Способ получения микроклубней картофеля

(46) (7 1) сту.тут кар Ро ЗВОДСт печсдгтву М. Г,1 гус(;н и вски тоф(53 Д.П Бойко доровлЕНИЕ ен ого кар. Г(еп 1 зс 1 ег г. п .го(5 О) ТГ 30 фИЛ;Ец,г.14 С(стаПЕнха В,3. ейрук Т.Б., Дсне(; Н т. Оз и ускорснге р; з 1 о:;ние сем тофГля1 10(3То.аг Р., Еетга(3 а Р. Кс 3 (еОсборн .Н. поост 0(3 апг (3 в рота(отоб в. С сиаг ",о. 198 (54) СГ(".,С Б ПС.1 Ч 4 Е-Иу ГЛНЕ 4 КДРТОСОЕ/(Я Изобретение относится к сельсохозяйствснной б Отехнолог, и. а ик 1 енно к способаьи культиврова 1 ия изслированных тканей и Оргаисв рагтени 11 и 110:,ет быть испо;,ьзоа-.но п(и вьн .:пении раГ от по селекции и сеуеноводст" у сортов картофеля.Из. естен сп:соб г: . у 1 еия ь 1 рок бней для поддер, ани. коллекции сортов, вклОчзю.Ий ч 0111. ван 1. Раст;ний и чГО и г 1. гаДКУ еР(3 н,.-, нз зг;.1 изовлн, у о и и т; т (т л .у ю (. с , у, сс ( усв у(011, ч 0 0 б г д. ЗОВ 1110 К "У,)11.,дост 31 кс 3с . спссоба 1 яе 1 СЯ бОл(О завис 11 Ос(ь пезчльт ".1 внугти пОуччпя 111 ч,.,1(у " ч 1 е с(31ы,( ,обе 1 о(:е(1, Ру,1 . Р,уз( 1 1,: 100",1,- 3 0 З 1,1 1 3 Т (3; С Н" (1 Н Е ( 03 3 3 У КТ(57) Изобретение относится к сгльскохозяй ствснной б 10 тех(:Ологии, а ик(еНо к спосо а 14 к у Г ь т и в 11 р О а а н и я и 3 0 л и р 0 в а 111 ы х тканей и органоь растений, (. 1 Оук бь 1 ь ИГГОпьЗОВаНО 13 И ВЫПОПНЕ 11;И рабпт ПО С- Ге;ции и сг 1 енг 3 в(удствч сорт 013 каГ 3 тофел 1 Цел( изобретеня - упрооГО 1 ие способа и улу(шение ка(яства микрокл,бней. Сгссоб состоит в то(1, что исходн 1,(й 1 г 1 териа(1 в виде сиг 1 х нтов стебля с почсой кул(тиируют в к у и ь т и в а ц и О н г ы х сосуда х и а ух и д к 0 1г 1 и тательной греде, культивируют на поверхности гигрофильного вкладыоа на пи 3 атель 10,( сргде при освещ(.нности ,0- 8,0 тыс. лк, а через 3-4 недеги питательнуо среду ко;,Ректи. от,увели исая количество саха аозь 1, Цитокининов и 11,.-1 аГатд Т упосле его сосудь; по 11 е(3(ею г телно(, 10 2-3 НЕДЕЛИ дл,". ОГ.РОЗОВОНгя 11 И рОЛЯС клубнсй, Нередко наблюдаются т-кие не,к(- ЛатЕЛЬНЫС Г 3 ИЗНаКИ. КаК ОТСУГС(гИЕ УКОРЕ- нения и усыхние растения, начин," оиееся с вс рху О к и. СТ 1 ечен ны е н едостатки су щественно сниукэют надев,ность и технологичность способа и об, г;Оьлены тек:и обстоятегьстгау(и по как для нзращивл(ч 1 я вегетативной (иассы, так и дгя клубнеобрааования используется одна и та .ке пи;отельная срс/(,1, не обес ечивающая в дос гдтоной коре п 01 Рсб ности расти(ел 1:Ого обькта на г.тздии 1 арз(3 .а 1(ия ве о гацигн 10 й к 1 аг.сы (11:13 ыточное: к(п и- ЧЕСКОЕ 11 агуЕ 1 ИС, ИЗЛИШНЕ ГЫГОКОЕ СОД:Р,3 НЕ ГХ 10:311ЦИТСКИ 11 И 10( И 13 С 1 ДИИ к(1 (че(3 бгь 1 з 01,л, ия (недос(лт;ч:ор ос(ло; и 17064.) О/.;лс):.