Б п т б алчп gt; amp; -, юу: лч1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Сощиалистицеских Респу 6 пикЗависимый от патентаМ. Кл. А 011 с З,Ъ 111.1971 (694401/17439714,Ч 111.1970,64389, США аявлено 30-15)Приорит Гасударственный ке." нтСовета Министрав СССРпа делан изобретенийи вткрытий У.Л К 636,085.1(088,8) Опубликовано 26.Х.19 летень4 та опубликования описния 8.И 1,1974 Авторизобретения Иностранец Юлиус Бергер оедипенные Штаты Америки) Иностранная фирма ф. Хоффмаин-Ля Рош и Ко Аявител КОРМОВАЯ ДОБАВ бав ами ая с тноотиксо 5 Возду ренным ру и пи лый, уме 20 с тонким роста.шный мицелий хара развитием, имеет оар гментирован в серо ренно-серый и желт и белыми краями теризуется хатистую те ато-белый,нато-серый а ранней суме- ксту- свет- цвет адии Изобретение относится к кормовым дкам, стимулирующим рост животных, вности домашней птицы,Известны стимулирующие кормовые дки, содержащие витамины, антибиотики,нокислоты, гормонные препараты.Предлагается кормовая добавка, которцелью ускорения роста животных, в части домашней птицы, содержит антибиХили его физиологически активны Антибиотик Хвырабатывается 51 гер 1 отусез зр, Х, АТСС 21386,Югер 1 отусез яр. Хвыделен из образца почвы, отобранного на Бермудских островах. Культура этого организма получила лабораторный индекс 51 гер 1 отусез ер. Х, подкультура 3191-2 была выставлена в Американской коллекции типов культур, в Токвилле, штамм Мэримнь, где эта культура была внесена в коллекцию АТСС под регистрационным номером 21386, Виды 51 гер 1 отусе, идентифицированные как Ягер 1 отусез зр. Х, включают все штаммы Югерлпусез, вырабатывающие антибиотик Хи не могущие быть дифференцированными от штамма АСС 21386 и его подкультур. Штамм 51 гер 1 отусез ХАТСС 21386имеет следующие особенности.О ц е и к а с т е п е п и р о с т а. Культура дает хорошо развитый и разветвленный мице лий на субстрате и характерный воздушныймицелий на многих средах. В условиях погружения бактерии развиваются в виде твердых и крупных особей и в зависимости от применяемой питательной среды они могут 0 быть бесцветными, желтымн, желтовато-коричневыми или оливково-коричневыми. Они представляют собой коричневато-черные пятна по краям зоны роста на агар-агаре из экстрактов дрожжевого солода. Наблюдаотся концентрические кольца и образование секторов из колоний сеоого цвета. Сравнение некоторых свойств 5 й ер 1 отусез зр. Хсо свойствами других культур приведено в табл. 1.Огзеоцсз Я, Рпзрпгео 1 цзсцз Я, Ацге 1 асегз 5. АпЫосиз Я, ИгИ асегз Ярее Свойство Риветта и Петерса М ПУоксмена Умезава ХЗш РА Серый Гризеолу- теин Ягп РА Серый Хлортетра- циклин БаРАСерыйВоздушный мицелий и/или споры Среда Обратный цвет хороший Воздушный. Мицелий беловатый; спорообразование хорошее; споры белые Агар-агар Чапека с сахарозой Светло-желтый Слабо- коричнева- тый хорош ийф Воздушный, Мицелий от сходного с пушинками до порошкообразного, белый, становится при спорообразовании дымчато-серым Аспарагиндекстроза 0,25 % Отсут- ствует От оранжевого до ка нареечно-желтогоВоздушный. Мицелий от белогодо светло-серого; спорообразованиехорошее, споры серые Агар-агар с пептоном и томатной пастойОранжево-темножелтый то же то же Спорообразование хорошее, споры становятся дымчато-серыми с белыми краями Агар-агар с крахмалом Оранжево-желтый Агар-агар Краинского с глюкозой Воздушный, Мицелий белый; спорообразование хорошее; споры становятся дымчато-серыми Лимонно-желтый