Противоопухолевое средство

(1 г ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН митет Российской Федерации патентам и товарным знакам к авторскому свидетель(71) Всесоюзный онкологический научныйцентр АМН СССР, Институт химии Уральского отделения АН СССР(57) Область применения: изобретение относится к медицине, а именно онкологии, Цель: повышение активности средства и снижение побочных эффектов. Сущность изобретения: состав содержит (в мас.%): 9- (2-хлорэтил) -7-нитрозо;гомоцитруллин) 00 0,6-0,95; 9-(2-хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллин) 0,05-0,4; декстран (м.м. 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м.м. 12600) 0,5-2,0; ли- С монную кислоту или сорбиновую кислоту ( ) 0,025-0,1; воду для инъекций или 5%-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида до 100. 14 табл 4 ил1834006 19 20 Таблица 9 Противоопухолевое действие лекарственных средств на лейкоэы (препараты применены в оптимальных дозах и режимах)Штаммы оп олей Лекарстствен 1.-1210 Р-З 88, изл,1.а УПЖ, МОРС -406 УПЖ, ь9+721+8 53 33 44 73-105 Предлагаемое средняя продол 3 месяцТо же 24,5+0,5 17,3+0,7 1 1,4+0,4 12,0+0,3 ни)- лейкоз, индуцированный вирусом Мазуренко (клеточный вариант)- спонтанный лейкоэ мышей линии АКР (первые генерации)) - в повторном опыте доза прототипа - 30 мг/кг, оказалась непереносимой) - эффект дан по УПЖ ф), Данные З.П. Софьиной (17) и Советско-американскоймонографии. Таблица 10 Противоопухолевое действие лекарственного средства на солидные опухолиС, РШМС - 180, С - 37 (асцитная)- Средняя продолжительность жизни животных в контроле (дни). 1.СС = 28,3+4,5, РШМ- 5 - 40,5, С - 180 -36,6 С-18,1+ 1,2. ТРО - Среднее значение эффекта, определяющеесяот гибели мышей в контроле.- Для С - 37 даны значения УПЖ ф) и излечения ф),Прототип НММПрототип НММ Конт оль эффект препаратовжитель- ность жизни мышей 3 месяц То же 15,2+0,37 8,8+1,81834006 21 22 Таблица 11 Протиэоопухолевый эффект лекарственного средства на солидные опухоли Са, В,АКАТОЛ) - Средняя продолжительность жизни животных в контроле (дни). Са- 21,5+3,6,В - 16- 22,9+ 3,4, АКАТОЛ -46,4+6,6, ТРО - Среднее значение торможения роста опухоли,определявшееся до гибели мышей в контроле.- Показатель УПЖ для АКАТОЛ не подчиняется закону нормального распределенияиндивидуальных показателей жизни животных. Таблица 12 Противоопухолевое действие изомеров в сравнении с предлагаемым препаратом однократное внутрибрюшинное введениеШтаммы оп холей Доза, мг/кг Препарат) - Для изомера дано значение УПЖ ф). 600-800 1000 1250 97-99,9 3/8 99,899,9 16/1623 1834006 24Таблица 13 Действие лекарственных средств на развившийся лейкоз =1210 (однократное лечение на 5-е сутки после перевивки опухоли: средняя продолжительность жизни мышей в контроле 8,8+1,8 дней)Таблица 14 Противоопухолевое действие лекарственного средства на рак легкого Льюис при разных сроках качала и разных режимах лечения (средняя продолжительность жизни животных вконтроле 37,3 дня)- шчлдгяиж лвсятвнеок сщствоП0,05 0,80 0,25 1,00 0,05 Изобретение относится к медицине икасается лекарственных средств, предназначенных для лечения злокачественных опухолей,Целью изобретения является повышениеактивности и снижение побочных эффектов.Цель достигается тем, что прелагаемоелекарственное средство для лечения злокачественных новообразований содержит 9-(2 хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин,9- (2-хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллин,декстран (м.м. 40000) или полиглюкин (м.м,60000), или поливинилпирролидон низкомолекулярный (м.м. 12600), лимонную илисорбиновую кислоту, воду или 5растворглюкозы, или 0,9 О, раствор натрия хлоридадля инъекций в следующих соотношениях,мас, ,: 9-(2-хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин - 0,60-0,95, 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо.-гомоцитруллин - 0,5-0,40, декстран(м.м. 40000) или полиглюкин (м.м, 60000)или поливинилпирролидон (м.м, 12600)0,5-2 лимонная или сорбиновая кислота -0,025-0,100, воды или 5-ного раствораглюкозы, или 0,9 , раствора натрия хлоридадля инъекций - до 100,Лекарственное средство готовят следующим образом: ингредиенты растворяют в водедля инъекций или другом указанном растворителе при слабом встряхивании, избегаянагревания и вводят больному внутривенно.П р и м е р 1, 9-(2-Хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин 0,959- (2-Хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллинПоливинилпирролидон (м.