Способ получения протеина

Номер патента: 837329

Автор: Дональд

Есть еще 1 страница.

Смотреть все страницы или скачать ZIP архив

Текст

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет- (32) С 12 Р 21/00 Государственный комитет СССР но делам изобретений ,и открытийОпубликовано 070681,Бюллетень Мо 21 Дата опубликования описания 070681 Иностранец Дональд Оливер Хитцман(72) Автор изобретения Иностранная фирма(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕИНА Изобретение относится к области.микробиологии, а в частности. к получению протеина путем микробиосинтеза.5Известен способ получения белкас помощью аэробного культивированияпри температуре 45-65 С в водной среде, содержащей источники углеродаазота и миниральных веществ и.Реп 1 с 1111 цпт поФа 1 цщ-сЬгуяоЧепцвт (1,Недостатком известного способаявляется невысокий выход протеина,Целью изобретения является повышение выхода протеина.Поставленная цель достигается тем,15что в качестве исходной культурымикроорганизма для получения протеина используют термофильную смешанную культуру НКВД В,Термофильная смешанная культурабактерий состоит из трех отдельныхвидов бактерий. Эти бактерии классифицируются как (1) крупные грамположительные изогнутые палочки, 25подти п бактерии, класс 5 с И аоеу с е Гав,отряд ЕпЬас 1 ег 1 а 1 ея, семействоВас 111 асеае род Вас 111 ця, (2).крупные грамотрицательные палочки,падтип бактерии, класс БсЬ 1 йошусе 1 евдО г гряд ЕпЬасег 1 а 1 ея, семейство Вас 111 асеае, род Вас 111 ця; (3) мелкие грамотрицательные палочки, подтип бактерии, класс Ясп 1 яовусеея, Смешанная тремофильная культура проявляет ценные свойства. Эта.смешанная культура (М ) растет лучше при высоких температурах, чем при обычных, с большим выходом клеток и умень- шейной тенденцией к пенообразованию в условиях ферментации.Эта смешанная культура является термофильной, растет эффективно с высокой продуктивностью на сырье иэ окисленных угчеводородов, в часчастности, низших спиртов, наиболее предпочтительно из метанола или. этанола, при таких температурах, при которых большинство других известных видов бактерий либо относительно непродуктивны, либо просто не могут существовать, либо непродуктивны и нетолеранты к сырью :иэ окисленных углеводородов. Термофильная смешанная культурасдана на хранение в Министерствосельского хозяйства США, Службасельскохозяйственных исследований,Северно-центральный район, Север 837329ный региональный .исследовательскийцентр, 1815 ЫогСИ Пп 1 чегз 11 у 81 гее 1Реог 1 а, 3111 по 1 н 61604, в количестве тридцати лиофильных препаратовсмешанной культуры до подачи настоящей заявки, и ей присвоен номер НВН 1,В,Эта смешанная ку,".ьтура М является высокопродуктивной при сравнительно высоких температурах ферментациии продуцирует требуемые и ценные одноклеточные протеиновые продукты с,высоким содержанием протеина в виде.аминокислот требуемого типа и в требуемом соотношении.Термофильная смешанная культураимеет постоянный состав. Смешеннаякультура, применяемая для лиофилизации, была выделена из серии ферментационных испытаний и лиофилизована приобычных условиях, которые заключаются в быстройм замораживании микробныхклеток при,очень низкой температурес последующим быстрым обезвоживаниемн высоком вакууме.и хранении при комнатной температуреС целью определения жизнеспособности некоторых лиофилизиронанных образцов лиофилизированные смешанные культуры были затемреактивиронаны и подвергнуты выращиванию н таких же условиях, которыеприменялись ранее. Последующая фермрнтация с применением реактивиронанной М культуры показала, что в носсстановленной культуре имеются те жетри разновидности микроорганизмов нтой же форме и в той же взаимосвязи, как и в источнике ферментации,Культура обеспечивает достижениебольших скоростей получения одноклеточного протеина при уменьшенной потребности в охлаждении, при выращивании на питательной среде, котораян качестве источников углеродаи энергии представляет собой окисленный углеводород, предпочтительно низший спирт, более предпочтительнометанол или этанол, лучше предпочтителен метанол или содержащая в основном метанол питательная среда.