ие с;,., Сс,".;. -;)и," Ге) дроз)3; ц 1- 10д"Тп)31 н 3 Еде, а т "хпрод.лжитг )ьеОс 13 сееЕо;ООте 1 ССОЕО ПгРГ)".3,Изьестен с;):. получеия микроклубнсй е к льтур" п 3)ГО. Вкл)о дю)цииЕеренкоел 3;с и ь)сд,") растений е кслбь с 15питательной среде.,. блдгоприятой -,.а наращивания де,гати ной 31 дсс., куль)иеирогание указанных колб на специальныхшей 1 срдх, Обеспе )иеаюих орбитальноекачание питатсг ь)1:и ср.ды и освещений 20светом с, нтеес еностью 1,0 тыс. Лк с последую(ей индукцией клубнеобрдзоеанияпутем корректироедния состава питдтелье:ой среды, здкльоающегося в уееличениисодсожд 3)я цветок Нинов ДО 5,0-5,5 мг/л, 25ссдсрм,аниа сдхдрг)зь: до 80000 мг/л и введении хгорхолНхе)ордд в дозе 0.5 г/л.Недостатком указанного способа является необходимость использования дорогостоящего оборудования. Обесе)ечиеающсго 30орбитальный режим качания, Существеннь м недостатком способа является низкоекачество клубно.1. проявляю:цееся в том, чтоони имеют различные и, в подавляющембольшинстве, недос дточные размеры. Оазросш)еся чечееички. Особо следует подчеркнуть в качестве недоста 3 кд способа тсобстоятельстю. что о процессе вырациеания микроклубнеЕ Используются недопустимо высокие дозы синтетических 40цитокининов (кинтин + бенэиламинопурин) - 5.0-5,5 м /л), тогда, как известно, чтопревышение содержания в питательнойсреде синтетических цитокининов выше 1,1мг/л ейэывает статист 1;вски достоверное 45повышение частоты хромосомньх аберраций и, следоеательг)о ведет к необратимойпотере генетическо. Идентичности сортосбраэца.Цель изобретения - упрощение способа 50и улучщение ка Еестед микроклубней,ПсстдЕЧЕННаЯ ЦСЛЬ ДОСЕИГаЕгтСЯ тЕМ, ЧтОисходный материал ввиде сегме 1)ое стебляс почкой (черенков) - рас. )тельньй объект- альтисируют 3-4 нсд. в культивациое 1 е)ых 55сосуДах 3 а )к)1 дкой и" тдел Ной среде Обеспечиед)ощс 3 благоп)з)атные.условия дляукоренения рзститсл; ных обьектов и нарастания вегетационной массы, д для предотвращения гибели чер.нкое от затопления их22,3 083 к у Л ), ТС .1;" )( о Тд г о " с 1 лг) С г1) О31.оГО ;Лады 3 д, ЕЫ)О) Н ОО. Нд)Р .1 С), ИЗГ, 3 У,1РИ "Г ) ИЛИ СС Т( С ГдГ ЫХ;30 локг)н, филь) )Ое" льой или хроматг граг)и Осе.о 1 бумаи. Р:.,сти)ельныс объеккуль 3: ируот при ТСЕ;г)(зратурс 22.2" С иинто)Г 3)в)30 с(1 ОГе)сЕ)ЕО)3)5 в предел.;, 5,08,0 тыс. лк, причем пита гельая срсда);лючает сдхзрозу в 10000-3 ОООО мг/л, а те)ккерс гул;,торы рос) а - кинстин 0.01- 0,1 мг/л,фе)улоу)о кислоту 0,01- 0,1 мг/л, идолилуксусную кислоту О,.1- 3,0 мг/л,Г 10 сле рдзе 3 ития достаточного .Оличсства еееета 1 иеной массы, т. е. через 3-4 нсд.культие 3 ирОедния Г)осле черееОЕ)дния, е)итдтельну)о среду кс рректируот псрс:теГ 1.