Агар-агар микрофил" (ВБ 1) Отсутствие спорообразования Слаботем- ный Светло-желтый Питательный агар-агар с экстрактом дрожжейОтсутствие спорообразования Темный От сероватого до желтовато-коричне- вого Агар-агар с глицерином Влажный, кремового цвета Отсут- ствует от удовлетворительного до хорошего (10 дней) Светло-желтый хороший Тампон из картофеля Отсутствие спорообразования Черный Тампон из моркови Отсутствие спорообразования то же ф) Рост хороший в течение 8 дней при 24, 28, 32 и 37 С, но не при 42 С,Рост хороший при применении бульона с триптоном (темный пигмент, отрицательная реакция на индол по прошествии 3 дней); питательного бульона ГДА, бульона Чапека с сахарозой, бульона Краинского с глюкозой и бульона с глицерином и цитратом кальция. Поверхность спор Мор ф олог и яЦветОбразование меланина Образование антибиоти- ка Источник углерода:Глюкозао-ксилозаЕ-карабинозаЕ-рамнозао-фруктозао-раффинозао-маннитЕ-инозитСалицинГалактоза+ Зт РА Серый404186 Таблица 3 Период иикуба- ции Характер роста Среда Бульон с органическим нитратом Умеренный, без спор Бульон с органическим нитратом Желатин (15"0) при 18 С Удовлетворительный, темный, растворимый пигмент Желатин (15%) при 18 С Рост от удовлетворительного до хорошего; коричневато-черный пигмент, отсутствие спор Слабое ожижение 12 Агар-агар с пентоном и железом (Клиглер) Хороший, слабое спорообразование Лакмусовое молоко Удовлетворительный поверхностныйрост Удовлетворительный поверхностньшрост; отсутствие спорообразования Лакмусовое молоко Хороший; слабое образование белыхспор Яичный агар- агар Дорсета Очень хороший рост; в основном хорошее образование светло-серых спор Яичный агар- агар Дорсета 10 Таблица 4 П р о д о л к е н и е Использованием) Компоненты Компоненты Использованием) с 1-Рибозай-Галактозай-МаннозаЦеллобиозаЛактозаМальтозаДекстринДул ьцитЭритритСорбитГлицеринСульфат аммонияНитрат натрияНитрит натрияАцетамидАспарагинТирозинШ-Триптофан Источник углерода О - 1 0 - 1 Источник азота Крахмал ф) 0 в отсутству, 1 в плох, 2 в удовлетворительное, 3 - хоро.пее,Е-Арабиноза1.-рамнозай-Ксилозаб-Маннит1.-ИнозитГлюкозафруктозаСахарозаРаффинозаАцетатЦитратМалатОксалатСалицилатСукцинатТартратфенол (0,1%) Хороший, темный пигмент Физиологическая реакция Восстановления нитрата нс наблюдается, газов не образуется Восстановления нитрата ие наблюдается, газов не образуется Ожнжения желатина ие наблюдается Хромогенная-образу тся мсланин Цвет лакмуса не меняется; помутнения или осветления не наблюдается Светло-коричневатый цвет; отсутствие помутнения или осветления Небольшое количестьо темного пиг- ментаМ о р ф о л о г и я. Цепи спор, образующиеся на воздушном мицелии, разветвляются моноподиально и симподиально с образованием прямых цепей, петель, крючков, растянутых и имеющих неправильную форму спиралей (3 - 4 витка), также имеющих метлообразное расположение. Цепочки бывают как короткими, так и длинными, но преимущественно они содержат более 10 спор. На большинстве сред наблюдается образование склеропий.Споры являются удлиненными и имеют овальную форму и цилиндрическую. Поверхность спор гладкая,Физиология. Растворимый пигм е н т. На агар-агаре с экстрактом дрожжей и экстрактом солода образуются следы коричневого пигмента.Культура является хромогенной (образует меланин) на агар-агаре с пептоном-железом и тирозином, а также на бульоне с триптономэкстрактом дрожжей. Характеристики культур Ягер 1 отусез зр, Х(инкубация 14 дней. Температура 28 С) приведены в табл. 2.