При использовании смешанной культуры достигается большой выход клетоккоторый определяется в граммах полученных клеток на 100 г использованного источника углерода и энергии,например метанола,Смешанная культура способна продуцировать одноклеточный протеин, который представляет собой смесь нескольких разновидностей клеток, поэтому получаемые из Мо микробные клетки характеризуются лучшими соотношениями аминокислот, чем продукты, получаемые из одной чистой культуры.Был взят образец почвы на глубине 6,1 см от поверхности земли, покрывающей паропровод в Ваг 11 езч 111 е, 011 аЬоща,ВезеагсЬ СеиСег ой рй 1111 рз Ре 1 го. -1 ецщ Со. Была применена обычная методика обогащения в присутствии метанола для выделения отдельных илиособых культур. Получена стабильнаяпо сЬставу смешанная культура термофильных микроорганизмов.Термофильная смешанная культурасостоит иэ трех отдельных микроорганизмов. Три типа бактерий в стабильной по составу термофильной смешаннойкультуре описаны как (1) крупные грамположительные изогнутые палочки, (2)крупные грамотрицательные палочки и(3) мелкие грамотрицательные палочки.На рифленых пластинах получили5 изолированные колонии всех трех микроорганизмов на минеральном агаре,содержащем метанол. Однако, когда выделенные колонии были перенесены вводные среды для дальнейшего роста20 с метанолом в качестве источника углерода и энергии, роста культуры небыло,Совместный рост этой смешаннойкультуры указывает на симбиотическуюсмесь всех трех видов микроорганизмов, По-видимому. продукт или продукты обмена микроорганизмов по меньшей мере одного вида служат питательной средой, необходимой для роста микроорганизмов другого или других видов. Природа этого продукта обменав точности пока еще не известна.Можно предположить, что этот продуктобмена токсичен для микроорганизма, .которые его вырабатывает, поэтому для продолжения нормальногороста этого микроорганизма необходимо присутствие другого микроорганизма, который потребляет этот токсичный для первого микроорганизма40 продукт обменаДругим подтверждением такого симбиоза .является тот факт, что приферментации с применением М образуется значительно меньше пены в типовых условиях аэробной ферментациипо сравнению с количеством пены,образующейся обычно в равноценныхтипичных условиях аэробной ферментаг ции, но с применением чистых термо 5 О фильных бактерий рода Вас 111 цз. Возможно,что М не образует такого большого количества пены, которое следовало бы ожидать, потому что при ферментации с применением М внеклеточныйпродукт, вероятно протеийоногохарактера, поглощается микроорганизмами, по меньшей мере, одного изсимбиотических видов, таким образомэтот продукт, являющийся пенообраэователем, непрерывно выводится из60 ферментационной смеси. Источником углерода и энергиины, сложные и простые эфиры, кислотыи адельгиды, которые в основном являются водорастворимыми и предпочтительно содержат до 10 атомов углерода в молекуле,Например, метанол, этанол, пропа,нол, бутанол, пентанол, гексанол,1,7-пентандиол 2-гептанол, 2-метил 4-пентанол, пентановая кислота, 2-метил-бутановая кислота, 2-пентанол, 2-метил-пропанол, 2-пропанол,муравьиная кислота, уксусная кислота,пропановая кислота, формальдегид,ацетальдегид, пропаналь, бутаналь,2-метилпропаналь, бутановая кислота,2-метилпропановая кислота, пентано -вая кислота, глутаровая кислота, гексановая кислота, 2-метилпентановаякислота, гептандикарбоновая кислота,гептановая кислота, 4-гептанон, 2-гептанои, окатановая кислота, 2-этилгексановая кислота, глицероль,этиленгликоль, пропиленгликоль, 2;пропанон, 2-бутанон, диэтиловыйэФир, метилэтиловый эфир, диметиловыйэфир, ди-и-пропиловый эфир, и-пропилизопропиловый эфир, включая смеси любых двух или более из этих веществ.