Способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензий

Союз Советских Социалистических Республик(51) М. Кл, Ц ОХ ю 55/16С 12 К 1/ОО с присоединением заявки Государственный комитет Совета Министров СССР по делам изобретений и отирытий(45) Дата опубликования описания ХО,А,Й(72) Автор Д. Грановский зоб рет 1) Заявит Московский дрожжевой з 4) СПОСОБ ОПРЕДРЛИПИ МАССЫ ДРЭЗЗБВ 1 Й 1 ПЕТО 1( В ЕДИНИЦЕ ОБЫ:СУСПЕНЗИИ уществляют следующим обрама- лес.О о известный способ неточе вместе 25 опредеии находной М Изобретение относится к микробио- логической промышленности и может быть использовано для контроля любых микроорганизмов, культивируемых в растворе питательной среды, например культуры дрожжей, применяемой в хлебопечении.Известен способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензии, предусматривающий разделение суспензии на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, добавление к твердой фракции раствора с последующим мате тическим расчетом массы дрожжевых к так как определяют массу клетс массой внеклеточной влаги.С целью повышения точносления перед разделением суспефракции определяют плотность 1суспензии, а после ее разделения - жид-кую фракцию удаляют и определяют ееплотность, а к твердой добавляют такоеже количество раствора известной плотности, перемешивают, центрифугируют,вновь добавляют к твердой фракции тотже раствор известной плотности, перемешивают и определяют плотность полученнойсуспензии дрожжевой массы по соотношениюуказанных плотностей (суспензий и растворов),Способ ос зом,Суспензию дрожжевых клеток берут из, дрожжерастительного аппарата, принимая, что масса анализируемого объема суспензии (М 1) представляет собой сумму масс дрожжей (М 2) и культуральной жидкости (МЗ)/ Ф э Я й О - ПЛОТНОСТИ.Суспензию разделяют центрифугированием, например с помощью пробирочной центрифуги, на твердую (дрожжевую) и 1 о жидкую фракции, а перед разделением определнюл плолносль ( р ) исходной суспензии.15После разделения из пробирок отбирают культуральную жидкость и определяют ее плотность ( до ).В пробирки для замещения .культу 20 ральной жидкости добавляют до первоначального объема (до метки) раствор известной плотности, перемешивают и 25 вновь центрифугируют. После разделения фугат сливают, в пробирки вновь добавляют тот же раствор известной плотности, содержимое перемешивают и повторно отбирают пробу и определяют плотностьсуспензии /РуЗатем определяют массу дрожжевых клеток путем математического расчета, который осуществляют по соотношению указанных плотностей (суспензий и растворов) по формуле:И. )аоод)л)=л)иь) о5,0 где О - плотность размещающего растГ 5вора ( разбавителя).Способ осуществляют в течение ФОФ 5 мин. при одной и той же температуре, предпочтительно 20 С, которую поддероживают с отклонением на величину не% более + 0,1 С.П р и м е р 1. На контроль берут пробу суспензии, содержащей 100 г дрожжей в литре в расчете на прессованные бо дрожжи с влажностью 75%, Плотности определяют при 20 С, при этом ( 1,01256 г/см , Я = 1,00996 г/см . В качестве разбавителя используют во 5 допроводную воду с Я- = О, 99845 г/см .После замещения плотность суспензии д = 1,00618 г/см . по (формуле (5) подсчитывают конценсрацию биомассы дроиией ( - й - 1Мф 4которая составляет 61,5 г/л.Анализ погрешностей показывает,что при ошибках противоположного знакав определении Я и Я на 0,00001 г/см5абсол 1 ютная погрешность в подсчете концентрации равна, примерно, 5 г/л,Для уменьшения погрешностей анализируемую (исходную) суспензию сгущаютнесколько раз за счет ее жидкой фазы.Кратность сгущения ( К) равна:К=,(ф)где О - объем суспензии после сгущения.При этом в К раз увеличиваетсяконцентрация биомассы, так каки, м,(5)Чь К ЮаСуспензию сгущают в пробиркахцентрифугированием одновременно с процессом замещения, при этом на пробиркинаносят две отметки: одну ( верхнюю)для первоначального объема, другую( нижнюю) - для объема в К раз меньшего.При сгущении способ осуществляютследук)щим образом,Суспензию заливают в пробирки доверхней отметки и центри(1)угируют, после разделения половину пробирок снимают (через одну) и отбирают из нихкультуральную жидкость до нижней отметки. Затем оставшуюся жидкость перемешивают с осажденными дрожжами, получая сгущенную суспензию, которую отбирают и определяют ее плотность ОИз оставшихся в центрифуге пробирок удаляют культуральную жидкость и определя 1 ют ее плотность Я , а вместо нее до нижней отметки добавляют разбавитель. Затем содержимое перемешивают и центрифугируют, после чего отделенную жидкую фазу сливают и в пробирки вновь до нижней отметки добавляют разбави= 10007 1 О 15 35 составитель А,БращниконаРедактор А МОроэона Техред Корректор Е,по ина Заказ 23 Изд ф А 29 ЫТираж Голписное ЦИИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам. изобретений и открытий Москва, Ж-зб Рауьвская наб., д. 4/5 ППП Патент" Москва, Г, Бережковская наб., 24 тель, перемешивают и отбирают для определения плотности Оуконцентрацию биомассы в сгущенной суспензии подсчитывают по формуле, аналогичной формуле (5): Рф 61Н р и м е р 2. Суспензию, анализируемую в примере 1, сгущают в 2 раза, при этом Я = 1,01 с 17 б г/сма Р 1,01595 г/см , плотности культуральной жидкости и разбавителя те же, что и в примере 1, при этом - = 122 б г/л Ма р Э Ф- = 61 5 г/л.ИаУстановлено, что, чем больше кратность сгущения, тем точнее окончательный результат контроля концентрации.Необходимо отметить, что все операции спосооа могут быть автоматизировапы, сгущение и разделение суспензии возможно осуществлять под вакуумом, а подсчет концентрации биомассы после авто атического контроля - с помощьюсчетного устройства. Способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензии, предусматривающий разделение суспензии на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, перед разделением суспензии на фракции определяют плотность исходной суспензии, а после ее разделения - жидкую фракцию ,удалиот и опре 3,елут ео иОтиость а к твердой добавляют такое же количество раствора известной плотности, перемешивают, центрифугируют, вновь добавляют к твердой фракции тот же раствор известной плотности, перемешивают и определяют плотность полученной сусгпензии, а затем осуществляют определение массы дрожжевых клеток путем математического расчета по соотношению указанных плотностей (растворов и суспензий).