Питательная среда для выделения лактобацилл

(71) Всесоюзный научно-исследова-. тельский институт антибиотиков (72) М,В,Тюрин и Б,А .Шендеров (53) 576.8 .093 .1(088 .8)(56) Кокова М., Мз.гс 3 те 11 .Х.А., 33 т.вешап К.Р. А Яе 1 есйгче Мейхпш аког Сте 1 зо 1 аеоп апй Епшпегагюп оК ога 1 апд йеса 1 ЬасйоЪас 11.- Л, Васйегхо 1, 1951, 62, 132-133. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛАКТОБАЦИЛЛ(57) Изобретение относится к медицин". ской микробиологии и может быть использовано при проведении качественных исследований на лактобациллы объектов окружающей среды. Цель изобретения - повышение селективных своиств среды, Для приготовления среды берут навески, г/л: глюкоза 15-25; триптический перевар казеина 8-15; дрожжевой экстракт 4-6; мясной экстИзобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при проведении количественного учета лактобацилл в объектах окружающей среды.Цель изобретения " повышение селективных свойств среды.Использование среды иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1, В 0,6 л дистилли- рованной воды растворяют 20 г трисоснования и доводят рН раствора конГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР 8014795 ракт 8-)5; ацетат натрия 25-40; цитрат аммония 1-3 дигидрофосфат калия 3-6; сульфат магния 0,4-0,6 хлорид марганца 0,1-0,3; сульфат железа 0,004-0,3; твин0,8-1,5; окск кобаламин 0,0025-0,003 ф тиамина бромид 0,025-0,075; рибофлавин 0,0005- 0,0015; пиридоксина гидрохлорид 0,025- 0,075; никотиновая кислота 0,005- 0,015; аскорбиновая кислота 0,025- 0,075; биотин 0,0005-0,0015; пантотенат кальция 0,0005-0,0015; триссолянокислый буфер рИ 5,85-5,9 12,1- 48,4; карбонат кадмия 0,008-0,02; желчь 0,008-0,012; фузидин натрия 0,0001-0,0009; ,амфотерицин В 0,3-0,3 Я или на триевая соль лев орина О, 25-0 46;,агар-агара 12-20; вода остальное. При этом витамины, карбонат кадмия и антибиотики вносят в среду стерильно после ее автоклавирования, Ра среде вырастают преимущественно лактобациллы и в небольшом количестве энтерококки. 1 з.п.ф-лы. 1 табл, Заев 2центрированной соляной кислотой плотности 1,18 г/см до 5,9-60, Навески ингредиентов, кроме мясного экстракта, витаминов, карбоната кадмия, амфотерицина В, фузидина натрия и агар-агара,тщательно перемешивает в сухой колбе, Затем к полученной смеси .добавляют приготовленный трис-солянокислый буфер и вносят в полученный раствор навеску мясного экстракта. Полученную смесь тщательно перемешивают. Доводят до рН 5,85-5,9 соляной50 кислотой той же плотности, В отдельной колбе объемом 2 л в 0,3 л дистиллированной воды кипячением растворяют 15 г агар-агара. После этого к рас 5плавленному агар-агару добавляют приготовленный ранее раствор ингредиентов и тщательно перемешивают. Доводятобщий объем до 0,992 л дистиллированной водой и автоклавируют среду при112 С в течение 30 мин, После автоклавирования среда должна быть несколько темнее цвета пива.