Способ микробиологического окисления стероидных соединений

Класс ЗОЬ, 2135427 СССР САНИЕ И ЕТЕНИ ТЕНТ одписная группа Л 5 1 Ж аявител Иностранное предприят Хиноин 1 дьодьсе Ведьесе Т кек Дьара Рт.Венгрия) Ц,ействи льые изоорстатсл иностранцы ьордь Викс и Карольбре СПОСОБ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО О СТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИ ЕНИЯ н 960 г. за ЪЪ открытий при ено 5 фе 653233/3 в Комитет поСовете Министров СССРстене изобретений .Хе 2 ислам изобретений и Опубликовано в мол 961 Известные методы микробиологического окисления стероидов используют окисление в ферментаторах.Предлагаемый способ микробиологического окисления стероидных соединений заключается в том, что через неподвижнуо массу мицелия которая имеет форму бус, пропускают культуральную жидкость, содержащую кислород воздуха и окисляемое стероидное соединение. Особенность способа состоит в использовании циркуляции культуральной жидкости через слой неподвижной массы мицелия, причем периодически часть питательной среды отвозится, и из нее выделяются продукты реакции. Взамен отобранной части питательной среды в цнркулируюгций раствор добавляют свежую питате. 1 чую среду.Способ осуществляется в хроматографической колонне, в средней части которой имеется неподвижный слой бусовидных культур микроорганизмов, отделенный от текущей жидкости фильтруошей поверхностпо. Насыщаемая кислородом питательная среда с добавлением стероидов циркулирует через слой неподвижного мицелия микроорганизмов, Бусо- видные культуры адсорбируют большие количества стероидов, в связи с чем замена непрерывно отходящей из системы жидкости, содержащей окисленные стероиды, может быть осуществлена и путем применения питательной среды, лишенной стероидов. Отделенную культуральнук жи.1135427 Предмет изобретения Способ микробиологического окисления стероидных соединений мицелийобразующими микроорганизмами, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что через неподвижную массу мицелия, которому придана форма бус, пропус кают насыщенную воздухом питатсльную среду, содержащую окисляемое стероидное соединение, а целевые продукты выделяют из отводимого раствора известными способами. Редактор В. В, Бердюгина Техред А. Л Камышникова Корректор Цвернна Формат бум. 70 У 108/1 в Тираж 460 ЦБТИ при Комитете по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Центр, М. Черкасский пер., д. 2/6Поди. к,печ. 20.17-61 г Зак. 406 Типографии ЦБТИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Петровка, 14.кость заменяют или чистой водой, или физиологическим раствором, илипитательной средой с добавлением дополнительных количеств стероида.Л р и м е р 1. Для приготовления мицелия смесь из 5 л 2%-ного раствора глюкозы и 2%-ного водного раствора от замочки кукурузы и питательной среды с содержанием 0,1% хлористого натрия, стерилизованнуюпри рН 4,5 и 121, инокулируют 1,6 10 спор КЫзорцз п 1 дг 1 сапз. В ферментатор пропускают в течение двух дней воздух при 28 при перемешивании. При этом наблюдается бусовидное развитие грибковой культуры,400 ил которой переносят в хроматографическую колонну. К циркулирующей жидкости добавляют 160 лг прогестерона и 4 мл ацетона, Посленачала аэрации (5 л/мин) при скорости циркуляции 75 мл/мин через 6,8, 10, 12, 14 часов отбирают по 250 мл фильтрованной жидкости, причемэто количество замещают свежей питательной средой. Через 16 часов изобъединенных экстрактов питательной жидкости и оставшегося в колонке мицелия выделяют 158 иг стероидов: 115,0,иг 11 а-оксипрогестеронаи 43 лг прогестерона, причем в реакцию вступает 72% исходного количества прогестерона,П р и м е р 2. Условия ферментации и обработки такие же, как в примере 1, но при отборе проб через 6, 8,10, 12, 14 часов отбиравшаяся питательная среда заменяется дистиллированной водой. Аэрация -3 л/,мин, скорость циркуляции жидкости - 240 мл/мин. Выделяют162,0 яг стероидов; 148,0 мг 11 а-оксипрогестерона, и 14,0 яг прогестерона. В реакцию вступа ет 90% от исходного количества прогестерона.П р и м е р 3. Условия ферментации и обработки такие же, как в примере 1, но при отборе проб используемая для пополнения питательнаясреда содержит 40 мг прогестерона. Общее количество стероида, пропускаемого через колонну, - 280 иг, Аэрация - 3 л/мин, скорость циркуляции - 250 мл/мин, Выделяют 244,4 11 а-оксипрогестерона, в реакциювступает 80% исходного количества прогестерона.П р и м е р 4. 5 л питательной среды, описанной в примере 1, инокулируют в стеклянном ферментаторе 6 Х 104 спор Сцпп 1 пфогпе 11 аЬ 1 а 1 ез 1 ееапа, культуру подвергают аэрации в течение двух дней при 28.400 мл бусовидной культуры подвергают хроматографированию с добавкой 100 мл соединения Рейхштейна. ь 1 ерез 4, 8, 12, 16 и 20 часов отбирают по 200 мл жидкости и заменяют их 200 мл свежеферментной жидкости, Отобранные пробы экстрагируют. Путем хроматографии на бумагев них обнаруживают гидрокортизон, образующийся с хорошим выходомнаряду с картизоном и более полярными продуктами, чем гидрокортизон,