Способ выделения гликозаминогликанов из мочи

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1 М 33/5 31/7 51)5 А ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН инической вано для тканевых леваниях выделен- гликанов вышение олее ползо ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМЪ( СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ ИЗ МОЧИ (57) Изобретение относится к клиническойбиохимии и может быть использовано для косвенной, оценки степени тяжести тканевых пов реждений путем количественного определения очищенных гликозаминогликанов, выделенных из мочи, Цель изобретения - повыИзобретение относится к кл биохимии и может быть использо косвенной оценки степени тяжести повреждений при различных забо путем количественного определения ных и очищенных гликозами но(ГАГ) мочи. Целью изобретения является по выхода целевого продукта за счет б ного осаждения ГАГ. Способ осуществляют следующим обраКислотно-щелочное состояние мочи,коррегируют, доводя до значения рН 6,0 - 6,5, при котором происходит максимальное осаждение ГАГ.1 объем мочи смешивают с 1,6 объемами 96 этанола и оставляют при температуре +4 С на срок не менее 6 ч для образования осадка, Сформировавшийся хлопьевидный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Осадок растворяют в 1 - 3 М водном растворе хлористого натрия, ГАГ переходят в раствор,ДУ 1556678 А 1 шение выхода целевого продукта за счет более полного осаждения гликозаминогликанов. Образец мочи доводят до рН 6,0 - 6,5, обрабатывают этанолом в конечной концентрации 60 Я, выдерживают не менее 6 ч, определяют осадок, растворяют в 1 - 3 М водном растворе хлорида натрия и повторно обрабатывают этанолом. Способ позволяет повысить на 1 О - 1500 выход гликозаминогликанов и обеспечивает упрощение и ускорение выделения гликозаминогликанов. Способ можно использовать как диагностический тест для косвенной оценки степени тяжести повреждения соединительной ткани при различных заболеваниях. нерастворившиеся частицы удаляют с помощью центрнфугирования или фильтрования через среднепористый фильтр.Для вторичного осаждения ГАГ к 1 объему центрифугата или фильтрата, содержащего ГАГ, прибавляют 1,6 объема 96 этанола, смешивают и оставляют не менее чем на 6 ч при температуре +4 С для формирования осадка. Осадок отделяют центрифугированием при 3000 об(мин в течение 30 мин. Определяют в осадке -ГАГ по концентрации входящих в их состав углеводов йли изучают их качественный состав.Пример 1. При исследовании суточной мочи здорового человека из 1050 мл отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 6,0.5 мл мочи смешали с 8 мл 96 этанола, оставили при +4 С на 6 ч. Осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин на обычной лабораторной центрифуге в течение 30 мин. Осадок растворили в 4 мл 3 М водного раствора хлорида натрия. Нерастворенные частицы удалили с по1556678 Формула изобретения Составитель Н, ГуляеваРедактор М. Циткина Техред И. Верес Корректор О. КравцоваЗаказ 674 Тираж 554 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР13035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д, 4/5Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул, Гагарина, О мощью фильтрования через среднепористый фильтр. К 2 мл фильтрата добавили 3,2 мл 96 этанола, смешали и оставили при +4 С на 18 ч. Образовавшийся осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. В осадке определили содержание входящих в состав ГАГ уроновых кислот карбазоловым способом. Пересчитали содержание уроновых кислот в ГАГ на всю суточную мочу, которое составило 2,2 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 2,0 мг, т. е. выход по предлагаемому способу выше на 10 Я).Пример 2. Больному с.переломом левой голени проведено исследование мочи предлагаемым способом. Из 1400 мл суточной мочи отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 5, 7, добавлением 1 н раствора едкого натра и 1 н раствором соляной кислоты довели рН мочи до 6,2. Вся дальнейшая процедура выделения ГАГ проводилась по примеру 1, за исключением того, что осадок ГАГ растворяли в 4 мл 1 М водного раствора хлорида натрия и нерастворимые частицы удаляли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. За сутки выделено больным 4,3 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалоеь 3,7 мг, выход по сравнению с прототипом выше на 16 Я).Пример 3, При исследовании суточной мочи больного с переломом бедра из 1000 мл мочи отобрали 20 мл, измерили рН, который составил 6,5. Вся дальнейшая процедура выделения ГАГ проводилась по примеру 1. Осадок ГАГ растворяли в 4 мл 2 М водного раствора хлорида натрия. За сутки выделено больным 5,4 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 4,9 мг, т. е. выход повышен на 10 Я).Предлагаемый способ выделения ГАГ измочи позволяет более полно получить целевой продукт (выход ГАГ повышается на 10 - 15 Я), ускорить и упростить процедуру 10 выделения ГАГ. Кроме того, в предлагаемом способе не используются дефицитные реактивы, в частности цетилпиридинийхлорид и цетилтриметиламмонийбромид.Разработанный способ выделения ГАГиз мочи позволяет проводить исследования количественного содержания ГАГ, их состава в моче человека и животных. 20 Способ выделения гликозаминогликановиз мочи путем коррекции рН образца осаждения гликозаминогликанов органическим соединением, выдерживания на холоде, отделения осадка, растворения осадка в водном растворе соли, повторного осаждения этанолом, выдерживания на холоде и отделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого про дукта, рН в образце мочи устанавливают 6,0 - 6,5, первое осаждение проводят добавЗо лением этанола в конечной концентрации60 Я, выдерживают смесь не менее 6 ч, а растворение осадка осуществляют в 1 - 3 М водном растворе хлорида натрия.