К неостывшей (бО С) среде асептически добавляют, г: оксикобаламин0,0005, тиамина бромид 0,05, пиридоксина гидрохлорид 0,05, никотиновуюкислоту 0,01, аскорбиновую кислоту0,05, рибофлавин 0,0001, биотин0,0001, пантотенат кальция 0,001 (ви Отамины используют в виде растворов в0,01 н, НС 1 при их концентрации. ,0,1 г/мл каждого - в количестве 10 мл/лсреды), растворы амфотерицина В встерильной дистиллированной воде 251 мл концентрацией 200 мг/мл и фузщтдина натрия в стерильной дистиллированной воде 1 мл концентрацией0,5 мг/мл, карбонат кадмия 1 О мг. Навеску карбоната кадмия растворяют в 300,2 н, соляной кислоте и доводят рНдо б,О едким натромн, концентрации, затем общий объем раствора доводят дистиллированной водой до концентрации карбоната кадмия 10 мг/мл,стерилизуют фильтрованием, Полученную среду тщательно перемешивают иразливают по чашкам Петри таким образом, чтобы толщина слоя среды былане менее 0,5 см,40Полученная селективная среда имеет следующий состав, г/л:Глюкоза 20,0Триптический перевар казеина 10 фО , 45Дрожжевой экстракт 5,0Мясной экстракт 10,0Ацетат натрия 30,0Цитрат аммония 2,0Дигидрофосфат калия 3,5Сульфат магния 0,5Хлорид марганца 0,2Сульфат железа 0,015Твин1,0Оксикобаламин 00005Тиамина бромид 0105Рибофлавин 0,001Пиридоксина гидрохлорид 0,05Никотиновая кислота 0,01Аскорбиновая кислота 0,05Био тин О, 00Пантотенат кальция О, 001Трис-с оляно-кислый буфер 20,0Карбонат кадмия 0,1Желчьфузидин натрия 00005Амфотерицин В 012Агар-агар 15,0Дистиллированнаявода Остальное,На полученную среду производят высевы взвесей 24-48-часовых агаровых культур референс-штаммой лактобацилл в цистеин-рингеровском растворе при посевной дозе 1000 клеток в 0,025 мл раствора, музейных штаммов микроорганизмов других видов и некоторых изолятов из испражнений человека при посевной дозе 10 клеток в 0,025 млВцистеин"рингеровского раствора, Поо севы инкубируют аэробно при 37 С в течение 48 ч.. Селективная среда обеспечивает рост всех использованных штаммов лактобацилл, в то же время рост: всех других микроорганизмов за исключением энтерококков не наблюдается,Из испражнений 23 здоровых лиц вы". делено 205 штаммов лактобацилл различных видов и 50 штаммов энтерококков.П р и м е р 2. Готовят среду в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем количестве, г/л:Глюкоза 15,0Триптический перевар казеинаДрожжевой экс так т 40Мясной экстракт 8,0Ацетат натрия 25,0Цитрат аммония 1,0Дигидрофосфат калия 3,0Сульфат магния 0,4Хлорид марганца 0,1Сульфат железа 0,004Твин0,8Оксикобаламин 0,00025Тиамина бромид 0,025Рибофлавин 0,0005Пиридоксина гидро147957 0,00090,320,0 12,0,0080,0080,0001 хлорид 0,025Никотиновая кислота 0,005Аскорбиновая кислотаа 0,025Био тин 0,0005Пантотенат кальция 0,0005Трис-соляно-кислыйбуферКарбонат кадмияЖелчьФузидин натрияНатриевая соль ленорина 0,25Агар-агар 12,0Дистиллированнаявода ОстальноеНа полученную среду производят высевы различных штаммов лактобацилл, псевдомонад, эшерихий, клебсиелл, бацилл, энтерококков, дрожжевых грибов и др, После 48 ч аэробного инкубирования наблюдают рост всех использованных штаммов лактобацилл (кроме 1.асЕоЬас 11 цз Ееппепйцш 53163) и энтерококков, Рост других микроорганизмов отсутствует.П р и м е р 3. Аналогично примеруготовят селективную среду следующего состава, г/л:Глюкоза 25,0Триптический перевар казеина 5,0Дрожжевой экстракт 6,0Мясной экстракт 15,0Ацетат натрия 40,0Цитрат аммония 3,0Дигидрофосфат калия 6,0Сульфат магния О, 6Хлорид марганца 03Сульфат железа 0,03Твин1,5Оксикобаламин 0,00Тиамина бромид 0,075Рибофлавин 0,0015Пиридоксина хлоРид 0,075Никотиновая кислота О, 015Аскорбиновая кислота О, 075 Био тин 0,0015Пантотенат кальция 0,0015Трис-соляно-кислыйбуфер 48,4Карбонат кадмия О, 02Желчь 0,012 Фуэидин натрияАмфотерицин ВАгар-агарДистиллированнаявода ОстальноеНа полученную селективную средупроизводят высевы штаммов, перечисленньо в примере 2. После 48 ч аэробоного инкубирования при 37 С наблюдают рост штаммов лактобацилл (кромеЕ.