времени ведеа, в качестве продуцента штамм актиномицета Яйгерощо 8 епез Б. егаесозкультивирование осущеначальном значении