введен"я концентрироис)ных добавок таким ободзом, чтобы довести соде(е и"сахарозы в питдтел Е;ой сред" до 60000100000 Е)Г/л, ц)токининое 3.и)етии.:и бе):илами кпур 3)н) до 0,)-0,5 мг/л, препарата ТУРдо 200-500 мг/л и дденинд дг) 5,0-40,0 мг/л,С целью усиления 3)ндукции клубсобр "зовдния культиеационые сосуды с материалом г)о.;ещдют в темноту или нд слабыйрассеянный свет - (0,1-0,5 тьс, л)оке) нд 2-3нед., после чего в случае собходимости ООразовавшизся микроклубни доращие)аот иозеленяют при указанных ранее условиях,Питательная среда для укорене)я черенков и наращивания вегетационой массы вкл)очает следующие ко поненты, ме/л:Аме)онии азотнокислый 1650Кальций хлористый Двухводны 1 440Калий фосфорокислы)1Однозд(1 ец:н 3 ый 170Борная .Ислота 6,2Марганец сернокислыйчетырехвод.ыйКдлий 10 дистыйНатрий молибденовокислый.дех Одныи 0,25Мезо-инозит 100/ь1 СН. 1 Г1,;.(Ь.(Х ГОСПЕЛ)с;,"й а (ИКгЬю(г" г Гг; ., ы" С СнгэяОТ а В у . аН( ОН 1 СНО 1 ЛХ +гь С(Т 1 ВНО)Дг РУЕТ УКОРЕ" ЕН"Е Ч Р" НКОстью, у;ке (:гз 3 4 сут кульивирсв и яМатСР 1 г ЭЛД На СЧЕТУ ОНа ПОЛНО" тЬЮ С)аэгРУШДется и не оказывает отр.атель(ого влиаиН (;а р".(тИЕ Иг, )УЦИРП(,Д(1;-.Х КЕРНЕй. гОТЛИцев Ь/) П)СТ 1 я Г)ОI)ггзв СТасЛ ЬНО г НЕГПстном способе Следует по( .нуть, чтор;(зрушение ,долилукс сне)й .Ислоть псСЛЕ -,ЫПгй 1(. И г.; ВОЗЛОК 1 Т) (Т(Х ФУНКГ(И г .индукция у ,рг; еИя) огз спзчивает возмокность до.гикения бал;Са у):сиов 1;циток 1;иг., благоприа с(вс 1 его 1;ндклубнссбГ )зг ания наезо(,ас(с,г, уровне экзогенных и. ток 1 инов 0.3О 5 мг/л). в Отлиие Г т пссобэ, избранНОГО В КаЧЕСтВС. ПРОтетИПа гО КОТОРО(Утд(:Г)й бдггганс дсстигается толь(;О пр;К О и Ц Е и; , д 1 и 1, Э к 3 0 Г Е н и ь( г 1, 1. т О к 11 н 1 н 0 а на уров.е 5.0-5,5 1,;г/иФсрулс(;.дя к,:слота в указанных кснцентрдцих 1.(ст,пдет уэк синергист дукс(-Н О В ( И Н Д 1),г И Л Г 1; С Уг С Н а Я К 1 С Л О Т а ) ИблаГОГрияТСТа,гвт рдЗЕИТИГ . (рП(1. нцх корнейВозмо ность осуш:степа ич корректирОВКИ СОС аеа Пг.атЕЛЬ(Г) Срад: Е Прпц се культивированич. дГ)стигде(.чя ПОСРЕДСТВОМ ИСПЕЛЬЗОааНИЧ Г(;. РО ИЛШ(ч;вклд-(ша, гоэво;яет обеспецить более инг г.тенс ануа индукцию клубеобразов(д(;(я,ПО Срдапег,Ю СО СПОСОбО:. ИэбрдНЬ .: СКаЧЕСТВЕДнаЛОГа. ГУТЕКуВЕЛ; (ЕНИа ОСМДТИЧЕСЛОГО Дй;",ЕН(.Я ПИта;ЕЛЬНЕй СРЕДЬ, ПО:-Ышения концент;дц сахдрозы, а тд",;еустранить сортовые р;зл,(ч по цувстельности к индукци: Клубнео)рдзоваИя благодаря в;(ед. 1 о препарата ТуР,П р И 1 г Е ) 1. Оиредвл( , ОП(1;,аЛЬН)1ЧС(ЕН;ПВ И Нг( З(1 И З)на; ГЕ; ц;О 1( Ой 1 Г)еДг- 1 Га: 1,(1 З); .( "И 1,.(, Ог(ЕПР;(.".:.аинич 1.)с .ес")" (.епгас О де: (и а ч .4",е 1 с,".1 л,: .р,((е с" и,гг,: 1,.г,Л 11 С ЛД.:н 1)О, (с и,: и (. .г 1, 1 (1(р.;)и с11 и с Ог,";бл5 П р и 1 г е р14 зучгзли 1-),ежностьг.,ЕтОдй. ОППЕдЕЛяЕ ",уЮ Ках ОтнПШ ) ( Е ЧИСЛагойстсн)(1, ОбпазО)двшгх клг(б 1(и г ОГьцгч 1.