Физиологические реакции 51 гер 1 отусез зр. Хприведены в табл. 3.Кроме того, для 56 ер 1 отусез зр. наблюдается хорошее использование 1.-арабинозы, дфруктозы, Й-маннита, 1.-рамнозы, д-раффинозы и сахарозы; плохое использование Й-ксилозы, 1.-инозита и полное отсутствие использования целлюлозы.Характер использования органического азота для 51 гер 1 отусез зр. (период инкубации 14 дней. Температура 28 С) приведен в табл. 4, Культура хорошо развивается при 24 - 57 С, но не развивается при 42 или 50 С.Культивирование продуцента 51 гер 1 отусез зр. Хс целью получения желаемого антибиотика Хосуществляют с применением самых различных способов ферментации, При ферментации в колбах порцию спор, взятую со среза культуры на агар-агаре, инокулируют в 100 мл питательной среды в конической колбе Эрленмейера объемом 500 мл и инкубируют при температуре около 28 С на вращающейся качалке в течение 7 дней. Пробы бульона отбирают на третий, пятый и седьмой день. Аналогично при приготовлении больших порций бульона продукт инокулирования готовят в конических колбах Эрленмейера емкостью 6 л или в пирексовых бутылках объемом 22,2 л, снабженных устройствами для аэрации, отбора проб и т. д. Аэрацию в бутылках и резервуарах создают за счет продувания стерильного воздуха через сбраживаемую среду. При выполнении процесса в резервуарах дополнительное перемешивание осуществляют за счет механических лопастных мешалок. Для контролирования процесса пенообразования употребляют такие антипенообразователи, как свиной лярд, соевое масло и т. д.51 гер 1 отусез зр. Хможет культивироваться в самых различных культуральных жидких средах. Особенно ценными для по 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 лучения нового антибиотика являются средЫ, содержащие источник ассимилируемого углерода, например, крахмал, глюкозу, мелассу и источник ассимилируемого азота, такой как белки, гидролизаты белков, полипептиды, аминокислоты, жидкость, получаемую при обработке початков кукурузы, аммониевые соли, и неорганических катионов и анионов, таких как калий, натрий, кальций, магний, сульфат, фосфат, хлорид и т. д. Микроэлементы, такие как кобальт, медь, железо, молибден, бор поступают в среду в качестве примесей к другим компонентам среды,Активность антибиотика Хоценивают при испытаниях его 1 п и 1 го по зоне ингибирования грамположительной бактерии Вас 11- 1 цз Е обычным методом диффузии в среде агар-агара с чашкой и пластинкой. В другом случае пользуются для испытаний грамположительной бактерией Вас 111 цз з 1 гпр 1 ех, Обе бактерии дают зону ингибирования - 20 мм при использовании раствора с концентрацией ед/мл. При этом методе испытаний культуру испытуемого микроорганизма выращивают в питательном бульоне, например, в бульоне с триптиказой с соей, в течение 24 - 42 час при 28 С на вращающейся качалке (100 мл среды в конической колбе Эрленмейера объемом 500 мл). Концентрация продукта для инокулирования, использовавшегося для инокулирования слоя для посева в 4 мл, составляет 0,25 - 0,5/,; этот слой наливают на 20 мл уже застывшего питательного слоя агар-агара в чашке Петри.Чашки помещают в холодильник по меньшей мере на 2 час до отбора и заполнения их испытуемым раствором, содержащим антибиотик. Затем чашки инкубируют при 35 С в течение 18 час, и диаметры зон ингибирования измеряют с точностью до 0,5 мм. Вычисление числа (ед/мл) производят на основании стандартных кривых.