Способ количественного определения органических дисульфидов

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕН НИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ ДИСУЛЬ (57) Изобретение относи ческой химии, в частно венному определению ор сульФидов. Цепь - пов и чувствительности спо ние ведут обработкой а пробы сначала растворо ацетата ртути (2+), за тнл-и-Феииленднамином хлорида иелеза (3+) и окрашенное соединение спектрофотометрирова ность определения диме 2,5 мкг, диэтилдисул дибутилдисульФида 7,0 окисленного и цистина фотометрируемого раст НОГО ОПРЕДЕЛЕФИД 9 Втся к аналитити к количестанических диыиение точностиоба. Определенаучно-ис сл едоваигиены труда иболев аний о СССР 1979. па Р.,ше 1 гс и оГ Боше пй 1 гоп В 2мл ГОСУДАРСТВЕННЬ 9 КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОбРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Ленинградскийтельский институт гпрофессиональных за(56) Авторское свидетельстВ 706753, кл. С 01 Н 21/24ЯазГгу С.Б., РауапагауТпшпыгу М.К., ЯресгорЬогоМегерой Еог СЬе РегегшпагТЬо 1 з чйЬ АшпорЬепо 1 з1425529 Таблица 7 Вещество ижкий предел измерения ерхний предел измерения мкг . Оптичес- Б при кая плот и 5,М ность 0,95 мкг Оптичес- Б, при кая плот 5 06ность0,95 метилди;сульфид 0-100 2,5 0,027 0,090 100 Диэтилд,исульфДибутилди-.сульфид О, 037 О, 088 120 0,882 0,012 01879 Оэ 017 5,0 0-120 0-175 Глутатионокисленный 20,0 400 0,420 0,043 400 0,481 0,046 0-400 20;О 0-400 Цистин:100 49,8 ф 0,4 5000,0 5000,0 Диметилдисульфид 1:100 49 у 9+0,5 уксуснаякислота рмальде 9, 7+04 200,цетальде 49,810,49,810,49,9+О,ид 200,0 4Диметиламин 500,0 1:10 етипсульфид 500,0 1:10 5 200,65,3+0,5 200, 1+1, 1 5: 10,01 2000 Глутатион 200,0 Этаокисленный Диапазон концентрации,оп ределяе мцх по градуиро воч ному графику, мкг 0,028 0,099 О, 025. О, 125 Ов 038 Оэ 118 0,925 О, 006Задано определяемоговещества, мкг Добавлено Вещество Диметилсульфид 1: 2,5 199,5+1,0 Алании 1: 2, 5 199,6+1,2 40,0 5:1 320,0+2,5 Составитель С,Хованская Редактор Г.Волкова Техред И.Дидык Корректор М.ВасильеваЗаказ 4761/40 . Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5, чественного определения органическихсоединений, содержапвгх дисульфиднуюгруппу, таких; как алифатические дисульфиды, дисульфиды ряда аминокислот,цистин, окисленной Формы глутатион.Целью изобретения является повышение точности и чувствительности способа.П р и м е р 1. Определение диал-килдисульфидов.Навеску дисульфида растворяют вэтаноле в мерной колбе на 25 мп. Раст вор разбавляют этанолом до концентрации порядка 100 мкг/мп, 0,2-2,0 мпанализируемого раствора помещают в,пробирку с пришлифованной пробкой,доводят до 2 мл этанолом, приливают 200,5 мп 5%-ного раствора ацетата ртутии дистиллированную воду до объема9,0 мл. Через 30-60 с в пробирку добавляют 0,5 мл хромогенного реагента (смесь 0,2%-ного раствора К,М-диметил-и-Фенилендиамина гидрохлоридаили сульфата в концентрированнойсоляной кислоте и 4% в но растворахлорида железа (111) в 1 н. раство ре соляной кислоты, взятых в соотношении 3: 1). Раствор перемешиваюти через 15 мин измеряют оптическуюплотность при длине волны 500 нм в,кювете с толщиной слоя 2 см относительно контрольного раствора,Содержание алкилдисульфида нахо дят по уравнению градуировочногографика. Для построения градуировочного графика в серию пробирок, содержащих по 0 5 мл 5%-нога раствора ацетата ртути, вносят стандартный раствор алкилдисульфида в этаноле с концентрацией 50 мкг/мл в количестве, О, 0,1, 0,2,2,0 мл, доводят объемцо 2,5 мл зтанолом и далее обрабатывают и Фотометрируют аналогично про"бе.