Способ регенерации растений люцерны in viтrо

(56) 5 апг)егв . ет а: Лглег богп, Вогогу,1975, ч. 62, Б. 8, р. РэО 855,Мезенцев Л,Б. Уетодичес-:1(е указанияПО РОГЕ ЕРЭВ 1 л И РЭЗМЧО:КЕ 111(О ЛЮЦЕРНЬ Сиспользэ"а(иел кугптд . тки, клеток ипрогогла(:тэв. - У,: БГСР-,И, с 1(80, с. 6-12.(57) Изобретене стнсс:; тся к сельско (у хозяЙстчу, сслекции. се 1:сакэозяйственнойбиОтехночог(и и ллэ:Фет бьть испэльзэвэнов работах пс глтэпатолс., . ".Орл эге (еэулюцер(11. йель изэбре.еня - увел.",чениевыхода зл:бр аида-. и растений-реСнера 1; -тов при ускэ;еии их;Эз(1 оС 1я. Способрегеерацн растен 1 Й люцерны (и ч(т(с преИзоб этение ОтьОс(лтсч к сельскому хозяйств), селе:ции, сельскохозяйстве(НОЙ биотехнологии и может бь ть и:пользсвэно в селекции и се(ле(оводстве.работах пе фитопаталоги 1 и лло рфэге 1 езу, асте 1111 люцерныИЗВЕСТЕН Способ рс Е Е:.,(ИИ ЭЭСтЕН;лй люц( рнм 11 ч( э из 1 1 вкусоО 1 ).5 Эа" (в( хся из неера плх -.э "од:. Гве 1 пэ кэ)срому и 3 О л(1 р О е з 1 н ч;, ".д 111.1 г 1 , э 10 т н а и итател(:ну(э среду Г. .1 д 1.-а,(, пол,цс,.(1 я КЭЛЛУСС Р, С.:Л(ОТ СЛЕД"Э ГО, л 1 ОЧЛЬ.(л)5 А 01-/00, С 25/(24 дусматриаает отбор магеринских растений, изолирование их частей, например листьев, стерилизацию поверхности, прол(ь(вк/ сте- РИЛ(,ОИ ВОДОЙ, РаЗРЕЗ.НИЕ На ЛпсточКИ И кусоч.и, частичное поврекденле поверхности, пэсядгсу на каллусогенную питательную среду, инкубирование до получения каллуса, деление его на кусочки и пересадку на органическу(о среду для получения амбриоидоа, пересаду их на регенерэциэннуо, безго л;эна .- Гук) среду, разбавлен;ую вэ- дОЙ вдвое, пересадку расее(Н 1: яеГенерантов в почву и их акл 1 лат(1 заци(о, 11 ри атолл в качестве лат:рлСких (спэль.у эт растения-регене)Энты. в органи.(ескуэ среру добэвляОт индо сии(чкс Снуа кислоту и кинеэин в ко(центрац( и 0,1-0,5 л 1,л лаждэ- ГО И ГлицН В КОН.зЕНТ 1;ац(н 5 15 ль /Л,П;л(Сд ПС(ЭоадО 11 ЗМбрноидо" НЭ рЕГЕНЕ(1 эци:э;уО среду их к.,." ПивуОт 11 те 1 еи:лс 2-4 днеЙ и . 10-1,( на св.ту для лучы;Го отделени а(4 Г риоидов др. от друга. 2 табл. ихло , но, сиуксуц.нуо мМ, кинетин 2 л 1 и, а- и сл от у (1- У ):) 10 (л 4, р Н е 4 нед, культивировас переносят нэ среду ( й горлло 1;ал 1,11 х;. ба: хевогэ экст(ээк)а. 1 еК а Л Л У С а Х 11 0В (1 Я гэ Т С Я1 Е;(ОН 1-Г(П К 1 1 Р: Изгорл Оал(.ну о седу .ные растения.11 еОстетг"1 "11 осс 1(тэ аллес" то, что веге(:еВГ(,я ресте( ий зд с т о Г(зь( раз- ЕИТИЙ ЛП 1(О Н ЬУ1 О(1(ГМЛТПОИ(С КИХ) р,"с - ,; н,; а ;,х;.1;и,;ий е; ;,1(;1;1(и е(,(ход Г(ОГЕК, В(ф(;РИОИ,"О(1; ДЛИТЕдЬГ(ЫЙ Г(ВРИО Ц формирс( а:;, Й по,ек, эмг(;,;орс(зН; ибо., е бт:1;к(11 ( к зя;яеному леляе 1 сь ( п особ регсс(.