Для производства антибиотика целесообразно пользоваться сложными азотсодержащими веществами из различных источников, такими, как например, растительные материалы (соевые бобы или хлопковая мука, овсяная мука, твердое вещество томатной пасты, растворимые вещества, образующиеся при ферментации зерна), материалами животного происхождения (рыбная мука, продукт, получаемый при проваривании мясной муки, продукты гидролиза аминокислот) и клетками микробов (дрожжи торула).Источниками углерода служат, например, глюкоза, глицерин, декстрин, и кукурузный крахмал, Кроме неорганических солей, обычно присутствующих в природных средах, можно вводить дополнительные соли, такие как фосфат калия, карбонат кальция, сульфа магния и микроэлементы, которые иногда улучшают рост и выход антибиотика (в зависимости от компонентов уже присутствующих в основной среде). Одной из рекомендуемых сред для производства антибиотика Хв404186 10 Таблица 5 Продо чжение Активностьантибиотика, ед/мл Активностьантибиотика, ед/мл Возраст,Возраст,Источник азота Источник азота дни дни 50 12 27 18 30 26 40 41 67 50 52 40 57 37 33 138 74 19 51 25 34 12 47 21 21 16 50 22 26 25 16 Таблица 6 Состав среды, % Ферментация в колбахв течение 7 дней Растворимое веществоТвердое веществотоматной пасты в резервуарах в течение 6 днейГлюкоза 100:120 71: 46 150 0,5 100 0,5 86:119 91 0,5 150:124 125:126 не испытывали 140 1,5 180 1,5 54 0,1 0,1 97 (4 дня) 94 КэНРО СаСОа профло" крахмал 1% отвара из мяса с мукой 1% ВУ(КоммершиалСолвентс Корпорейшн" ) 1% Профло" (Тредерс ОйлМилл Компани" )1% овсяной муки (КуокерОтс Компани" )1% Сойалоз (обезжиренноймуки соевых бобов) 1% белковой муки из арахиса1% белковой муки из кокосовых орехов1% твердого веще ств а томатной пасты1% муки с льняным маслом 1% кукурузной муки 1% высушенного экстрактаиз зерна кукурузы вместес растворимыми веществами (Х. Уоркер)1% Солудри" (Шпили Дистиллерс")1% рыбьей муки (Гортон) 1% отходов рыбы (Уилкинсон)2% смеси молочного сахарас альбуминомэ)1% высушенных дрожжейторулаф1% автолизата дрожжейнейшенел"1% гидролизата сои, образовавшегося под действиемэнзимов 1% гидролизата белков пшеницы, образовавшегося прикислотном гидролизе (Гурон Миллэ")2% гомогенизированной отжатой рыбыэ)1% протопентона366 (Уилсон Лабораториз ) 1% твердого вещества кукурузных початков1% навара мяса с мукой 1% остатка после ферментации зерна (ВУ) 1% обезжиренной муки изсемян хлопка (Профло" 1% отходов рыбыф)1% высушенного экстрактаиз кукурузы с растворимыми веществами(Х, Уокер)1% обезжиренной муки изсемян хлопкафф)1% обезжиренной муки изсемян хлопкаффф0,25% Профло" эфф 2,0% Профло" эфф1% Профло", 1% глюкозы ) 1% Профло",1 О крахмалаф) 1% Профло", 1% глицеринаэ)1% Профло", 1% желтогосахарами)1% Профло, 1% лактозыф) 1 О Профло", 1% маннитаф) ф) Среда не содержит декстринафф) Среда не содержит СаСОэфайф) Среда не содержит СаСОа или КяНРО Выход антибиотика, ед/мл404186 12 Таблица 7 Характеристика резервуара Деньсбора Активность,ед/млСостав среды, % Загрузка среды, л Материал Объем, л 1% высушенного вещества после экстракции. 