Данные для построения градуировочного графика для определения первогогомолога ряда алифатических дисульФидов - диметилдисульфида (ДИАС) (прии = 5), приведены в табл,Результаты определения диалкилдисульфидов представлены в табл2.Приготовление хромогенного реаген- -,та.Готовят 0,27-ный раствор Я,1 Ф-диме,тил-и-фенилендиамина солявокиспогоили сернокислого в концентрированной соляной кислоте, Раствор устойчив при хранении в темной склянке при температуре +4 С в течение не менее б мес.Готовят 4%-ный раствор хлорида же" деза (111) в 1 н. растворе соляной кислоты. Растворустойчив,Хромогенный реагент готовят в день анализа путем смешивания трех объемов 0,2%-ного раствора М,И-диметил-п-фенилендиамина в концентрированной соляной кислоте и одного объема 4%-ного раствора РеС 1 р в 1 н, НС 1.П р и м е р 2. Определение цистина и глутатиона окисленного.Навеску глутатиона (0,1000- 0,2000 г) растворяют в дистиллирован-. ной воде в мерной колбе емкостью 1 л. Навеску цистина 154,6 мг растворяют в 3 мл 5%-ного раствора соляной кислоты и переносят количественно в мерную колбу на 1 л, доводя объем до метки водой.мп раствора вещества вносят в пробирку, добавляют 2 мл 5%-ного раствора ацетата нитрата или ртути, воду до объема 9,0 мп, после чего пробирку помещают в кипящую водяную баню на 3-5 мин. По охлаждении раствора до комнатной температуры приливают 0,5 мп того же самого хромогенного реагента, Через 3 мин в случае определения цистина и 15-20 мин при определении глутатиона окисленного раствор центрифугируют в течение 5 мин и измеряют оптическую плот. ность при длине волны 510 нм для глутатиона и 540 нм для цистина.Содержание цистина и глутатиона определяют по градуировоччым графикам зависимости оптической плотности от количества вещества в фотометрируемом объеме раствора в диапазоне 0-400 мкг. Приме 1 ы определения цистина и глутатиона окисленного представлены втабл.3.В табл, 4 приведены данные, подтверждающие выбранные условия определения соединений, содержащих дисульфидную группу, Как следует из табл, 4,дисульфвды реагируют с Я,М-диметил-пфенилендиамином только после обработки ацетатом или нитратом ртути, Приэтом в случае определения диалкилдисульфидов достаточно обработать пробу0.,5 мл 5%-ного раствора соли ртутипри комнатной температуре,Формула изобретения Таблица СодержаниеДИДС в9,5 мл раствора,мкг 5 20 Оптическаяплотность 0,048 0,093 0,183 0,372 0,560 О732 0,925 Относительное стандартноеотклоне-, ние, Б,. 0,058 0,051 0,030 0,036 0,011 0,008 0,006 Как видно из табл.5, содержаниесолей ртути в анализируемом объемераствора, предназначенного для Фотометрирования (9,0 мл) должна бьггьУ 5не ниже 0,2% при определении диалкилдисульфидов (пределы 0,2-0,4%, чтосоздается добавлением 0,5 мл 4-6%ного раствора ацетата (нитрата) ртути) и не ниже 0,9% при определении ди 0сульфидов ряда аминокислот (пределы:0,9-1,2% создаваемые добавлением2,0 мл 4-6%-ного раствора ацетатаили нитрата ртути).Увеличение концентрации солей рту" 15ти не,приводит к изменению оптической плотности анализируемых растворов,поэтому нецелесообразно,Максимум оптической плотности ок рашенных растворов диалкилдисульфидов достигается при 500 нм через 15 мин и окраска устойчива по крайней мере в течение 2 ч. При определении цистина и глутатиона максимальная оптическая 25 плотность достигается при обработке проб в 4 раза большим количеством раствора соли ртути (2 мл) при нагревании в кипящей водяной бане в течение 3-5 мин, При добавлении хромо- генного реагента появляется слабая опалесценция, вследствие частичного восстановления двухвалентной ртуги до одновалентной, поэтому перед Фотометрированием растворы следует центрифу,гировать. Оптимальное время экспози 35 ции проб после обработки хромогенным реагентом составляет при определении цистина 8-10 мин и глутатиона, 20- 30 мин.40 94.