рац(и р:,стений л(оцс(1- ны 1 п ч(Гго. Вкпз.ающий отбор ценнь(х матг,;:н, и, растс.111 Й, изо(:ровацкие их частей (л ст Сев), стерилизацию поверхости листового з;спл:;.Пата е 11,1 т водном растворе ди и .трехкратную про:.Гыеку е стерильной,Г 1, стилпировэннОЙ воде, причем тройчаты . листья л о(,ерчы разделяют на листочки и делают ча каждо(л из них ряд надрезов по Всей пло(цдди листовой плдстичы (вдоль жило(.) затем помещают на агаризованую среду для кэплусогенеэа.Модифицированная питательная среда Гд(4 бортэ ,Г,1 Е) с фитогормондми 2,4-Д 8 мг/л, кинетином 8 мг/л, а-НУК 0,5 мг/л с.доведением рн среды до 5.8 - 6,0 и концентрацией сахэроз (3%, с уеел 1(ченным вдвое содержа нем хеллата жеп" зд и аммонийной формой азота (ЧН;110;) ичкубация 3-4 1(ед, при непрерывном освещен( и люминесцентными лд(1 па(л,1 (осве(ценность 0,5-4.0 тыс.лк при 26 1 С).В слу Гае появления на листочках бактериальной или грибковой ин фекции их удаляют, вирусную инфекцию устраняют воздействием фитогормонов, Через 2-3 нед, развивш(;-Ся каллусы делят на 3-5 ч. и переосят на органогеннуо питзтельу(О среду, нс без н 11 тСата аммония, в которой гормоны за( енены на 6-БАЛ из расчета 0,2 мг/л и культи=.;"/ют для получения эмбг,исидов при тех же условиях е еч ние 2-4 над.(длина фотопер (одд сокраетена до 16 ч в сутки). Появиьшиеся на калиусах через 2-3 нед. единичные печки (эмбриоиды) переносят на агариэованную регенерационую питательную среду МЬ, разбавленную водой вдвое, без гармонов. По мр развития растений-регенерднтов нэ этой средеи появления у них 2-3 тро;чдт(, х листьев и корей ик переса:кивают в почву. акклмдтизиру(от и выращивает е сбы (н х усми(1 х.Недос аткжи известного способа является:низкий Г(1 еход (5 шт 1(э сиН кэллус) эмбр(1 оидов и зе."е ыл пасте 1(й при и(тпольэовании.в оргдногел;(о(Г 1 срсде 6-БАП в качестве стГ(Г(уГ(аторэ оо( ано( анезд;длиГ(ьнлл С;(ОК 12 15 дн,) ФОрмирО.вания Змб иоидое пачокт.(ель изобрсения у" зли(е,(ис выходаЗмб 1 1(одев и р:стсИГреге 1 ерэ 1(тов при 10 20 25 30 35 40 45 50 55 УСКОРЕГ(ИИ ИХ РВЗМОжЕНИЙ С Иг Г(ОЙГЗОВЭНИ- ем идалилу",сусньй кислоты (И/К) и кинетина, е к;,ЙГ ст":а гор(ло(1;(ль 1, х доб еок, гпицинд при ускороии разы(оженил за сче ю м(Гс 11 ь(1(Г(ив с,к(1 )ООГиирс е,а 11,змб. РИОИДО"ПостаеГ(еная цель достигдсСЙ тем, что способ р".Гонора(ии растен(1 й л(ОЦернь( Гп чго, включающий Отбор материнских растений, изолирог,ание их частей. например Л,1 СТЬЕЕ, СТЕ(РИЛИЗДЦИГО ПОЕОРХИС .,1, ПРО мывку стерит(ьнс й водой, разрезаие на источки и кусочки, частичное г(оеро.:.