Способ определения цитотоксичности пыли

(54) (57) СПОСОБТОТОКСИЧНОСТИ ПЫвания действия пробыкрови, о т л и ч а ю.:точности способа, к смцнтов добавляют люминтенсивность хемилквапвеличине определяютпыли. А. Влади Суслова инстит ОСУДАРСТВЕНКЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕКИЙ И ОТКРЫТЮ.АВТОРСКОМ,К СВИД(71) 2-й Московский ордена Легосударственный медицинскийим. Н. И. Пирогова(56) 1 Методические рекомендМ., МЗ РСФСР, 1979, с, .7-9тип) . ОПРЕДЕЛЕНИЙ БИЛИ путем исследо.- пыли йа клетки щи й.ся тем я и повышения еси пыли.и лейкоол, измеряют инеспенпии и по ее питотоксичность1010561 45 50 ль Е, Житникова аточка Корректор И. Шулла Заказ 2482/35 Тираж 871 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушскаянаб., д. 4/5 Филиал ППП "П атент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ относится к гигиене и может , быть применен в целях гигиенического нормирования предельно допустимых концентраций промышленный пылей, а также в целях профилактики профессиональных пылевых заболеваний легких.Известе способ определения цитотоксичности пыли путем исследования действия пробы пыли нв клетки крови 1.Недостатками известного способа являются длительноств проведения ана- лиза, неспецифичность взаимодействия зритроцитов с инородными частицами, из-за чего точность анализа определения цитотоксичесих свойств пыли невелика,Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа.Указанная цель достигается тем, чтов способе определения цитотоксичности.пыли путем исследования действия пробы пыли на клетки крови отличительнойособенностью является то, что к смесипыли и лейкоцитов добавляют люминол,измеряют интенсивность хемилюминесценпии и по ее величине определяютцитотоксичность пыли.Способ осуществляют следующнм образом,Гепаринизированную кровь наслаиваютнв градиент фиколла- верографина плотностью 1,068 и центрифугируютпри1500 об/мин в течение 40 мин, Послеценгрифугирования лейкоциты собираютс интерфвзы, промывают один раз 0,9%-мраствором хлористого натрия (рН 7,4) .Окончательно клетки суспендируют вэтом же растворе в концентрации 1,5210 клеток/мл, определяют их жизнеспособность в тесте с трипановым синим. Суспензию выделенных лейкоцитовхранят и снликонированной посуде нвльду в течение 3-4 ч, при этом жизнеспособность клеток сохраняется. Средадля хемилюминесцентных измерений со держит 5,5.10 М люминола. Суспензию клеток, взвесь пыли в физиологическом растворе вводят в измерительнуюотермостатированную при 37 С кюветунепосредственно во время измерений вопределенной последовательности.Сос т авитеРедактор В, Пилипенко Техред Т,Л 1 5О 5 20 25 .О 35 40 2П р и м е р . 2 мл гепаринизированной крови наслаивают на градиент фиколлв-верографина, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 40 мин. После центрифугирования собранные лейкоциты однократно промывают 0,9% раствором хлористого натрия. Отмытые клетки суспендируют в 0,9% растворе хлористого натрияТак, чтобы концентрация клеток в. суспензии составляла 2,510 мл . Затем 0,1 мл полученной клеа тточной суспензии вводят в измерительную кювету хемилюминометрв. Предварительно кювету заполняют 2 мл раствора, содержащего МОС 1 0,9%,глюкозы 5 мМ,МУСО 2,5 мМ и люминога 0,065 мМ. Раствор в кювете термостатируется при 37 С и перемешивается, Закрывают кювету хемилюминометра светоизолирующим кожухом, подают на фотоэлектронный умножитель напряжение 640 В и непрерывно в течение 10-. 15 мин измеряют интенсивность хемилюминесценции клеточной суспензии интенсивность такой спонтанной ХЛ составляет 10-15 отн. ед. Через 5 мин после начала измерений через специальную трубку, не нарушая светоизоляции в кювете, вводят в нее 0,2 мл взвеси пылевых частиц Люберецкого кварца в физиологическом растворе, Через 20-30 с наблюдают быстрое увеличение интенсивности хемилюминесценции, которая достигает максимума через 1 мин. Величина максимальной интенсивности свечения составляет 190-210 отн. ед, Пылевые частицы Люберецкого кварца обладают высокой цитотоксичностью. Если в кювету вместо Люберецкого кварца ввести пыль малоцитотоксичную, например лунный грунт, то максймальная интенсив,- ность свечения составит только 1 5-18 отн, ед. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает быстрое (за 10-15 мин) проведение анализа и его высокую точность (100%-ое совпадение с результатами морфологических, биохимических и других исследований цитотоксичностиобразцов).