учислу и "ходи ь(х зксгла(т(топ. Лы (УйЛеннуюв про(,антэкс (табл. 1).20 Г 5 кдцсстве первого варианд ои,тд и,- польз; в. Ли спосо,), избрзнныи в кпчгствеЗггчло , Бто)Ого спосоо, изб(анны в кэчестге прототипа, 3 тре: им г(;1)и 1)(Том спукил пре,Лагае иый сг.особ.25 П-Лу (ЕННЫЕ даГГНЫГ. СеидвтЕПЬСгГ(;уЮт Отом, (то гре,",лаемыи способ обесг(ечв; етвысокий пыход растений. бр;)зоаг)вц)их1 ИКОС,П, Г НИ, И ЭОт ПОКГ)ЗДТЕЛЬ )гЕ.(Ь 1 Е З 1)- ВИСИТ СТ СГ)рТОВЫ ОСГ бг(111 ОСТг )гГТ;ТЕ/(Ь 30 нОге дбьг.,тд.П р и к е р 3. И:1, (дли пр-Рги и РьНОСть г(ЕГ;иедд. нЕОбхвдил;(;(О дпч г; ьг,;: рав а н и я ь 1 и к и О к п у б е , к д к е д и г0 и 3вак" .и) . г пг)кс(заг)лей В(Ия (,.х на, хо 35 нок.(1; о:ть и тсх) оло ицнос).;пособд. Бардт( г э(: в по(е)Бз ддг".,х таг;л ) в дн(;. цтд предЛдГ;Е.)Ь;й СПОСОб СГСЛНО СГЛИЧаЕтсяОт из дестных бол.е ко(Отки( гЛиодом.40 неогходи(ым для фор 1 ировд(гя микроклуб ей.П р и м е р 4. Определяли г)птилдгьн)(оитесиг;носгь освеьце)ия дл" нйрз(ци:дНИЯ МЭ(гп(1 ДГ(ЬНОЙ ВЕГЕтатИВНОй (ДССЫ,45 (1 з таб 1. 4 видо, что максимал ное развитие рдстений моно достичь при ог)еспечен и интенИв(Ост. ослеГцения на уровне5 8 ТЫС. ЛК, ЕОЛг-.о НИ дг( г)СНЕ(цЕННОСГЬ )(Еобеспечигг 1(ет мз,:симального рдззгпия ве 50 гетационь ой массы, а следе г(дтг (л( о, не поэво "лет 1 олучдть;,осОто ,1 о .рупнь хМи 1 рОклубнсй,П р и м е р, Ог 1 е,С(ли Оп(имдпР(ь(йСОСТ ЗВ ПИГЛТЕЛ 11.ОЙ С.):,Ы Д;1 Я ИНДУКЦИИГП КЛ,:гц-.д, - , цчр,Нг ( 1 ггь (г г)г 11 41 ГО1 г )зо(1 СГ;.(пл(11 ", и 1 С 1 О (Гет 1 сП ) С ." П д Г 3. 1Ы (И С Г( О С Г) О1, 1),) И .), Т гц О ),Т др чные р с ния кар 1 офеля цзерв. Результаты с пыта оценивали по выходу полноц"нных микрэклуГ 1 ней чр з 50 сутпо"ле процедур 1 индукции клубнеобразования гобл. 5).Следовательно, с целью выполноничпроцедуры индукции клубнсобразованиянеобходи:.о скоррек ир:,вать состав питательной среды таким образом, чтобы довести соде,;ание сагрозы,;о 60000-1000 Г)0 10мг/л, цитокининпв. наприар кинетинэ до0,3-0,5 мг/л, адгнина до 5-40 гн/л; препарата ТУР до 200-50 3 мг/л,П р и м е р б, Изучали роль гигрофильного вкл-дь.ша и жидкой питательной среды 15на эффективность осуществления способа,Опытный вариант выполняли в соответствие с предлагаемым способом, Контрольный ваоиант отличался от опытного тег., чтовместо гигрофильного вкладыша и жидкой 20питательной среды для наращивания массыиспользовали агаризованную питательнуюсреду. В качестве объекта исследования использовали растения картофеля сорта Гатчинский. 25В опытном варианте образовались более крупные клубни, причем после инициа.ции клубиеобразования в этом варианте. вотличие от контрольного, все растения сохраняли жизнеспособность. 