д.(ие (поранение) Г(оеерхности, посадку на каллусогенную питател(ную среду, инкубирсвание до получения каллуса, деле;ие его нэ кусочки и пересадку на органогенную среду д",", получения эмбриоидое, пересэд(:у их на агаризоеанную, регснерэцисну(О, безгормональную среду, разбавление водой вдвое, пересадку растений-регенерантов В почву, их акклиматизацию, причем в;:ачестве материнских растений используют растения-рсгенерэнты, е органогенную среду добавляют ИУК и кинетин в концентрациях 0,1-0 5 мг/л каждого и гпицин в концентрациях 5-15 мг/л. а перед пересадкой эмбриоидов на регенерационную среду их культиеиру(от е течение 2-4 дн. При 10-15 О С на свету.для лучшего отделеия эмбриоидов друг от друга,Способ Осуществляют следующим образом.Отбирают материнские растения с ценными пр(,здхдк(и. Изолируют их части, например листочки, стерилизуют, нэример, в 5-10% водно(л растворе хлорамина "В", после трехкратной промь(вки в стерильной дистиллированной воде. Тройнье листья делят на отдельные листочки и из них вырезают кусочки, делают на каждом иэ них ряд частичных повреждений (поранений) по Всей поверхности листового кусочка, помещают на агариэованную каллусогенную питательную среду, например с составом по прототипу, Материал инкубируют до получения каллусэ, например 3-4 недпри непр: рыеном освещении люминесцентными лампами (0.5-4,0 тыс лк) при 26.1 С. Развившиеся из листочков-эксплантатов. каллусы делят на 3-5 ч, и переносят на агаризованную питательную оргдногенную среду. т, е. на ту.ке по составу питател. ную среду, что и каллусогенндя, но гормоны заменсны на с-БЛП из расчета 0,2 мг/л и без нитрата аГ,(моия. Культивиоуют в течение 2-4 нед. При тех же условиях и 16-часовом фотопериоде, для получения эмбриоидов. Гоявиешиеся через 2 3 нед. нд кдллусах единичные зелоые и(" ки эмбриоид(.1) и)О С Я Т и с Д Г Г ГД г Э Э а Г, ф у ;1 Т Д Г Ес,П срРд, г 3;"и"-лб- разг)ЯГ и:у,( ,пои едГ эе и без Горго 0еред:,",прОГ,ест ог в соя 1, )РОс,и;т Г,;)РцгРов;нии 2. 3 Т)О;сатЬХ )ИСТ.ЕЕ И КсРНЕЕ 1"г Сг)С);л(Ь Ис Г 1 еи) еЬНГ) а с)с и Вслот ве(и 2 НЕД, П)И 0 ТИМДс НЫХ УСЛОГисХ ВЛа)КИОСТИ Г)З,ха, ДГ)РИ З) )ОД СТЕКЛЯНН МИ СТа КД Д 31 П;Я ЛУЧШЕ 1 ДККЛИ с)ТИЗаЦИИ Г 1)ЕРОСТ КОВ. ОТОГ-:ДНН.Е СРЕДИ НИХ СЕЛЕ)ИОНИО :ечьг(3 Г)дстения-Геге ОГд ты всдчестее ДоОРЫПОВТОР О ВБОДЯ Г В КУЛЬТУРУ, ИЗО- лируютас Ги, напр 1 л(ер лист Очи, стерил зуот, например, в 5-10",4 годном растворе хлора.