1% декстрина, 0,1% КэНР 04, 0,1% СаСО,295 454 67 Нержавеющая сталь 1% 1-глутамата натрия, 1% декстрина, 0,1% твердого вещества кукурузных початков, 0,15% КэНР 04, 0,05% МфО,454 295 То же 1% твердого вещества томатной пасты, 1% высушенного растворимого вещества после эк стра кции зерен кукурузы, 1% кукурузного крахмала 0,5% глюкозы 0,5% СаСО, 0,1% К,НР 04 295 200 454 0,5% Профлоф, 0,5% высушенного растворимого вещества после экстракции зерен кукурузы, 0,5% твердого вещества томатной пасты, 0,5% пасты из экстракта мяса (протопентон366), 1% крахмала, 0,1% СаС 00,1% КЙНРО 14500 91 1900 Углеродистая сталь 1% Профло", 0,5% жидкости из кукурузных початков, 1,0% кукурузного крахмала, 0,1% СаСОз, 0,1% КНРО То же 220 260 340 больших аппаратах для ферментации, является среда, содержащая 1% обезжиренной муки из семян хлопка, 0,5% концентрата жидкости, получаемой при выщелачивании кукурузы, 1% кукурузного крахмала, 0,1% КНРО 0,1 % карбоната кальция.В табл. 5 приведена характеристика питательпых веществ для антибиотика 51 геротусез зр. Хво встряхиваемых колбах, а в табл. б - влияние изменепия питаЯгер 1 отусез зр. Ххорошо растет также и образует антибиотик на некоторых химических синтетических средах, содержащих аммониевые соли, нитрат или аминокислоты (глутамат, аргинин, глицин), служащие источниками азота вместе с глюкозой, декстрином, крахмалом, цитратом, ацетатом, служащими источниками углерода, с добавкой таких солей, как фосфат калия, карбонат кальция и сульфат магния и с микроэлементами, включающими ионы двухвалентного железа, двухвалентной меди, двухвалентного марганца, двухвалентного кобальта, двухвалентного цинка. Результаты форменации 51 гер 1 отусез ер. Хна различных синтетических средах приведены в табл, 8.Продукция антибиотика Хвозрастает при хорошей аэрации среды для ферментации. Кроме того, получение антибиотика Хможет быть осуществлено при любой температуре, обуславливающей удовлетворительный рост микроорганизма. Так например, Югер 1 отусез зр. Хвыращивался в колбах, инкубировавшихся при температуре 24, 28, 30 и 32 С. Испытания антибиотика через тельных веществ на выход этого антибиотика во встряхиваемых колбах и резервуарах,Все среды, кроме специально оговоренныхслучаев, содержат 1% декстрина, 0,1% 5 К 2 НРО и 0,1% СаС 03.В каждые 100 мл среды для инокулированиявносят 1 мл суспензии спор Ягер 1 отусез зр.Х.Результаты ферментации в резервуарах с 10 различными средами приведены в табл. 7 три, четыре, пять и шесть дней показали, что примерно один и тот же максимальный выход может быть достигнут при любой температуре в пределах 24 - 32 С. Наибольший вы ход достигается через три - четыре дня при30 и 32 С, в то время, как для его достижения при температуре 28 С требуется четыре дня, а при температуре 24 С - пять - шесть дней, Величина рН среды во время про цесса ферментации остается почти нейтральной или становится слабо кислой. Конечная величина рН зависит от присутствующих буферных веществ от первоначальной величины рН среды, которая должна быть почти нейт ральной до стерилизации.В процессе выделения и очистки антибиотика Хможно использовать самые различные способы, например, способ экстракции растворителем, способ периодической экс тракции или непрерывной противоточной экстракции из жидкости в жидкость, осуществляемый в экстракционных колоннах и метод хроматографии, основанный на проникновении в гель сырого антибиотика, выделенного из 65 культуральной среды.(ЙН,) зНРО 1% глюкозы, 1% декстрина, 0,10, КзНРО 4 0,1% СаСОз 1,0% глутамата натрия, 1%декстрина, 0,1% КзНРО 0,05% МяБО, 1,0% смеси аминокислот, 1% декстрина 0,1% КзНРО 4, 0,1% солейЪБР1ВВ 1 бульон Чапека - Докса 1,0% аргинина, 1,0% декстрина, 0,1% К,НРО 0,1% СаСОз, 0,05% МАЗО, 1,0% Д 1.