Способ получения конидиального материала грибов рода

ьц 60309 Союз Советских Социалистических РеспубликОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ ТОР СКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 09.11.76 (2 20726/28-1 Государственный комитет Совета Министров СССР. Веденеев й научно-исследовательский институтственной микробиологии и Всесоюзныйдовательский институт защиты растений Всесоюзн льскохозя учно-иссл(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИ ИАЛЬНОГО МАТЕРИАЛА ОДА НЕ 1.%1 МТНОЬРОК 111 ИБО ОНИ н и Целью выхода ко обеспечен териала и тельного вПостав грибы род верхностн изобретеннидий, удеие сохранегего вируремени.ленная ца Не 1 гп 1 пйым методо ль достигается тем оз рог 1 пгп выращиваю м на отйосительно бе то поой Зо присоединением заявкиИзобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для получения инфекционного материала фитопатогенных грибов с целью искусственного заражения растений при селекции на устойчивость к соответствующим заболеваниям.Известно выращивание грибов на пшеничных отрубях для получения конидиального материала 1.10Конидии фитопатогенных грибов получают а зерне кукурузы, пшеницы, овса, сорго, ржи ли ячменя 21.Недостатком известных способов является то, что они не,позволяют получить большого 15 выхода конидий. Кроме того, получаемый любым из этих способов материал быстро теряет при хранении жизнеспособность и вирулентность. Наконец, использование относительно дорогостоящего сырья (зерно) ведет к удоро жанию,производства. ия является увеличение шевдение производства и ия жизнеспособности .ма дентностп в течение ддисреде, полученнои на основе подсолнечнои лузги. Обычно для максимального накопления конидий грибы выращивают при относительно низких температурах (10 - 15 С), лучшие в двух температурных режимах: вначале при 24 - 26 Скогда происходит преимущественно вегетативный рост, затем при 12 16 С, когда происходит преимущественно репродукция конидий.Для приготовления питательной среды подсолнечную лузгу предпочтительно измельчают, заливают 2 - 2,5%-ньтм раствором аммиака, автоклавируют, промывают до рН промывных вод 7,0 - 7,5, высушивают до воздушно-сухого состояния и,прибавляют,к ней раствор минеральной основы среды Чапека, в,которую чаще всего вводят,0,4 - 0,6% крахмала, что лимитирует рост гриба, но способствует образованию конидий.Первый вариант,К 1 кг размельченной воздушно-сухой подсолнечной лузги прибавляют 4 л 2 - 2,5%-ного раствора аммиака, автоклавируют 30 мин при 1 атм, промывают думу водой до рН:промывных вод 7,0 - 7,5 и высушивают до воздушно- сухого состояния. Прибавляют 800 мл раствора, содержащего минеральную основу среды Чапека с добавлением 0,53 крахмала.601309 Фор,мула изобретения Составитель М, Мирзаев Текред И. Рыбкина Корректор И. Симкина Редактор Т. Шарганова Заказ 118/217 Изд. М 119 Тираж 568НПО Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытийМосква, Ж-З 5, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Тип, Харьк, фил. пред. Патент Второй вариант.Отмытую от аммиака лузгу отжимают (пресс, центрифуга) до получения остаточной влажности около 30% и прибавляют 600 мл указанного питательного раствора, концентрация веществ в,котором увеличена на 25 о/о. Полученный субстрат стерилизуют 20 мин при 1 атм, равномерно инокулируют 500 мл 24 - 36-часовой культуры ,гриба, полученной глубинным методом.Инокулированный субстрат размещают слоем толщиной 7 - 10 см в,кюветы (колбы, бутыли), в которые обеспечен свободный доступ воздуха. Выращивание ведут:прп 24 - 26 С в течение 3 - 4 суток (первая стадия) и затем при 12 - 16 С в течение 5 - 15 суток (вторая стадия), После завершения выращивания субстрат вместе с грибом высушивают одним из известных методов (при тепловой сушке - не вы 1 ше 40 С). В полученной сухой массе вручную или механически растирают образовавшиеся комочки для получения однородного сыпучего, материала. Содержание конидий в препарате 15 - 25 от общего веса. Препарат хранят в обычных условиях при комнатной температуре. Предлагаемый способ получения конидиального материала отличается, простотой выполнения, не требует применения специального технологического оборудования при массовом производствекроме тото, применяются доступные и недорогие материалы и практически,полностью исключается использование пищевых ингредиентов (кроме, крахмала).В процессе выращивания грибов на предлагаемой относительно бедной среде при высокой норме засева даже в полустерильных условиях культура практически не инфицируеТся посторонней микрофлорой.Препарат, полученный предлагаемым способом, обладает относительно большей инфекционностью по сравнению с зерновым препаратом за счет большего содержания конидий.Обеспечена высокая вирулентность культуры ло отношению:к растениям при хранении 5 сухого препарата в обычных условиях. 1. Способ получения конидиального мате риала грибов рода Не 1 гп 1 пйозрог 1 цгп, включающий их выращивание на твердых питательных субстратах и последующее высушивание биомассы, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода конидий, удешевле ния производства целевого продукта, обеспечения сохранения жизнеспособности материала,и его вирулентности в течение, длительного времени, грибы вьиращивают на бедной среде, полученной на основе,подсолнечной лузги.20 2 Способ по и. 1, отлич а ющий с ятем, что для приготовления питательной среды подсолнечную лузгу измельчают, заливают 2 - 2,5 оо-ным растворо,м аммиакаавтоклавируют, промывают водой до рН промывных вод 25 7,0 - 7,5, высушивают,до воздушно-сухого состояния и прибавляют к ней раствор минеральной основы среды Чапеха.3, Способ по п. 2, отл и чаю щи йсятем, что в минеральную основу среды Чапека ЗО вводят 0,4 - 0,67 о крахмала.4, Способ по п, 1, отличающийсятем, что выращивание грибов ведут последовательно в двух температурных режимах: при 24 - 26 С - стадия преимущественного вегеЗ 5 тативного роста и при 12 - 16 С - стадия преимущественной репродукции конидий. Источники информациипринятые во внимание при экспертизе:4 О 1. Евтихов П. Н. Микробиологический синтез, М., 1967, с, 110 - 11, 1,3.2. Патент США Мо 3357895, кл. 195 - 81,1967.