Нефтяные газы, например природныйгаз, метан, или другие газы, например этан, могут быть окислены дляполучения смесей с преобладающим содержанием соответствующих спиртов, атакже небольших количество кетонов,альдегидов, простых эфиров и кислот.Предпочтительны спирты с С, -С вмолекуле. К ним относятся спиртыкак с линейной, так и с разветвленной цепью, первичные, вторичные итретичные, одноатомные и многоатомные.В качестве примеров спиртов можнопривести метанол, этанол, пропанол,бутанол, пентанол, гексанол, 1,7-гептандиол, 2-гептанол, 2-метил-пентанол, 2-пеятанол, 2-метанол-бутанол, 2-метил-бутанол, 2-бутанол, 2-метил-пропанол, 2-метил=пропанол, 2-пропанол, глицероль,этиленгликоль, пропиленгликоль, включая.смеси любых двух или более изэтих веществ.Наиболее предпочтительными спиртами являются спирты, содержащие С;С 4в молекуле,.особенно одноатомныеспирты, вследствие их доступности,водорастворимости и экономичности,Особенно предпочителен метанол, потому что относительно дешев, легкодоступен. и растворим в воде.Как правило, подвод молекулярного кислорода к водной ферментационной реакционной смеси может быть осуществлен путем пропускания адекватных объемов воздуха или обогащенного кислородом воздуха или отдельно воздуха ичистого кислорода в возрастающем количестве через ферментационный сосуд, Отходящие газы могут быть регенерированы и при необходимостиподаны на рециркуляцию с целью максимального использования кислорода,например, путем отгонки углекислогогаза и отходящих газов и рециркуляции.Расход подаваемого в ферментацион-ную смесь воздуха 0,1-10, чаще 0,72,5 объемов воздуха в 1 мин наобъем жидкости в Ферментационном аппарате, или, в пересчете на кислород 1 О соответственно 0,02-2,1 и 0,14-0,55,Давление может изменяться в оченьшироком интервале, например 0,1100 атм/10,13-10132 кПа/, чаще 130 атм/101,3-3039 кПа/, предпочтитель но 1-5 атм/101,3-506,5 кПа/. Давление выае атмосферного имеет то преимущество , что оно приводит к увеличению содержания растворенного кислорода в водной Ферментационной среде, 20 что в свою очередь способствует ускоренному росту микроорганизмов. Целесообразно применять давление вышеатмосферного особенно та, как высокая температура, при которой ведется термофильная ферментация, вызывает понижение растворимости кислорода в водной Ферментационной среде,Выращивание М смешанных бактерий из сырья из окисленных углеводородов может быть успешно осуществле- ЗО но при 45-65 сС, предпочтительно,для достижения оптимальной скоростироста, 50"60 цС, Более низкие температуры подавляют рост бактерий.Высокие концентрации некоторых изописанных источников углерода и энергии, например метанола, могут подавлять нормальный рост микроорганизмов или быть даже токсичными длямикроорганизмов, применяемых для Фер ментации с использованием смешаннойкультуры, и их следует избегать.Процесс ферментации может быть.осуществлен периодически или непрерывным способом, Непрерывный способ 45 особенно выгоден, когда источникомуглерода и энергии является низшийспирт, например метанол или этанолрасход которого может быть легкоавтоматизирован. Применение такихмикроорганизмов и такого сырья в периодическом ферментационном процессе считается неэкойомичным, Однако при непрерывном процессе ферментации такие питательные среды высокоэффективны и экономичны, При ферментации,после того как в ферментаторенадлежащим образом произведен посевсмешанной культуры, окисленный углеводород может быть добавлен в видеотдельного потока, либо он может фО быть смешан с водой в виде водногопотока с целью ее стерилизации илис минеральной средой с целью еестерилизации, Или же могут быть осуществлены все эти варианты сразу.655 Обычно окисленный углеводород пода 837329Количество Компонент НР 04 (85-ная) 1 г КС 6 1,5 г 0,2 г 0,1 г М 980 д7 Н О30СаСб 2 Н О ЫаС 1 Дистиллированная4 О вода До 1 л Компонент Количество 0,06 г 0,08 г 4,80 г 0,30 г 0,20 г 2,00 г 0,02 г СцЯО 4 5 НО РеСХ бН О й МпЯОН ЫаМОО ф 2 Н О пЯО 7 Н Н ВО Н О,(конц.) Дистиллированнаяу 5 вода о 1 л ется отдельно для удобства регулирования концентрации в поступающемв ферментатор потоке в интервале2,5.