Способ дифференциации -форм холерных вибрионов и исходных бактериальных форм

,ЯО 10575 5 п С 12 4 йсгаедрд ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН цНБДЮда. ЕЛЬСТВУ Н АВТОРСН ти 7 6.093.1 (088.8 ) Справочник по микробнол ирусологическим методам Под ред. М.О.Биргера, М на", 1967, с, 17.-18 (и 7) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦ РМ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИО огиченссл тоти АЦ ОВ с Я Сл ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРпО делАм изОБРетений и ОтнРытий(71) Ростовский-на-Дону госный научнсисследовательскичумный институт(54) (5 лИ ИСХОДНЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ФОРМпутем приготовления взвеси исследуемого материала, выращивания на питательнойсреде с последующим исследованием выросших колоний, о т л и ч а ю ш и йн- с я тем, что, с целью повышения точоности способа, из выросших колоний, готовят суспензии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 50- с мин, определяют наличие мало е- нового диальдегида и по его концентрации цифференцируют-формы и и), их ревертанты первых пассажей и ИИ исходные бактериальные формы холерных вибрионов.О 1 1057Изобретение относится к медицинскоймикробиологии и касается диагностикиособо опасных инфекций.Известен способ дифференциации Ьформ хаперных вибрионов и исходных бактеривльных форм путем приготовпениявзвеси исследуемого материала, вырвшивания на питательной среде с последующим исследованием выросших копоний путем приготовпения микроскопических пре Опаратов и исследования их с помощью фазовоконтрастного микроскопа ЯОднако известный способ не "обеспечивает высокой точности, так как-формы ходерного вибриона по морфологии 15копоний сходны с К -вариантами и подфазовым микроскопом могут обнаруживаться попиморфные и-подобные клетки,Кроме того, известный способ позволяет проводить только качественную дифференцивцию без копичественного показателя состава попудяции.Белью изобретения является повышение точности способа.Эта цель достигается тем, что согдасно способу дифференциации , -формхолерных вибрионов и исходных бактериапьных форм путем приготовления взвеси исследуемого материвда, выращивания на питательной среде с посдедуюшим исспедованием выросших колоний, из выросших копоний готовят суспенэии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 50-60 мин, определяют наличие . мвлонового диадьдегида и по его концент 35 рации дифференцируют 1-формы и их ревертанты первых пассажей и исходные бактеривльные формы холерных вибрионов,П р и м е р . Из копоний, подозрительных нв 1, -форму, берут мвтеривд 4 О и готовят взвесь на трис - НС 6 -буфере. Суспенэию инкубируют в термостате окодо часа при постоянном встряхивании, Реакцию останавливают 0,1 мп 100%-ной трихдоруксусной кислоты (ТХУ), затем к 4 пробам добавляют 2 мд 30%-ной ТХУ, 0,2 мп 5 М соляной кислоты (НСЦи 2 мп537 20,75%-ной тиобарбитуровой кислоты, сисвят н горячую водяную баню на 15 мин,При наличии в пробе.- форм хоперного вибриона развивается окраска от ярко желтой до оранжевой. Интенсивность обраэующейся окраски, измеряют на спектрофотометре при длине вапны 535 нм ипи на фотоэдектрокопориметре с зеленым светофидьтром. Копичество образовавшегося малонового дивдьдегидв вычисляют но формуле; 9Сж ЗЕ, 10 10 з, 1,56,10 .5где С - концентрация мвдоновогогида, нмопь/млрд микробньток (м. кд.),Е - показания спектрофотометра (экстинция),В1,56 ф 10 - моп й коэффициентэкстинции дпя мвдонового дивдьдегида.В работу быди взяты 7 штаммовформ хоперных вибрионов и их исходныеварианты -3933, 3935, 3943 - серотипа "Инабв", 4608,4616, 4617, 4661.серотипа "Огавв",В твбпице предстаапена дифференциация- форм, ревертантов и исходных бакривдьных форм в зависимости от концен.траций мвдонового дивльдегида.Концентрация мвдонового дивдьдегидв.(МЙА):выше 0,1 имать/млрд,м.кд, достоверно свидетельствует о наличии в проберевертвнтов хоперных вибрионов, в выше0,6 нмодь/мдрд.м,кд - их 1. -форм. Количество МДА у бактеривльных форм колебалось от 0 до 0,06 нмодь/млрд,м,кд. дивдьде1 х кде ярнь те Минимвдь-форм хопер о определить опичес торые ных вибрионов, к соответствует 1Испопьзоввние повысить точност концентрацию воз форме в одной по определить в как циркулирует возб мдрд,м,кл изобре, Продолжение таблицы Концентрация малонового диальдегида, н моль/млрд.м.кл. Штаммы нсхоаные ревертанты (, -формы 0,12 0,50 3 943 0,60 0,07 4608 0,02 0,76 0,1 4616 4617 0,13 0,06 0,1 4661 0,06 Х=0,057 Средняя с.оставитель Г.СмирноваРедактор Л,Пчолинская Техред М,Наць Корректор А.ференц Заказ 9469/3 1 Тираж 523 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5