Способ дифференциации r-форм холерных вибрионов от l-форм и их ревертантов

Номер патента: 1161555

Опубликовано: 15.06.1985

Авторы: Асеева, Голубкова, Каграманов, Ломов

МПК: C12Q 1/04

Метки: бактериальных, вибриона, дифференциации, форм, холерного

...на по р верхность выросших колоний наносят каплю смеси, состоящей из 0,005- Ор 05 Х-ного раствора й "нитроголубого тетразолия хлорида и 10-25 мИ концентрации одного иэ субстратов цикла 25 Кребса, взятых в соотношении 1: 1, и дифференциацию К"форм от бактериальных форм холерного вибриона осуществляют по отсутствию окрашивания колоний.39В качестве субстрата цикла Кребса используют яблочную кислоту, янтарную кислоту, цитрат натрия, изоцитрат натрия илн К-кетоглутарат.П р и м е р 1. Непосредственно на подозрительную колонию, выросшую на плотной питательной среде, наносится капля смеси, состоящей из 0,05 Х"ного раствора И -нитроголубого тетразолия хлорида и 25 мМ раствора ф иэоцитрата в соотношении 1: 1, Отсут-ствие окраски свидетельствует о...

Номер патента: 1475336

Опубликовано: 23.09.1990

Авторы: Асеева, Голубкова, Ломов, Рублев, Фоменко

МПК: C12Q 1/00, G01N 33/48

Метки: вибрионов, формы, холерных

...К-Формы окрашивались в. бледно-розовый цвет, а у Л-форм наблюдалось красное окрашивание, свидетельствующее обобразовании фенилгидраэона глиоксиловой кислоты.П р и м е р 2, Иэ подозрительных колоний отбирают 2 петли материала (соответствует 5 млрд. микробных клеток) и в 0,2 " 0,4 мл буферного растнора (например, 0,15 М ХЕПЕС; рН 7,4) приготавливают бактериальную взвесь, Рабочие растворы приливаемых ингре" диентов готовят с расчетом, чтобы в , конечном объеме 1 мл содержались следующие количества компонентов, добавляемые в указанной последова-. тельности: 5 млрд. микробных клеток,.1,0 мг тритона Х"100, 0,2 мкмоль глиоксилата, 0,25 мкмоль ацетил-. КоА, после перемешивания и 30-минутногооинкубирования при 37 С (максимальное время,...

Номер патента: 1057537

Опубликовано: 07.01.1985

Авторы: Асеева, Каграманов, Ломов

МПК: C12Q 1/04

Метки: бактериальных, вибрионов, дифференциации, исходных, форм, холерных

...исходных бактериапьных форм путем приготовления взвеси исследуемого материвда, выращивания на питательной среде с посдедуюшим исспедованием выросших колоний, из выросших копоний готовят суспенэии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 50-60 мин, определяют наличие . мвлонового диадьдегида и по его концент 35 рации дифференцируют 1-формы и их ревертанты первых пассажей и исходные бактеривльные формы холерных вибрионов,П р и м е р . Из копоний, подозрительных нв 1, -форму, берут мвтеривд 4 О и готовят взвесь на трис - НС 6 -буфере. Суспенэию инкубируют в термостате окодо часа при постоянном встряхивании, Реакцию останавливают 0,1 мп 100%-ной трихдоруксусной кислоты (ТХУ), затем к 4 пробам добавляют 2 мд 30%-ной ТХУ, 0,2 мп 5...

Номер патента: 595996

Опубликовано: 15.03.1982

Авторы: Воронежская, Гулида, Колесникова, Уралева

МПК: C12K 1/04

Метки: вибрионов, идентификации, обнаружения, холерных

...вызывает помутнение и образование пленки. Обладает индофенолоксидазной активностью, расщепляет до 10 кислоть 1 без газа глюкозу, маннит, маннозу,сахарозу, крахмал; не ферментируст арабинозу, лактозу: дскарбоксилнрует лизин н орнитпн, но не обладает днгидролазой аргннина; образует нндол, лецнтиназу; раз 15 жнжаст желатпну, не образует сероводорсд. Оптпмл роста 37 С, НАГ-мутант чЬ- по сЬоегас 461/67 - 34 не агглютинируется О-, тппоспецпфнчсскими, КО-холерными сыворотками. Йрн иммунизации кроликов 20 вызываст образование специфических антител.Для получения агглютинирующей сыворотки кроликов весом 2,5 - 3,0 кг иммуннзируют взвесью в физиологическом раство ре 18-часовой агаровой культуры вибрионовНАГ-мутанта 1 Ьпо сЬо 1 егае 461/67 - 34,...

Номер патента: 1773940

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Мишанкин, Пинигин, Поздеева, Шевченко

МПК: C12N 15/03

Метки: вариантов, вибриона, нехолерогенных, холерного, цамф-негативных

...25 30 хлороформа. Лизат осветляли при 16000 об/мин и исследовали на наличие цАМФ.Количество белка в лиэатах определяли методом, основанном на спектрофотометрировании растворов при двух длинах волн, разности в величине оптической плотности при 228,65 и 234,5 нм, Концентрация белка, вносимая в пробу при определении цАМ, составляла 60 мкг.При определении цАМФ инкубацию образцов проводили на ледяной бане в течение 2 ч. Отделение белоксвязанного цАМФ от несвязанного нуклеотида осуществляли адсорбцией свободного нуклеотидана угле марки "Норит А", для чего в каждую пробу добавляли 100 мкл угольной суспензии (2,60-ный раствор угля, 20 ь-ный раствор БСА) с последующимцентрифугированием при 10000 об/мин. Равные количества супернатанта (200 мкл)...