В табл. 6 приведены данные, сравнительной оценки известного и предла" гаемого способов.В табл. 7 даны пределы определе" ния органических дисульфидов в градуировочных растворах (конечный объем 9,5 мл, кюветы с 1 = 2 см).Чувствительность определения по предлагаемому способу: диметйлдисульФида 2,5 мкг, диэтилдисульфида 5,0 мкг, дибутилдисульфида 7,0 мкг, глутатиона окисленного и цистина 20 мкг в 9,5 мл Фотометрируемого раствора (табл. 7).В табл. 8 приведена селективность предлагаемого способа определение органических, дисульфидов.Определение органических дисульфидов селективно в присутствии альдегидов, спиртов, карбоновых кислот, аминов, диалкилсульфидов, фенола, а также не содержащих серу аминокислот, мешают определению тиолы (табл. 8) . Способ количественного определения органических дисульфидов путем обработки раствора анализируемой про" бы химическим реагентом и спектрофотометрированием полученного окрашенного соединения, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, обработку ведут сначала раствором нитрата или ацетата ртути (11), затем М,М-диметил-п-фенилендиамином в присутствии хлорида железа (111) и соляной кислоты,.1 и п=5 моль 41,0 40,810,9 81,781,4+1,0 Диметилдисульфид Диэ тилдисульфид 10,0 9,9+1, 15 О, 019 м О, 078Дибутилдисуль Таблица 3 ещество Задано вкювету раствора навески в1 л воды,мл Еы 1 с Б айдено Х-цтическан плот ность веска,кювете, в навескекг 198 152,7+6,5 152,716,5 0,03 54,6 ти 0,19 5,5 0,065 168,8+10,21425529 ц а 4 Табли Взят Условия обработки п влено соли рту- Темпер 5 Х-ный раствор, тура о аботки ат Нитрат соли ртти м нта 1Ди 15-30 0 5 О,5 0,4 0,4 15 О 2 1 О 466 46 120 ОюО Цистин 0,2 22 10 0 0,256 2,54 1 О 2,-10 0 0,090 ещество Колич метил льфид атион 200,0,О ,0 нов ути мя экспозиции ы, мин,после вл ения 108 0,130 0,211 0,256 0,236 0,224 0,2551425529 10Продолжение табл, 4 Взято Оптич еся плот Количесво,мкг Время экспоэициипробы, мин,последобавления обавлено соли ртуи, Я-Мый раствор,Веществ тьцетат Бит соли рту хромоге ти ного ре т 0,1 2 5,25 0 2230 р 2 0 5 Перед фотометрированием окрцентрифугируют в течение 5ния входит в общее время эксления хромогенного реагента римечан створа ацетаи ическаятность обавлено та РСодержание бъем ацетата рту ти в раство еф хромогеннго реагента, Х Определение дииетилдисульфида (50 мкг) 0,4 О,416 0 0,412 4 2 Содержаниеацетата ртути в растворе дисульфида объемом9 мл переддобавлением А ,Л.Условия обработки проб Температура обработкив при-сутствииионовртути, С енные растворын, время центрифугировэнции проб после прибав1425529 12 Продолжение табл. 5 Содержаниеацетата ртути в растворе дисульфида объемом9 мп переддобавленйемхромогенного реагента, Ж Оптическаяплотность 0,465 0,463 0,464 0,5 0,27 5,0 0,5 0,33 6,0 1,0 5,0 Определение глутатиона окисленного (200 мкг) 0,5 2,0 0,5 0,2 4,0 0,9 5,0 0,8 4,0 1,2 6,0 0,8 2,0 4,0 0,9 1,6 0,9 6,0 1,4 0,9 2,2 4,0 1,0 2,0 5,0 6,0 1,0 10,0 1,2 1,8.6,0 2,0 6,0 2,0 10,0 2,2 Добавлено раствора ацетата ртути Содержание Объем, мл ацетата ртути в растворе, Х 0,185 0,200 0,217 0,225 О, 218 0,250 О, 254 0,259 0,255 0,247 0,250 0,257 0,248 О, 253 0,247,,ь 1 ою еФ аоэхм ф н е о э х р а ор, фО н э Юооооа эо ееэфм н ф фр,о х о э Х цффх1 а 5 е 1 Ф о о% о