-35 вес.В, чаще 10-15 вес,В,Рост микроорганизмов осуществляется в водной питательной среде, содержащей водный раствор минеральнойсоли, источник углерода и энергии,молекулярный кислород и исходный .посевной материал смешанной культурыМсСкорость Ферментационного ростаможно регулировать путем регулирования подачи окисленного углеводорода.Скорость подачи источников углеродаи энергии в Ферментатор следует регулировать так, чтобы она в основномбыла равна скорости потребления егомйкроорганизмами во избежании значительного накопления в ферментаторе,в частности, каких-нибудь токсическихвеществ, Удовлетворительный контрольможет быть достигнут также путемпроверки содержания непрореагированного питательного материала в выходящем иэ Ферментаторов потоке, оно должно составлять 0-0,2 вес.Ъ,Обычно, при вышеприведенных условиях, время нахождения микробных клеток н Ферментаторе при непрерывномпроцессе составляет приблизительно2-4 ч, хотя оно не имеет решающегозначения,Кроме вышеописанных молекулярногокислорода и источника углерода иэнергии, культуре Мо требуются такжеьщнеральные питательные вещества иисточник усвояемого азота. Источником азота может быть любое азотсодержащее соединение, способное выделять азот в виде, удобном для обменного поглощения организмами, Хотя могут применять различные органические источники азота, напримердругие протеины, мочевина или т,пно обычно неорганические источникиазота более экономичны и удобны дляпрактического применения. В качестве примера таких неорганическихазотсодержащих соединений можно привести аммиак или гидроксид аммония,а также различные соли аммония, например карбонат аммония, цитрит аммония, Фосфат аммония, сульфат аммония и пирофосфат аммония, Удобно применять газообразный аммоний, который можно барботировать в соответст,вующих количествах через водную Фер"ментационную среду.рН водной микробной Ферментационной смеси 5,5-7,5 предпочтительно6-7. Подача аммиака способствует поддержанию требуемых значений рН,так как иначе водная среда становится слабо кислой, Вообще интервал предпочтительных значений рН для микроорганизмов в какой-то степени эависит от применяемой среды, поэтомупредпочтительный интервал значений рН может изменяться незначительнопри изменении минеральной среды.Кроме источников кислорода, азота и углерода и энергии, необходимок питательной среде добавлять выбранные минеральные питательные вещества в необходимых количествах исоотношениях, чтобы обеспечить правильный рост микроорганизмов и максимальное усвоение окисленного углеводорода клетками в процессе микроб(О ной конверсии,Источники Фосфат-ионов или другихионов Фосфора, а также ионов магния,кальция, натрия, маргайа, молибдена и меди обеспечивают потребность15 в основных минеральных веществах.Для Ферментационного процесса целесообразно применять приведенную ниже минеральную питательную среду(ГМ), которая содержит еще в кащ честве компонента раствор, содержащий следы минеральных веществ,35 Раствор, содержащий следы минеральных веществ Раствор, содержащий следы минеральных веществ, приведен ниже.Через 22 ч минеральнуюсреду заменили водным составом, содержащим7,5 об. метанола в дополнение к среде ГМплюс 0,75 г хлорида калия, 55 удвоенное против нормального коли, -чества следов минеральных веществ,утроенное против нормального количества марганца (все дается в расчете на 1 л) и не содержащим хлориданатрия. После 166 ч питательнаясреда била заменена водным средством, содержащим 10 об.% метанола,2,5.мл фосФорной кислоты (85) на1 л, 2 г/л хларида калия, 1,75 г/л 65 МЯЯОь .7 НО, 0,25 г/л СаСС 2 НО,Могут применяться также и другиеконцентрации минеральной среды, Значения которых приведены в примерах.До начала работы либо в периодическом либо в непрерывном режимевсе оборудование - реакторы или устройство для ферментации, сосуды или5сборники, циркуляционные или охладительные устройства и т.