-аспаргиновой кислоты, 1,0 % декстрина, 0,1% К,НРОз. 0,1% СаСОз 0,05% МяВО,7,6 6,65 П,5 47,4 натрия, 0,5% хлористого натрия, 0,025% МфО 7 НзО0,01% КзНРО 4 0,01,; КНзРОз 0,3 ОО СаСО 0,001% МпЯОз 4 Нз 0,0,004; МдБОз 7 НзО, 1,6 10 К,СгзО-,0,8 20 0,8 Таблица 9 55 Антибиотик Натрие- Х, вая соль, вес, вес,Элементы 60Углерод Водород 61,48 7,81 3,32 24,45 2,94 63,637 81 3,48 25,08 АзотКислород (ио разности)Натрий65 Антибиотик Хиз культуральной средывыделяют путем отделения мицелия при помощи фильтрования или центрифугирования.Затем его экстрагируют из профильтрованного или процентрифугированной среды как периодический или противоточиый метод распределительной экстракции. Зкстракции растворителем осуществляют в интервале величин рН 3 - 7,5 с использованием не смешивающихся с водой сложных эфиров в качестве растворителя, этилацетат, амилацетат, бутилацетат и тому подобные алифатические сложные эфиры. Рекомендуется пользоваться бутилацетатом. Лучшая система растворителей для использования при противоточном распределительном методе состоит из смеси этилацетата, изопропанола и 0,1 н. водного раствора вторичного фосфата натрия.Конечную очистку антибиотика Хосуществляют методом хроматографии, основанным на проникновении в гель, Очистка основана на адсорбции предварительно очищенного препарата антибиотика, например, препарата, полученного при экстракции растворителем, на геле декстрана с поперечными связями или на полимеризованном геле декстрана. Предварительно очищенный препарат антибиотика подвергают хроматографированию на сефадексе ВНс элюированием спиртом.После фильтрования или центрифугирования среды для ферментации для анализа антибиотика Хпользуются методом хроматографии на тонком слое или методом хроматографии на бумаге, В связи со свойствами антибиотика, визуальную оценку пятен осуществляют с использованием флуоресцентного метода; кроме того, можно пользоваться методом биоавтографии, Хроматографировапие лучше проводить на стеклянных пластинках с силикагелем. Применяемая ири хроматографии на тонком слое система растворителей состоит из хлороформа, метанола и водного гидрата окиси аммония,0,1% КС 1, 005% ЫфОз0,33% (1 чН 4)зНРО 4 1,5%глюкозы, 0,1% цитратанатрия, 0,05% ацетатаАнтибиотик Хпосле очистки представляет собой аморфное желтое вещество. Для получения солей этого антибиотика с катио 25 нами пользуются антибиотиком Хи фарм ацевтически приемлемым неорганическим или органическим основанием. К числу солей антибиотика Хотносятся соли с щелочиыми металлами, такие, как натриевая и ка 30 лиевая соли, соли со щелочноземельными металлами, такие как кальциевая соль.Эти соли получают при использовании водных растворов гидратов окиси щелочных и щелочноземельных металлов. Так, растворы35 антибиотика Хв водном растворе гидра.та окиси натрия, водном растворе гидрата окиси калия или гидрата окиси кальция образуют натриевую, калиевую или кальциевую соль. Эти соли употребляют для тех же био 40 логических целей, что и антибиотик. В связи стем, что растворы солей антибиотика Х, в особенности натриевой соли, обладают значительно большей стабильностью, чем растворы антибиотика в несолевой форме, пользуют 45 ся слабо щелочными буферными растворамидля очистки путем противоточного распределения и смесями растворителей с аммиаком при хроматографии на тонком слое, что приводит и снижению концентрации антибиотика 50 в растворе. Антибиотик содержит