Способ получения вещества, специфически связывающего ракоэмбриональный антиген опухолей толстого кишечника человека

(50 4 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ орга нау ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Тихоокеанский институт бионической химии Дальневосточного чного центра АН СССР(56) Авторское свидетельство СССРУ 1077090, кл, А 61 К 37/02,А 61 К 39/00, 1983,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СПЕЦИФИЧЕСКИ СВЯЗЫВАЮЩЕГО РАКОВОЭМБРИОНАЛЬНЫЙ АНТИ 1 ЕН ОПУХОЛЕЙ ТОЛСТОГОКИШЕЧНИКА ЧЕЛОВЕКА(57) Изобретение относится к биохимиии может быть использовано для выделения вещества, специфически связывающего раковоэмбриональный антиген(РЭА), Цель изобретения - повышениеспецифической активности веществапутем его дополнительной очистки наРЭА-сефарозе и гель-хроматографии.РЭА-сефарозу используют в качестве аффинного сорбента, ее готовят иммобилизацией очищенного РЭА на бромциансефарозе, На колонку с РЭА-сефарозой, уравновешенную буфером(0,05 М трис-НС 1 с 0,15 М ИаС 1,5 мМ СаС 1 и МяС 1), наносят растворэкстракта ткани рака-отшельника, содержащего РЭА-связывающее веществос титром 1 О мкг/мг вещества, Посленанесения раствора лиофилизата колонку дополнительно промывают уравновешивающим буфером. Связывающееся ссорбентом вещество элюируют 0,090,15 М раствором лактозы на том жебуфере. Элюант концентрируют на мембране "Рипор". Сконцентрированноевещество хроматографируют на колонкес биогелем Ц. Затем элюируют слинейным градиентом лактозы 0-0,5 М.Собирают фракции с мол.мас. 3600046000 дальтон. Затем концентрируютих ультрафильтрацией на мембране"Рипор", диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют. Получают химически и иммунохимически гомогенное вещество,1287880 Составитель М.ВасильевТехред М. Ходанич Корректор С. Черни Редактор Е,Папп Заказ 4938 Тираж 594 ПодписноеВНИИ% Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4 Изобретение относится к биохимиии может быть использовано для выделения вещества, специфически связываю.щего раковоэмбриональный антиген(РЭА) человека.Цель изобретения - повышение специфической активности вещества засчет его дополнительной очистки наРЗА-сефарозе и гельхроматографии.П р и м е р 1, РЭА-сефарозу, которую используют в качестве аффинногосорбента, готовят иммобилизацией очи.щенного РЭА на бромциансефарозе (Фармация, Швеция) в соответствии с методикой фирмы-изготовителя. Очищенный препарат РЭА выделяют по известной методике,На колонку (1,4 х 3,0 см ), заполненную РЭА-сефарозой и уравновешенную буфером (0,05 М трис-НС 1 и0,15 М ИаС 1, 5 мМ СаС 1 и МдС 1,рН ,2 ), наносят со скоростью 7,5 мл/ч12 мл раствор экстракта ткани ракаотшельника, содержащего 400 мг РЗАсвязывающего вещества с титром10 мкг/1 мг вещества, После завершений нанесения раствора лиофилизатаколонку дополнительно промывают уравновешивающим буфером до исчезновенияпоглощения при 280 нм, пропуская в,общем случае 30-60 мл буфера черезколонку. Связавшееся с сорбентом вещество элюируют 0,09 М раствором лактозы на том же буфере. Элюант концентрируют до объема 1 2-13 мл ультрафильтрацией на мембране "Рипор". Сконцентрированное вещество хроматографируют на колонке (2,6 х 90 см) сбиогелем П(50-100 меш.), Элюцию проводят буфером (0,05 М трис-НС 1с 0,15 М ИаС 1, 5 мМ СаС 1 и МяС 1рН 7,2) со скоростью 20 мл/ч. Собирают фракции с относительной мол.массой 4100+5000, концентрируют их ульт 10 рафильтрацией на мембране "Рипор"до объема 10-15 мл; диализуют противдистиллированной воды и лиофилизуют.Получают 33 мг химически и иммунохимически гомогенного вещества,15 11 р и м е р 2. Ведут выделениевещества как в примере 1, но осуществляют 0 15 М раствором лактозы. Получают 35 мг гомогенного вещества,20 формула изобретения Способ получения вещества, специфически связывающего раковоэмбриональный антиген опухолей толстого ки шечника человека, путем гомогенизацииткани рака отшельника Радигия рг- Йеаих, диализа и лиофилизации экстракта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения специфической 30 активности вещества, лиофилизированный экстракт хроматографируют на РЭА- сефарозе, проводят элюциа линейным градиентом лактозы 0-0,5 М, отбирают фракцию, содержащуюся в 0,09-0,15 М растворе лактозы, далее проводят гель- хроматографию и собирают целевой процукт с мол.мас. 36000-46000 дальтон.