Ье 1 чейсцз 5009) и энтерококков,Рост других микроорганизмов отсутствует (см.таблицу)Как видно иэ представленных в таблице данных, на известных средахво 2-6 разведениях материала вырастают бациллы, кандида, некоторые другие микроорганизмы. Вплоть до 7-9разведения наблюдается рост. энтерококковНа предлагаемой среде растутлишь лактобациллы и энтерококки, причем рост первых на два порядка в пятом и седьмом разведениях материала25 превосходит таковой на известнойсреде . Рост энтерококков на предлагаемой среде хуже, чем на первых двухсредах, Колонии лактобацилл, снятыес известных сред, при рассеве выявЗО ляют содержание кишечной палочки,пептострептококков, кандида и другихмикроорганизмов, Колонии лактобацилл,снятые с предлагаемой селективнойсреды, содержат монокультуру и неЗ 5 требуют дальнейшей очистки путем рассевов,Формула изоб ре тения 40 1. Питательная среда для выделения лактобацилл, содержащая глюкозу7триптический перевар казеина, дрожже"вой экстракт, ацетат натрия, цитратаммония, дигидрофосфат калия, суль" 45 фат магния, соль марганца (11), сульфат железа (11), твин, агар-агари дистиллированную воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с цельюповышения селективных свойств сре ды, она дополнительно содержит мясной экстракт, оксикобаламин, тиаминабромид, рибофлавин, пиридоксина гидрохлорид, никотиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, биотин, пантоте нат кальция, О,-0,4 М трис-солянокислый буфер с рН 5,85-5,9, карбонаткадмия, антибиотик,.сухую медицинскую желчь, фузидин натрия, в качестве соль марганца она содержит хлорид1479517 Никотиновая кислота 0,005-0,015АскорбиноваякислотаБиотинПантотенат 0,025-0,0750,0005-0,0015 0,0005-0,0015 Количество колоний Среда разведения Лактобациллы 1111 10 10 10 10 10 Сплош 20 1.ной 67 3 Сплош" .Единичные ко-.ной лонии бацилл,рост кандида и др. Сплошной Извес тная рост росч- Сплош 3 ной Колонии кандида, плесневых грибов и др.микроорганизмов СплошнойИзвестная рост рост Предлагаемая 3 0 ю еюе т т 2 Сплошной322 Сплошной рост рост П р им е ч а н и е: Числа показывают количество выросших колоний,отсутствие роста, Составитель Г,СмирноваРедактор М.Недолуженко Техред Л.Сердюкова КарректорС,Черни Заказ 2505/26 Тираж 501 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 марганца при следующем соотношении ингредиентов, г/л:Глюкоза 15,0-25,0Триптический,перевар казенка 8,0-15,0Дрожжевой экстракт 4,0-6,0Мясной экстракт 8,0-15,0Ацетат натрия 25,0-40,0Цнтрат аммония 1,0-3,0Дигндрофосфаткалия 3,0-6 0Сульфат магния 0,4-0,6Хлорид марганца (11) 0,1-0,3Сульфат железа (11) 0,004-0,3Твин0,8-1,5Оксикобаламин 0,0025-0,001Тиамина бромид 0,025-0,О 75Рибофлавин 0,0005-00015Пиридоксинагидрохлорид 0,025-0,075 1 кальция0,1-0,4 М10 трис-соляно-кислыи буфере рН 5,85-5, 9 12, 1-48,4Карбонат кадмия 0,008-002 15 Сухая медицинская желчь 0,008-0,012фузндин натрия 0,0001-0,0009Антибиотик 0,1-0,46Агар-агар 12, 0-20,0 20 Дистиллированная вода Остальное,2, Питательная среда по п,1, о т -л и ч а ю щ а я с я тем, что в качестве антибиотика она содержит амфо терицин В в количестве 0,1-0,3 г/лсреды или натриевую соль леворина вколичестве 0,25-0,46 г/л среды.1 Знтерококки . Другие микроорганизмы