п. " должно быть стериализонано, например,паром при температуре по меньшей мере121 ОС в течение нескольких минут,например 15 мин. Затем стерилизованный реактор засевается культуройн присутствии всех требуемых питательных веществ, включая подачумолекулярного кислорода и окисленного углеводорода.Могут применяться контрольноизмерительные приборы для изменения плотности клеток, рН содержания растворенного кислорода, 20концентрации окисленного угленодоро"да н ферментаторе, температуры, скоростей подачи и т,п. Предпочтительно,чтобы подаваемые в ферментатор мате-риалы были стерилизонаны до поступления 5в ферментатор. Если окисленный углеводород представляет собой вещество,способное стерилизовать другие материалы, например этанол или метанол, тоцелесообразно добавлять его в другиепотоки, например в минеральную среду,в достаточном для стерилизации количестве.Следует избегать добавления протинопенных веществ к ферментационнойсмеси, так как протинопенные добавки, например снликоны, могут оказывать вредное действие на содержаниерастворенного кислорода при рекомендуемых повышенных температурах Ферментации и могут вызвать з.амздление роста 40микроорганизмов или их гибель, Пена,образуемая культурой М , не вредитросту и определенно благоприятстнует поддержанию микроорганизмов всистеме с высоким содержанием растворенного кислорода, Пена способстнует поддержанию относительно большойповерхности раздела на границе газ/жидкость, Таким образом, ферментация улучшается и улучшается теплопередача, ее регулирование, равномерность и отсутствие точек перегреваПри желании можно применять пенообразователи, например детергенты,предпочтительно неионные,Выделение микробных клеток можетбыть осуществлено обычными способами, например путем подкислениявытекающего из Ферментатора потокадо рН приблизительно 4 и нагреваподкисленного потока до температурыубивающей микроорганизмы, напримерприблизительно до 80 оС, причем нагревать следует медленно, чтобы неповредить протеиновый продукт,Затем вытекающий поток можно центрифугиронать промыть, снова центри" Фугиронать для отделения микробных 1 клеток от вытекающего из ферментатора потока, Клетки могут быть обработаны, чтобы вызвать разложение с целью облегчения извлечения иэ, них протеина и других веществ, В 11 роцессе Ферментации образуются также нужные побочные продукты, которые могут быть извлечены из вытекающей иэ ферментатора жидкости. Эти внеклеточные продукты могут повысить экономичность процесса в целом, так как среди них имеются ценных продукты, например полисахариды, аминокислоты, например глутаминовая кислота, энзимы, витамины и т.п.Одноклеточный протеиноный продукт является ценным источником протеина как для людей, так и для животных, Для питания людей клетки при желании можно обработать с целью уменьшения содержания ну:леиновой кислоты, но для питания животных в такой обработке нет необходимости,П р и м е р 1, Проведена опытная непрерывная ферментация с применением термофильной смешанной культуры, В ферментатор емкостью 7 л, оборудованный азратором, мешалкой, прибором для регулирования подачи кислорода и устройствами для изменения и регулирования температуры и рН Ферментационной смеси, загрузили н качестве посевного материала около 500 мл Ферментационной реакционной смеси из предыдущей опытной Ферментации с применением термофильной минеральной питательной среды М,В ходе опыта поддерживают скоросмперемешивания 1000 об/мин и рН 6,26,35 путем добавления при необходимости раствора гидроксида аммония,Расход подаваемого в ферментатор воздуха был 2 л/мин во время опыта, Через 6 ч в ферментатор стали подаватьтакже в основном чистый кислородсо скоростью 0,5 л/мин,через 11 В часов расход довели. до 0,75 л/мин,через 174 ч - до 1,5 л/мин и через190 ч - до 2 л/мин,837329 12 20 мл/л водного раствора (0,3 г/л)МпЯО 4 НО и 35 мл/л ранее описанного раствора, содержащего следы ми-неральных веществ,Пробы вытекающей ферментационнойжидкости отбирались время от времени для извлечения из них клеток.