Способ подготовки ткани к электронно-микроскопическому исследованию

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН ТЕНИ ЬСТВ 5/28-148587. Б ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗО АВТОРСКОМУ СИИ(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ТКАНИ К ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОМУ ИССЛЕДОВАНИЮ(57) Для повышения качества подго- . товки ткани животному чепез канюлю, вставленную в грудную аорту, промывают сосудистое русло гепаринизированным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену, температура раствора 36- 37 С. Вводят в течение 15-20 мий 4 Х-ный раствор глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере. Через 15 мин вводят взвесь туши в 47-ном растворе глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере до появления ф окрашенного раствора в дренирующей канюле. Орган извлекают, прецизионно забирают из интересующего участка ма- , териал для электронно-микроскопического исследования.евйФормула изобретения Способ подготовки ткани к электронно-микроскопическому исследованию, включающий внутрисосудистую фиксацию ткани путем перфузии буферным раетвором глутарового альдегида с последующим контрастированием взвесью китайской туши, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения качества подготовки за счет сохранения естественного соотношения тканевых структур, ткань предварительно перфузируют в течение 15- 20 мин фиксирующим раствором, а Монтрастирование взвесью китайской туши проводят в фиксирующем растворе до насыщения ткани красителем,Составитель А, АгуреевРедактор И. Горная Техред Н.Глущенко Корректор О. Луговая Заказ 879/43 Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий,113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4 1 129858Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при изучении структур паренхиматозных органовЦель изобретения - повышение качества исследуемого объекта, достигается за счет сохранения естественного соотношения тканевых структур при фиксации в два этапа, при этом второй этап совмещен с контрастиро ванием.П р и м е р 1, Животному, находящемуся под наркозом, через канюлю, вставленную в грудную аорту,промывают сосудистое русло гепаринизи рованным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену (или в отводящем сосуде от органа, если объектом исследования является один орган).Про мывающий раствор содержит, вес,%:ИаС 1 7,4 - 7,8КС 1 0,3 - 0,40,5 М трис-НС 1 40,0 - 42,0Новокаин 1,0-1,5Дистиллированная вода ОстальноеК приготовленному раствору добав" ляют 1000-1100 МЕ гепарина, Температура раствора ЗбС, ЗОПосле промывки сосудистого русла проводят предварительную фиксацию (первый этап) тканевых элементов микроциркуляторного русла и прилегающей ткани путем введения тем же спо- .35 собомв течение 15 мин 4%-ного раствора глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере из расчета 50 мл на1 кг массы животного. Фиксирующийраствор содержит, мл: 4025%-ный глютаровыйальдегид 1 бОФосфатный буфер. 840Через 15 мин предварительной фиксации проводят дофиксацию (второй 45этап) тканевых элементов микроциркуляторного русла и прилегающих тканей с одновременной инъекцией сосудисто- о русла. С этой целью через вставО гленную канюлю вводят взвесь китайской туши в 4%-ном растворе глютарового альдегида. При этом инъецируемаясмесь содержит, мл;25%-ный глютаровыйальдегид 150Фосфатный буфер 0,5 М 800Тушь 50Введение осуществляют до появленияокрашенного раствора в дренирующейканюле. После этого извлекают орган,выделяют соответствующие участки иготовят криостатические срезы толщиной 150-200 мкм, при малом увеличении светового микроскопа фотографируют интересующий участок и прецизионно из него забирают материал дляпоследующего электронно-микроскопического исследования,П р и м е р 2, Способ осуществляют как описано в примере 1, при этом предварительную фиксацию проводят в течение 20 мин.Способ позволяет благодаря предварительной фиксации п чиччо сосудистого русла и прилегающей ткани лучше сохранить в препарате естественные соотношения в тканевых структурах.