м.12600) 0,5Сорбиновая кислота 0,025Изотонический раствор натрия хлорида До 100,0 ммП р и м е р 2. 9-(2-Хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин9- (2-Хлорэтил-нитрозо.-гомоцитруллин 0,20Полиглюкин (м.м. 60000) 0,80Лимонная кислота 0,04Раствор глюкозы 5, для инъекций До 100,0 млП р и м е р 3. 9-(2-Хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин 0,759-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо.-гомоцитруллинПолиглюкин (м,м. 60000)Лимонная кислота0,27 1,00 0,05 0,33 1,00 0,06 Раствор глюкозы 5;4 для инъекций До 100,0 мл П р и м е р 4, 9-(2-Хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин 0,73 9- (2-Хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллинПолиглюкин (м.м, 60000)Лимонная кислотаРаствор глюкозы 5 для инъекций До 100,0 мл П р и м е р 5. 9-(2-Хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин 0,67 9- (2-Хлорэтил) -9-нитрозо;гомоцитруллинДекстран (м.м, 40000)Лимонная кислотаВода дистиллированная дляинъекций До 100,0 мл П р и м е р 6. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо.-гомоцитруллин 0,60 9- (2-Хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллин 0,40 Декстран (м.м. 40000) 2,00 Лимонная кислота 0,10 Вода дистиллированная дляинъекций До 100,0 млПредлагаемое лекарственное средство в качестве биологически активного вещества содержит нитрозопроизводные аминокислоты (гомоцитруллина) - 9- (2-хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин (изомер 1) и 9-(2-хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллин (изомер П), которые в отличие от прототипа обладают более низкой (в 15 раз ниже) алкилирующей активностью (табл.1),В отличие от прототипа они обладают антиметаболической активностью, конкурируя за ферментную транспортную систему с природным субстратом-лизином.Противоопухолевая активность предлагаемого лекарственного средства различного состава представлена в табл.2. В опытах использовались мыши В 1)Р, самцы и самки, с перевиваемым лейкозом 1.-1210. Препарат вводили однократно, в/бр через 48 ч после перевивки опухоли.Излеченные животные наблюдались от 3 до 24 месяцев без патологии и рецидивов. Контрольные животные (без лечения) погибали через 7-8 дней.Предлагаемый препарат показал высокую эффективность при лечении животных с опухолью легкого Льюис на мышах (однократное, в/бр введение) (табл,3).Излеченные животные наблюдались 12-24 месяца без проявления рецидивов и патологических отклонений, Не обнаружено никаких изменений внутренних органов (в том числе легких) при вскрытии забитых животных, контрольная группа (без лечения) погибала через 28-33 дня после перевивки.Предлагаемое лекарственное средство обладает более избирательным противоопухолевым действием по сравнению с прототипом, о чем свидетельствует вдвое больший по величине химиотерапевтический индекс (табл,4).Это обусловлено наличием в лекарственном средстве двух изомерных форм нитрозопроизводных аминокислоты. Диапазон терапевтических доз изомера П, вызывающих 100;4 извлечение животных с лейкозом 1.-1210 - 37,5-47,4 мг/кг, а в предлагаемом лекарственном средстве этот диапазон расширяется в 2 раза и составляет 26-57 мг/кг (табл.5) .Обнаружено, что предлагаемое средство более избирательно, чем другие нитрозопроизводные нарушает репродуктивную функцию опухолевых клеток при кратковременном воздействии высоких концентраций, вызывая, например, полное ингибирование синтеза ДНК в клетках лейкоза 1.-1210 (фиг.1). (Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера П (40 мг/кг) (2) и изомера 1 (120 мг/кг) (3) на включение 2-14 С-тимидина в ДНК клеток лейкоза 1.-1210).Наряду с этим наблюдается минимальное повреждающее действие препаратов на синтез ДНК в здоровых клетках костного мозга и клетках эпителия тонкого кишечника (фи,2,3). Как показали наши исследования это объясняется конкурентным транспортом изомеров через плазматическую мембрану клетки. Оба изомера переносится в клетки 2-компонентной транспортной системой, а именно лизиновым переносчиком с близкими величинами констант ингибирования транспорта лизина (3,0.0,01 мм - изомер 1, 1,6+0,01 мМ - изомер 11 для высокоаффинной транспортной системы, 2,5+0,2 мМ и 2,3+0,34 мМ соответственно, для низкоаффинной транспортной системы), конкурируя между собой за места связывания с ферментом-переносчиком.