Способ получения l-фукозоспецифичного лектина

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик 61) Дополнител 22) Заявлено 20 иое к авт. сеид-ву 04.81 (2) 3279476/28-13 заявки Мо35 78 присоединением Государственный комите СССР по делам изобретений и открытий) 1082 та опубликования описан лшш:ли ий государственный м вов 1) Заявитель инский институт 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Ь -Ф ЛЕКТИНПЕЦИФИЧНОР 15 Изобретение относится к получению биологически активных веществ, в частности к способам получения Ь -фуказо" специфичного лектина, который может использоваться длв проведения исследований в биохимии и медицине, например для определения групп крови человека и животных, генетических, ито и гистохимических исследований а также для получения и выделения гликопротеидов, содержащих в своем составе Ь -фукозу.Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения Ь -фукоэоспецифичного лектина, предусматривающий экстракцию растительного сырья 0,9-ным растворсм хлористого натрия, Фракционирование экстракта сульфатом аммония и гель-хроматографию в декстранавом геле.Согаласно известному способу фукозоспецифичный лектин экстрагируют из семян 0,85-ньм МаС 1 при рН 6,8 с последующим высаливанием сульфатам 25 аммония в пределах 30-60 насыщения. Окончательную очистку Ь -фукозоспецифичного лектина производят преципитацией 1,3,5-три-(п- сс,-Ь -фукозилоксифенилаэо)-2,4,6- тригидроксибен эолом с последующим удалением преципитирующего агента с помощью ионообменных смол и диалиэа против 0,9-ного ИаС 1 для удаления Ь "фукозы. Выход продукта составляет 450 мгиз 1 кг семян (1)К недостаткам известного способа ,ва относится то, что используемые для получения фукозоспецифичного лектина растения в СССР не произрастают или же их использование является труднодоступньм.Целью изобретения является расширение сырьевой базы, а также повышение чистоты целевого продукта.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения Ь -фукозоспецифичного лектина, предусматривающему экстракцию раститель- ного сырья 0,9-ным раствором хлористого натрия, фракционирование экстракта сульфатом аммония и гель-хроматографию в декстрановом геле, в качестве растительного сырья используют кору растениязолотой дождь (ЬаЬцгпцщ апаЧугоЫез МейЖ), Фракционирование сульфатом аммония осуществляют в пределах 0,3-0,9 насыщения, после чего полученный осадок обрабатывают этиловым спиртам до 60-ной конечной кон967484 Формула изобретения Составитель С. Каспаров Редактор Л.Лукач, Техред Т.МаточкаКорректор В. БутягаЗаказ 7941/10 Тираж 714 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП "Патент",", г.ужгород, ул. Проектная, 4 центрации, а гель-хроматографию проводятв декстрановом геле с интералом фракционирования по белкам солекулярной массой 4000-100000 в1 М ИаС 1 при рН 6,8,Сущность предлагаемого способа за" 5ключается в том, что золотой дождьпредставляет собой многолетний кустарник, произрастающий на территории южюх областей СССР. В большинстве слу-.чаев его высаживают как декоративное 40растение, но имеются и дикорастущиекустарники. Кора, срезанная со средних и старых веток, может хранитьсяв течение года.Очистку лектина производят путем 15экстракции сырья 0,9-ныл ИаС 1,фракционирования белков сульфатомаммония, этиловым спиртом и.гель-хроматографией на геле-сефадекс С - 100.П р и м е р. Кору ЬаЬцгпцш ападуго;щЫев МейЖ, собранную во время сокодвижения весной либо осенью после.созревания семян, высушивают и размалывают в порошок. 200 г пороожа заливают 1000 мл 0,9-ного КаС 1, 15 минперемешивают, жидкость отжимают иобъединяют с предыдущей порцией.Полученный экстракт (около 1,2 л)подкисляют 2 н.НС 1 до рН 4,2 и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин,Осадок отбрасывают, рН доводят до6,5 - 7,0 10-ным раствором ИаОН, добавляют сульфат аммония, доводя степень насыщения до 0,9 (430 г/л) .Осадок, содержащий лектин, собираютцентрифугированием или фильтрованием, 35растворяют в пятикратном объеме дистиллированной воды и добавляют 1,5 объема(от объема раствора лектина) 96 -ногоэтилового спирта при 0 - +25 С. Полученный осадок собирают центрифугирова нием, растворяют в 2 - 3-кратном объеме 0,9-ного БаС 1 и диализируют 1015 ч против 0,9-ного раствора БаС 1.Затем наносят на колонку 800 к 60 мм,заполненную декстрановым гелем - седафекс С - 100 и уравновешенную 0,1 Мфосфатным буфером, рН 6,8 с 1 МЮаС 1. Выявление фракций, содержащих лектин, производят под контролем реакции гемагглютинации с человеческими эритроцитами 1(0) группы крови. Фракции, содержащие лектин, собирают, белок высаливают сульфатом аммония при 0,9 насыщения (660 г/л), осадок собирают центрифугированием, растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды, обессоливают диализином в течение 48 ч и лиофилизируют. Выход 1 г Фукозоспецифичного лектина 40 - 45 мг с 200 г воздушно-сухой коры (или 200 - 250 мг из 1 кг) .Таким образом, предлагаемый способ позволяет расширить сырьевую базу для получения Ь-фукозоспецифичнои лектина и получить фукозоспецифйчнй лектин из доступных источников в сптимальных количествах. Способ получения Ь -фукозоспецифичного лектина путем экстракции растительного сырья 0,9-ныл растворомхпористого натрия, фракционированияэкстракта сульфатом аммония и гельхроматографии в декстрановом геле,,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью расширения сырьевой базыи повышения чистоты целевого продукта, в качестве источника сырьяиспользуют кору растения золотойдождь (ЬаЬцгпцв ападугоЫев МейЖ),фракционирование осуществляют в-пределах 0,3-0,9 насыщения, далееполученный осадок обрабатываютэтиловым спиртом до 60-ной конечнойконцентрации, а гель-хроматографиюпроводят в декстрановом геле с интервалом фракционирования по белкам с молекулярной массой 4000100000 в 1 М НаС 1 при рН 6,8,Источникиинформации,принятые вр.,внимание при экспертизе1. Таг 1 в,Х. е. а 1. Ово 1 аЫ 1 оп огап Ь-Рцсове В 1 пупд Рго 1 е 1 п ггощЬогцв егацопо 1 оЬцв веей НаСцг 1,1967, чо 1. 215, Р 5103, р. 890-891.