Способ получения искусственных антигенов

Способ получения искусственных антигенов путем модификации полимера антигенами или гаптенами, содержащими реакционноспособные аминогруппы, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве полимера используют поли-4-нитрофенилакрилат или поли-4-нитрофенилметакрилат.

Изобретение относится к иммунохимии и химии полимеров, а именно к способам получения искусственных антигенов, которые могут быть использованы в создании иммунодиагностикумов, при получении антител, при разработке синтетических или полусинтетических вакцин и др.
Цель изобретения повышение выхода целевого продукта.
П р и м е р 1. Антиген со специфичностью микобактерии лепры (для иммуноферментного анализа).
К раствору 6 мкг/экв поли-4-нитрофенилакрилата в 1 мл ДМФА прибавляют раствор 9 мкмоль 3-аминопропил-3,6-ди-О-метил- -D-глюкопиранозида в 1,5 мл ДМФА, оставляют на ночь при 20^oC, выход количественный (по выделяющемуся 4-нитрофенолу). Разбавляют буферным раствором до концентрации 1-10 мкг/мл, полученный раствор используют для сенсибилизации полистироловых планшетов в иммуноферментном анализе лепры (см. пример 2).
П р и м е р 2. Иммуноферментный анализ с использованием синтетического антигена.
Раствор 1,0 мкг антигена (пример 1) в 1 мл карбонат-бикарбонатного буфера (pH 9,6) наносят в лунки 96-луночного полистиролового планшета, по 50 мкл в лунку и выдерживают 15 ч при 4^oС. После промывки водой наносят сыворотки больных лепрой и здоровых доноров в разведении 1:800 (в фосфатно-солевом буферном растворе, содержащем 0,5% Твина-20) и выдерживают 1 ч при 37^oС. Промывают водой, прибавляют конъюгат анти-1g M-пероксидаза, промывают водой, прибавляют субстрат (перекись водорода+о-фенилендиамин). Интенсивность окраски количественно измеряют на фотометре с вертикальным лучом Multiskan.
Для здоровых и больных туберкулезом доноров значения OD не превышали 0,02, а для больных лепроматозной лепрой лежали в интервале 0,70-2,00.
П р и м е р 3. Иммуносорбент со специфичностью Микобактерии лепры.
К суспензии 1 г аминопролинилированного макропористого стекла 2000 в 4 мл ДМФА прибавляют раствор 50 мг поли-4-нитрофенилакрилата и, периодически перемешивая, выдерживают при 20^oС в течение 16 ч. Раствор декантируют, активированное стекло промывают ДМФА, этанолом, эфиром, высушивают. Содержание 4-нитрофенильных групп, определенное после гидролиза водным этаноламином, составляет 100 мкмоль/г.
К суспензии полученного стекла в 2 мл ДМФА прибавляют раствор 20 мкмоль в 0,5 мл ДМФА. Выдерживают в течение 16 ч при 20^oС, периодически перемешивая, затем раствор декантируют и проверяют на содержание при помощи ТСХ. Конверсия составляет 100% Затем сорбент промывают ДМФА, добавляют 0,1 мл этаноламина в 2 мл ДМФА.
П р и м е р 4. Аффинная очистка антител к искусственному антигену Микобактерии лепры.
Кроличью сыворотку наносят на колонку с сорбентом и промывают при 4^oС нейтральным фосфатно-солевым буферным раствором (pH 7,4) до прекращения поглощения при 480 нм. Затем антитела элюировали при pH 3,0 буферным раствором глицин-HCl. Полученные антитела в высоком титре (до 1:20000) специфически связываются с синтетическим антигеном (см. пример 1) и природным ФГЛ-1 из Микобактерий лепры, что показало иммуноферментным методом.
П р и м е р 5. Антиген со специфичностью Микобактерии лепры.
К раствору 6 мкг/экв поли-4-нитрофенилметакрилата в 1 мл ДМФА прибавляют раствор 8 мкмоль в 1 мл ДМФА, оставляют на 24 ч при 20^oC, разбавляют буферным раствором до концентрации 1-10 мкг/мл и используют в иммуноферментном анализе. Точность определения аналогична примеру 3. Выход составляет 95-100% тогда как выход продукта по прототипу не превышает 50%
Предлагаемый способ методически прост, исходный полимер (олигомер) легкодоступен и устойчив при хранении. Один раз синтезированный, расфракционированный и охарактеризованный полимер дает возможность далее получать с высокой воспроизводимостью искусственные антигены необходимой молекулярной массы и с заданным соотношением и содержанием лигандов.
Изобретение относится к иммунохимии и химии полимеров, а именно к способам получения искусственных антигенов, которые могут быть использованы в создании иммунодиагностикумов, для получения антител при разработке синтетических или полусинтетических вакцин и др. Цель - повышение выхода целевого продукта. Для этого в качестве полимера используют поли-4-нитрофенилакрилат или поли-4-нитрофенилметакрилат, далее проводят модификацию полимеров антигенами или гаптенами. В качестве антигенов может использоваться, например, антиген со специфичностью микобактерии лепры. Предлагаемый способ методически прост, исходный полимер легкодоступен и устойчив при хранении. Один раз синтезированный, расфракционированный и охарактеризованный полимер дает возможность далее получать с высокой воспроизводимостью искусственные антигены необходимой молекулярной массы и с заданным соотношением и содержанием лигандов.