Полученные значения содержания клеток в расчете на сухой вес клетокв граммах на 1 л, вычисленные значения продуктивности в граммах клетокна 1 л в 1 ч, вычисленный выход пред)ставлены в табл, 1.Таблица 1й Показатель при времени, ч Наименование 46 118 166 190 286 358 2,27 2,38 2,83 2,33 2,4327,13 27,04 35,21 35,53 35,57 Твердые вещества, г/л 26)82 27,66 Выход клеток,% . 44,7 46,1 Продуктивность,г лч12 2 11 7 12 5 15 7 Приблизительно через 126 ч былиотобраны пробы ферментационной смеси,которые были подготовлены для лиофилиэации микробных клеток по известнойметодике. Затем зти лиофилизованныепробы хранились для последующего использования в опытной ферментации и дляпередачи на хранение образцов НТВ хранителю микроорганизмов, уполномоченному Министерством сельского .хозяйства США. Северная региональная ис" .следовательская лаборатория в Пеории,штат Иллинойс,Периодически пробы отбирались также иэ ферментационной реакционнойсмеси с целью микроскопического ис-следования морфологии клеток. Такоемикроскопическое исследование показало, что культура Мо состоит изкрупных грамположительных изогнутыхпалочек, крупных грамотрицательныхпалочек и мелких грамотрицательныхпалочек, Изредка наблюдались, такжекрупные грамположительные (не изогнутые) палочки, но можно думать, чтозто временный вариант крупных изогнутых грамположительных палочек,а) Значение получено путеМ выпаривания при 100 оС 10.мл пробы вытекаю щей из ферментатора жидкости и вычитания веса минеральных твердых веществ, содержащихся в 10 мл среды:в) значение получено путем центрифугирования 100 мл пробы вытекающейиз ферментатора жидкости, повторно- бОго суспендирования твердых веществв дистиллированной воде и повторногоцентрифугирования для отделения твердых веществ, которые затем высушивались в течение ночи при 100 фС," 45 Количество Компонент 2,0 г 3,0 г КНРО 4 0,4 г0,04 г0,1 г2 0 г МдБО 47 Н, ОСаСЮ 2 КОИаС(НН 4) 04 Раствор, содержащийследы мйнеральныхвеществДистиллированная 0,5 мл Скорость подачи среды составляла от 700 мл/ч в первые 22 часа до 817. мл/ч через 118 ч, 781 мя/ч через 166 ч и 763 мл/ч черээ 382 ч. Продолжительностьпребывания, ч 2,361Клетки, г/л 26,36 27,87 35,5 36,66 36,7646,47 44,4 45,8 45,9 с) значение получено путем деления количества извлеченных твердых веществ (г/л) на количество введенного метанола (г/л) к 100;д) значение получено путем деления извлеченных твердых веществ (г/л) на продолжительность нахождения смеси в ферментаторе (ч),П р и м е р 2, Приблизительночерез 1 мес. одна ампула с диофилизированной микробной культурой НТВ,полученной при опытной ферментации,описанной выше в примере 1, былавскрыта обычным способом в асептических условиях и добавлена к 100 млферментациониой среды, обозначенной1 М 2, которая тоже содержала 0,5метанола. Состав среды 1 М 2 приведенниже,55,8 126 Азот в виде аминогруппы, вес,% 65 Медь, м. д. 20 13,4 Колбу, загруженную оживленной диофилиэиронанной культурой, подвергали инкубации при 55 ОС при встряхивании.Через 24 ч в колбе наблюдался хороший рост культуры и 5 мл.этой смеси перенесли в 10 мл среды 1 М 2, содержащей тоже 1,5 об.% метанола. Через 24 ч наблюдался хороший рост и был сделан третий перенос в ту же среду в две колбы, каждая иэ которых содержала 500 мн среды 1 М 2 плюс 1,5 об.Ъ метанола, Третий перенос заключался в том, что в каждую из этих колб ввели по 100 мл культуры. Культуру оставили расти в течение 32 ч и затем испольэовали как посевной материал для опытной непрерывной ферментации в уст ройстве, описанном выше в примере 1, В ферментатор загрузили 100 мл среды РМи 1000 мл посевного материала, к которому было добавлено 10 мпметанола. Поддержинали температуру 20 55 оС, н рН 6,25-6,4 регулировали путем непрерынного добавления раствора гидВо нремя опытной ферментации были также отобраны образцы микробной культуры для микроскопического иссле донания, как описано в примере 1.В настоящем примере обнаружены толь" ко крупные.грамположительные изогну- . тые палочки и крупные и мелкие грамотрицательные окрашивающие палочки. 