следующие элементы10 15 го г 5 30 40 45 50 55 60 65 15Антибиотик Храстворим в спиртах, например, в метаноле, этаноле, 1- и 2-пропаноле, и в трет-бутиловом спирте; в несмешивающихся с водой сложных эфирах, например, в этилацетате, амилацетате, бутилацетате, алифатических сложных эфирах; растворим в хлороформе. Антибиотик нерастворим в воде. Натриевая соль антибиотика Храстворима в воде, низших спиртах, таких как метанол, этанол, изопропанол и бутанол, и в М,К-диметилформамиде; слабо растворима в амиловом спирте, тетрагидрофуране и диоксане; очень слабо растворима в ацетоне, амилацетате, бутилацетате и этилацетате и нерастворима в бензоле, хлороформе и диэтиловом эфире,Ниже приведены различные физические свойства антибиотика Х:а 1 о = - 82,8 (с=0,52 этанол)ИК-спектр антибиотика Х(таблетки с бромистым калием), см-, 3400 (широкая);1660 (сильная); 1580 (широкая); 1580, 1380, 1250, 1100, 1040 и 995.ИК-спектр натриевой соли антибиотика Х(таблетки с бромистым калием), см- и 3400 (широкая); 1645, 1570, 1500, 1388, 1105 и 1000.Для УФ-спектра Лмамс ммк334 (Е 1 см=403, 0,1 н. НС 1);233 (Е у см = 610, 0,1 н. НС 1);206 (Е 1 см =500, 0,1 н, НС 1);327 (Е 1 см =423, буферный раствор изопропанол/К 2 НРО 4 с рН 7;231 (Есм =660, буферный раствор изопропанол/К,НР 04 с рН 7;327 (Егсм=416; 0,1 н. КОН;231 (Е 1 см =64, 0,1 н. КОН),ЯМР-спектр антибиотика Х(СНС 1 з, и тетраметилсилана - внутренний стандарт), б: 0,92; 1,66 и 2,03, 3,16 и 3,43 и в области сигналов характерной для олефинов.Антибиотик Хобладает широким спектром микробицидной активности. Спектр определен методом с чашкой и пластиной, с диффузией в среде агар-агара. Антибиотик Химеет низкую оральную и парентеральную токсичность, значительную активность против стрептококков при систематическом (оральном) и местном (субкутанном) введении, активность против пневмококков и кишечного кокцидиоза.Антибиотик Хупотребляется в качестве активного ингредиента в новых и ценных препаратах, которые при оральной даче домашней птице приводят к усиленному росту и повышенной эффективности питания животных. Введение этих препаратов осуществляют путем примешивания их к сбалансированным в отношении питательности кормам для домашней птицы. Активный ингредиент - антибиотик Хвводят в концентрированную, предвари:ельно полученную смесь, которая в дальнейшем может быть добавлена к корму16 4,000 4,000 28,000 0,025 К этому рациону прибавляют антибиотикХв количестве 50 мг антибиотика на 1 кг рациона.Стимулирующие рост эффекты антибиотикаХопределяют путем непринудительного кормления домашней птицы рационом с добавкой антибиотика Х. Для испытаний берут 1-дневных цыплят породы скрещенных бройлеров.При опытах пользуются группами, состоящими из 5 цыплят мужского пола и 5 цыплят женского пола, Этим группам дают свободный доступ к корму, Случайное распределение дублеров позволяет выравнять влияние таких факторов, как обогрев, свет и положение, Птиц наблюдают в течение двухнедельного периода времени, и вес цыплят измеряют через 14 дней. Регистрируют также колидля домашней птицы. При приготовлении твердой предварительно изготовленной смеси, содержащей антибиотик Х, любой подходящий носитель или инертный наполнитель может вести себя как инертный ингредиент при условии, что он является инертным по отношению к активному антибиотику, используемому в качестве добавки, и нетоксичен для домашней птицы, получающей этот препарат. Такому требованию удовлетворяют многочислепные твердые материалы, источники минеральных продуктов, такие как измельченная устричная скорлупа, съедобные злаковые растения, материалы растительного, морского или животного происхождения, например, которые содержатся в кормах животного происхождения; кукурузная мука, мука, получаемая из цитрусовых растений, соевая мука, рыбья мука, отходы мяса, высушенные остатки после сбраживания и т. п.