Обнаружено, что отдельные изомеры вызывают более сильные повреждения синтеза ДНК здоровых клеток, чем предлагаемое средство (см.фиг.2,3).(Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера 11 (40 мг/кг) (2) и изомера 1 (120 мг/кг) (3) на включение 2-14 С-тимидина в ДНК клеток костного мозга мышей с лейкозом 1.-1210, фиг.2).(Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера 11 (40 мг/кг) (2) и изомера 1 (120 мг/кг) (3) на включение 2-14 С-тимидина в ДНК клеток эпителия тонкого кишечника мышей с лейкозом 1,-1210, фиг,3).Неожиданное сочетание защитного эффекта в отношении здоровых клеток с максимальным повреждающим действием на опухолевые клетки обеспечивает высокую противоопухолевую активность предлагаемого лекарственного средства при сравнительно низкой его токсичности и превосходство предлагаемого лекарственного средства проявляется и в том, что оно не имеет перекрестной резистентности с известными против оопухолевыми препаратами: НММ, арабинозид-цитозином (Ара-Ц), фторурацилом (5-ФУ), сарколизином, обладает только частичной перекрестной устойчивостью с прототипом и дихлордиаминоплатиной (ДДП) (табл.6,7,8).Как видно из таблиц предложенное лекарственное средство дает 100;4 извлечения животных с перевиваемыми штаммами 1,-1210, резистентными к широко известным противоопухолевым препаратам (сарколизину, 5-фторурацилу, арабинозид-цитозину и НММ).Предлагаемое лекарственное средство высокоэффективно на других лейкозах: излечивает часть животных с лейкозом Р, в 2 раза эффективнее по сравнению с прототипом в отношении пл аз моцитомы МОРС.Существенные преимущества выявлены у него перед прототипом в действии на вирусные лейкозы, он в 2,5 раза эффективнее прототипа в отношении клеточного варианта лейкоза, индуцированного вирусом Мазуренко (табл.9).После лечения предлагаемым лекарственным средством у животных нормализуется масса селезенки и печени, приближаясь к соответствующим показателям интактных животных, чего не наблюдается при лечении прототипом (фиг,4).Предлагаемое лекарственное средство в 2-3 раза эффективнее прототипа при лечении мышей линии АКР со спонтанным вирусом лейкоза (первые генерации) УПЖ 53-143; и 19-54, соответственно),Лекарственное средство обладает широким спектром действия в отношении солидных опухолей (табл.10,11), превосходя известные препараты по противоопухолевойэффективности. Это обусловлено потенциированием эффекта индивидуальных изомеров в отношении некоторых опухолей. Например, изомер 1 эффективен только в высоких дозах до 1000-1250 мг/кг. При использовании доз адекватных по содержанию в предлагаемом лекарственном средстве (150-130 мг/кг) эффекта не было достигнуто ни при одной локализации опухоли. Изомер П в дозах 40-45 мг/кг тормозил рост опухоли ОЖна 74 О/, со снижением эффекта. Продолжительность жизни животных увеличивалась лишь на 18, в дозах 47,50-50 мг/кг он был токсичен, Предлагаемое средство в дозах 175-200 мг/кг (доза изомера П = 45-50 мг/кг) проявляло стабильный противоопухолевый эффект: торможение роста опухоли - 74, сохранялось в течение 3 недель после однократного применения, продолжительность жизни животных увеличивалась на 42(табл.12) .Особенно наглядно проявляется преимущество предлагаемого лекарственного средства по отношению к известными в отношении развившихся опухолей (табл.13,14),Одновременно в эксперименте показано, что эффективность лечения развившихся опухолей можно повышать повторными введениями лекарственного средства (см.табл.14), Это имеет немаловажное значение для лечения больных с запущенными формами опухолей.Повторное введение лекарственного средства возможно, так как обнаружено, что оно не обладает кумулятивными свойствами. Индекс кумуляции на мышах был вычислен по формуле:1 - МПД(ваз) и введенийМПД(однокватн)МПД при однократном применении - 240 мг/кг, при 15 кратном ежедневном применении разовая доза 30 мг/кг1 - 30, 15240Отрицательная величина индекса кумуляции свидетельствует об отсутствии кумуляции токсического действия (Давыдов В.Д. Вопросы медицинской токсикологии в курсе фармации. Горький, 1982),Клиническая картина интоксикации при многократном применении лекарственного средства аналогична токсическим проявлениям при однократном введении. Наблюдается снижение массы тела подопытных животных в течение трех недель после окончания курса введений, выявлено гематотоксическое действие, проявляющееся в снижении количества лейкоцитов в основном за счет уменьшения содержания лимфоцитов. Степень гематотоксичности прямо коррелирует с величиной применяемой дозы и носит обратимый характер,Не отмечено влияние препарата на функцию сердечно-сосудистой системы и мочевыделительной системы, печени и активность трансаминаз,Эффективность лекарственного средства была проведена в эксперименте на собаках со спонтанными опухолями, которые поступают в клинику животных ВОНЦ АМН СССР от жителей г.