50 После 238 опыта культура погибла при попытке заменить питательную среду другой средой с большей концентрацией спирта.П р и м е р 3Ниже приведены ре зультаты химического анализа извлеченных микробных клеток, характеризующие состав микробной культуры, полученной в опыте, описанном в примерр 1.Сырой протейн, еОвес,Ъ 8 Ъ,бВЗола, нес,Ъ 9,16 роксида аммония, как описано раньше.Сначала, пока культура была оставлена в ферментаторе для акклиматизации,мешалка работала со скоростью300 об/мин, а ноэдух подавался со скоростью 0,5 л/мин. ереэ 7 ч началась .непрерывная подача питательной средыв вышеприведенном примере 1. Крометого, расход воздуха увеличили до ф2 л/мин, а скорость мешалки унеличйлидо 1000 об/мин. Спустя. 30 ч расяодвоздуха уменьшили до 1,75 л/мин истали подавать кислород в количестве0,75 л/мин, затем после 54 ч довеликоличество кислорода до 1 л/мин, после 198 ч - до 1,5 л/мин. Из вытекающей ферментационной жидкости перио"дически отбирали пробы для определения содержания клеток в граммах на1 л в расчете на сухой вес, а такжевыхода и продуктинности процесса ферментации. Данные, полученные припроведении опыта, представлены втабл. 2837329 16 В табл. З,тоже приведено содержа.- ние аминокислот в микробных клетках, полученных при другой опытной ферментации с применением смешанной термофильной культуры Для сравнения в табл. 4 пркведено также содержание Таблие Ь Содержание аминокислот, г/100 г продукта,13 алк П р к м е ние3 в термоных на ннй резул в с чистойрой приведено ица менимы кисле амнноты ешанная кульра (НВТ) чистая культура(НВТ) 1АланииАргкнинАспарагиноваякислота 5,6 3,39 6,50 3,71 6,26 4,19 ицерин Глутаминовая .кислота 0,47 10,6 1 22 Содержание амкноккслофкльных .культурах, выражеметаноле в расчете на сре аминокислот в чистой культуре термофильного мнкрооргани зма, полученной при выделении термофильных микроорганизмов из исходного образца почвы, .описанного ранее.ц а 3 значение смешан- значение химических ная куль- химичеспоказаний тура кнх пока(НВТ) заний о начения химических показанийодержание незаменимых аминоислот в яичном белке такогое веса принято за 100.,тат из пяти опыт термофильной культ в табл. 4.Табл одержание аминокислот, г/100 продуктаЗаменимые амино- кислоты чистая культура (НВТ) смешанная культура (НВТ) 2,32 2,38 Пролин Серин 1 т 75 2,09 Общее содержаниенезаменимых аминокислот 32,19 30,88 Общее содержаниеаминокислот 66,27 67,8884,4.Сырой протеин 85,63 формула изобретения 20 Составитель М.Белоусова Редактор Н.Потапова. Техред Н. Келушак Корректор В, Вутяга тВЙ ю еюЗаказ 3222/47 фираж 528 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП фПатентеф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Можно видеть, что общее содержа ние незаменимых аминокислот несколь-, ко выае у продукта смешанной культуры (47), чем у продукта полученного из чистой культуры (46). Далее если незаменимые серусодержащие аминокис.лоты вводится путем добавления синтетического метионина, то значения химических показаний указывают на то, что продукт, полученный на смешанной культуре, вдвое лучше с точки зрения питательной ценности продукта, полученного на чистой культуре в расчете на ближайшее низшее значение химических показаний для незаменимых аминокислот. Способ получения протеина с помощью аэробного культивирования культуры микрос.зюганизма в водной среде, со 25 держащей источники углерода, азота иминеральные питательные вещества,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения выхода протеина, вкачестве исходной культуры микроорганизма используют термофильнуюкультуру ЯВИ В,Источники информации,принятые во внимание при эксперты е1. Патент СССР 9 572209,кл, С 12 0 13/06, 1977

Смотреть

Заявка

2559006, 30.12.1977

ДОНАЛЬД ОЛИВЕР ХИТЦМАН

МПК / Метки

МПК: C12P 21/00

Метки: протеина

Опубликовано: 07.06.1981

Код ссылки

<a href="https://patents.su/9-837329-sposob-polucheniya-proteina.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения протеина</a>

Похожие патенты