Количество антибиотика Х, требующееся для достижения желательного стимулирования скорости роста и повышения эффективности кормления, варьируют на 100 вес, ч. корма примерно 0,0001 - 0,01 вес. ч. антибиотика.П р и м е р 1. Определение стимулирующего рост эффекта антибиотика Х.Основной рацион готовят из следующих ингредиентов, вес.%;Измельченное желтое зернокукурузы 56,075Мясо и костная мука (50%белков)Рыбья мука (60% белков)Соевая мука (50% белков)Дегидратированная мука измоцерны 1,000Животный мир 4,000 Метионин 0,200Минеральный фосфат 0,250 Карбонат кальция 1,200 йодированная соль 0,250 Добавка витаминов 1,000 Добавка следовых минеральных компонентов404186 способом, за исключением того, что контролЬ- ным цыплятам дают свободный доступ к корму, содержавшему те же питательные ингредиенты, но не содержавшему добавки анти биотика Х. чество потреблявшегося корма и вычисляют эффективность кормления по сравнению с контрольными экземплярами.Одновременно проводят контрольные опыты, при которых пользовались описанным выше Средний конечный вес в средн начальный вес испытательной группыПривес, о;Средний конечный вес - средний начальный вес контрольной группыК 100 В табл. 10 приведены результаты этих опытов. Т аблица 10 Улучшение эффективности кормления, % Эффективность кормления, % Привес за 2 недели) Добавка антибиотика+12 100 120 50 ф) Среднее значение для 40 цыплят,цыплятам дают корм с добавкой, содержав шей активный ингредиент в количестве 5, 10,25, 50 и 100 мг на 1 кг рациона. Эти опыты повторяют для лучшего подтверждения результатов. При контрольных опытах четыре группы по 10 цыплят питаются основным ра ционом, лишенным добавки антибиотика. Привсех опытах скорость роста за двухнедельный период времени сравнивают с ростом контрольной группы, Регистрируют также потребление корма и улучшение эффективности пи тания по савнению с контрольной группой.В табл. 11 приведены результаты опытов,Таблица 11 Эффективность питанияПроцент улучшения эффективности питанияПредмет изобретения в частности домашней птицы, она содержит60 антибиотик Хили его физологически акКормовая добавка, о т л и ч а ю щ а я с я тивные соли.тем, что, с целью ускорения роста животных,Из приведенной таблицы видно, что цыплята, питавшиеся с добавкой 50 мг антибиотика Хна 1 кг корма дают усиленный рост по сравнению с группой контрольных цыплят. В то же время, как показывает 10%-ное улучшение эффективности питания, те же птицы извлекают больше пользы из получаемого корма,П р и м е р 2. Опыт, описанный в примере 1, включая контрольный опыт, повторяют несколько раз с использованием того же основного рациона. При этих опытах уровень антибиотика Хварьируют. Испытательным КонтрольАнтибиотик Х КонтрольАнтибиотик Х КонтрольАнтибиотик Х КонтрольАнтибиотик Х КонтрольАнтибиотик Х КонтрольАнтибиотик Х48 24 30 18 30 18 48 18 48 18 48 18 149 175 152 173 146 180 149 183 149 185 149 182 100 117 100 114 100 123 100 123 100 124 100 122 1,54 1,37 1,47 1,38 1,59 1,37 1,51 1,39 154 1,41 1,54 1,33