Москвы и Московской области. После отработки доз и режимов, лечению подвергалось 6 собак: 4 с диагнозом лимфобластная саркома П 1-1 Ч стадии заболевания, 1 злокачественный мастоцитоз, 1 меланома. Эффект достигнут у всех животных с лимфобластной лимфосарк о мой отмечалось уменьшение размеров лимфоузлов, снижение количества бластных клеток в периферической крови и костном мозге. Полная ремиссия в течение месяца получена у одного животного, у трех - частичная различной длительности (в среднем 14 дней). Собака с инфильтрацией бластными клетками костного мозга и периферической крови (27 и 12 соответственно), после лечения предлагаемым лекарственным средством находится в частичной ремиссии без рецидивов около 15 месяцев, наблюдение продолжается.Представляет интерес лечение злокачественного мастоцитоза так как по данным литературы и собственным исследованиям известно, что это заболевание крайне устойчиво ко всем видам существующего лечения. Животное с рецидивом мастоцитоза после хирургического вмешательства в течение 2 месяцев лечили по схеме АЦОП, амбулаторно, лечение было не эффективно. Через месяц после окончания полихимиотерапии животному ввели однократно предлагаемое лекарственное средство. Через 5 дней после введения было отмечено уменьшение опухолевого узла на 63; и уменьшение региональных лимфоузлов. Длительность ремиссии составила 32 дня, затем рост опухоли возобновился,Лечение собак с меланомой не имело эффекта.Таким образом, показана эффективность предлагаемого лекарственного средства в монорежиме по сравнению с известными высокоэффективными препаратами (циклофосфан, локадин, ликурим и др.).Предлагаемое лекарственное средство для лечения злокачественных новообразований является новым, оригинальным по составу, высокоэффективным в отношении широкого спектра злокачественных опухолей, малоток1834006 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ сичным по сравнению с существующими, обладает избирательностью противоопухолевого действия, эффективно при лечении запущенных форм рака, не обладает кумуПротивоопухолевое средство, содержащее нитрозопроизводное мочевины и воды для инъекций или 5;4-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида, отличающееся тем, что, с целью повышения его активности и снижения побочных эффектов, оно дополнительно содержит декстран или полиглюкин, или поливинилпирролидон, лимонную или сорбиновую кислоту, а в качестве нитрозопроизводного 9- (2-хлорэтил) -7-нитрозо,-гомоцитруллин 9- (2-хлорэтил) -9-нитрозо.-гомоцитруллин ляцией и может применяться в повторныхкурсах лечения без выраженных побочныхявлений. при следующем соотношении компонентов, мас. : 9-(2-хлорэтил) -7-нитрозо.-гомоцитруллин 0,6 - 0,95; 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо.-гомоцитруллин 0,05 - 0,9 декстран (м.м, 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м.м, 12600) 0,5 - 2,0; лимонная кислота или сорбиновая кислота 0,025 - 0,1; вода для инъекций или 50,-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида до 100.183400612Тэблица 1Алкилирующая и карбамоилирующая активность нитрозопроизводных мочевины1 Алкилирующая активность НММ принята за 100,Таблица 2141834006Продолжение табл. 2Здесь и далее в расчете на биологически активное вещество.Отношение кол-ва излеченных животных к количеству животных в группеТаблица 3Таблиця мышей с лейкозом 1=1210ерапевтическии инде15ТаблицабТаблица 6Сравнительная противолейкозная активность предлагаемого лекарственного средства на штаммах :1210, резистентных к нитрозопроизводным (мыши ВОР, самцы и самки))На штаммах с лекарственной устойчивостью переносимость препаратов увеличивалась.171834006Таблица 7Противолейкоэный эффект предлагаемого средства по сравнению с известными препаратами на штаммах =1210, резистентных к Ара - Ц и 5-ФУ (мыши ВОР, самцы и самки) Таблица 8Противолейкозный эффект предлагаемого средства по сравнению с известными препаратами на штамме 1=1210, резистентном к сарколизину и ДДП (мыщи ВОР, самцы и самки)