30П р и м е р 7. Изучали пригодностьиикроклубней, полученных чо предлагаемому способу,для идентификации сортообраэцов по изоэлектрофоретическим спектрамбелков. Изозлектрофоре 1 ические о 1 ектрь 1 35белков, выделенных из микроклубней, выращенных по предлагаел.аму способу, отличаются ярко выоаженной дискретностьюбелковых полос. Следовательно, получечиеклубней по предлагаемому способу полностью удовлетворяет требованиям методаидентификации сортообразцов по изоэлектрофоретическим спектрам тотальных белков,Использование гигрофильного вкладыша, таким образом, предотвращает гибельрастительного материала от затопления иобеспечивает возможность корректировки сов гавэ пит гельной среды н процессе куль тивирования. Ьлагодаря э 1 ому достигается более интенсивная индукция клуЬеобразования, улучшав гся накопление лссимиляционных продуктов, определяющее размер и качество микроклубной. Устранение потребности в дефицитном агаре, необходимом для получения клубней по способу избранному в качестве аналога, а также в дефицитном импортном оборудовании для "рбитального качания шейкерной культуры (по способу, избранному в качестве прототип;, позволяет достичь высокого зкономического эффекта.". р и м е р 8, Определяли затраты мат риальных ресурсов на получение микроклубней с целью использования последних для идентификации генотипс о, Варианть; как в примерах 2-3. Формула изобретения Способ получения микрокл бней,кар 1 офеля, включающий эксплантацию растительного материала на модифици.диванную питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение и наращивание вегетативной массы, перенос на питательную среду для клубньобразования и выращивание микроклубней, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что. с целью упрощения способа и улучшения качества микроклубней, укоренение и наращивание вегетативной массы проводят в течение 3-4 недель на поверхности гигроскопичного вкладыша при интенсивности освещения 5,0-8,0 лк с добавлением в питательную среду 10000-30000 мг/л сгхарозы, 0,01-0,1 мг/л кинетина, 0.01-0.1 мг/л феруловой кислоты. 0,5-3,0 мг/л индолилуксусной кислогы и выращивание микроклубней осуществляют ча питательной среде в присут."твии 60000-100000 мг/л сахарозы, 0,3 - 0,5 мг/л экзоенных цитокининов, 200-500 мг/л хлорхолинхлорида. при этом культивационные сосуды помещают на 2-3 недели в темноту .;ли на слабый рассеянный свет и образовавшиеся микроклубни доращивают и озеленяют при прежних условиях освещения.10 1706480 Тдблица 1 ор Кше оза 0,00 блица 2 орт киий ееск модедое- ский 65 6 24,Табло ца Вариант Кон 1,ецзация,аоба 1 5000 2 10000 3 20000 30000000 62,8100,091,953,5;аз 212 В Н И 11 ГЧ , 1 Го," удоткрытиям при ГКНТ СС