гндЕ", и после ГрехкрдгНОй ПРГМЬЬКИ В СтЕРИЛЬЧОй с ИСТИЛЛ 1 РОаДН- ной ьсде тройч 3 Ыеэгсья од 3)аз д От на отдепьгые лист.: ки и вырезаот из них кусочки, делают на каждо;1 из них ряд чдстич- НЫХ ПГВГЕжам НИЙ О 1 ЛНЕН "и) Г 0 ЕСР 1 ,оверхност 1 листового кусоч д цомецаот на агаризованную каллусогенную пит тельНУЮ СРЕДУ ПО СОСГсзгУ, ЦР; М 3 Р. ПРОТО)",У. Материал инкубируют до получения ка,:уса, например, 3-4 нед. пр;г непрерьвом освегценигг ломинесцентнь и лампами (0,5 - 4,0 тыс, лк) и температуре 26":1" С. РэзВИВШИЕСЯ ИЗ ЛИСтОКОВ ЗКС )ЛД)ДТОЕ КДЛЛУ- сы через 3-4 нед, делят нд 3 -5 ч, и перенсст г а агаризоедчнуо оргдогенную среду того же сссаед, что и кэллусогенная по прототипу, но горлгоны которо 1, заменены ИЖ 0.1-0,5 мг/л, ки "тимом 0,1-0.5 ,.г/л И ГЛИц;)НО 15 - 15 МГ/Л, Купгт .", 1)ЮТ, Нацр,- мер. е течение е более недели при,слоаиЯх по пРототипУ г 16-чэсо 30( ФэгоггеРсоссе для получения амбр(огдов, появгвшую. ся на кэлл сах массу зеленых почек (эмбриоидое ) церенссчт на 2 - 4 дн. в светл(е гомеьцение с темцсрдтурой 10-15" С с 1 о- Овьм фотопериодсг для лучшего ОтдЕЛЕНИя ЭлгбрИОИдОВОуГОТ дпуГд: ИЗОЛИ- рованные эмбриоиды переос 3 д ЛГГрг - эованнуо регенердционную среду цо составу, наприл(ер, пГ)ототигу. Пересадку ПрОраетКОВ В Поч)у ПрОВОдят Прп фОрЛ(ИрОВа НИИ 2-3 тро)ТЫЛ;,; ) Ьвд и КОр и ЕВОЙ системы, предвдите)ьно выр;ге;ют для акклггмсэтизаци, ндприлгер. е )ечение 2-3 нед. при Оптимальных условиях влджнэсти воздуха пос 1 стеклянны и г.гак;нам.С)огоб илл остргУстс следуоцимипримерам.Для регень;.)ц 1 И рэстен,г л сц рны и ЧИГО В КаЧЕ:тЕЕ Л(ЭГЕРНСКИХ Л,;ТОЬЛ, ДО- ио)ых) Г с ен;и отг,.;ли; .-: я р. е- НЕ)сЭг . Г 1)Л)ЕНГ)Е Е У Л(СЧх П У О, С ЦР( 4;.Рвяиа К;) 1 У Ог РЕСТ ВЕ 1(НИХ (Рдснс)лУГсксэл С 0)3. ,ОУсин 1.с 5, с(гсеВИЧс), С(Е.нс 5,бр,гд;,:1 Садо 31; гу 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 3;К,Гх (Гд 1 блЕ: Гсвр;. . -ОПС П ру(с) сорто 3, а ",д:м г;бр"д ц ног., ро 5:4, 512 4) 1 41 3с 3 л 1 еСф СЕЛ( с,ц.1 И 1 с.) " Зл 1 д В Поол ъя ",д рсэ;ен иях отб 1)л и 1 и сг ",51 хгс)0- г)О С ГР.1(РОЛН;,. 1;,Э,1",ЗТЫС, ИСТЬЯ, г(Х сГе;:ипгзоаали в,:1 - 107С 1 ном,лство)е , лоос" (нд "В". 1:оцеэ Г .ция . ".Ог;лиздторд эгаисит от инфо цио кого ,онд в,- Ра.),исэдел(ьх лгдтеоии(:ких Г)асте г(й. После СГЕРИЛИЗ,ИИ ЛистО КИ ТРЕ:(КРа)5 О ЦРО)гЫВа;И СТЕР".ЛЬ:О)г ДИС,",Лп лцоВДНО, допей, Разрезали нд отдельные лг;сточк Из них еырездпи кусо крдзл(е,: о;15 х 5; м и делали нд;дждом из них ряд пс врежгегй (пораений) 1 всей лисговегг поверхност 1, с 1 х помегцдли нд згдргэсс сннссг, калл 1 СО генную пита ГРГьуО среду по пэототипу, д также дидло 1 иуо еи по анапогу среду Гле,;,;г:.,э с 2,1 -.) 9 .гл,1, к: нс ином 9 мМ, с. Н:)5. 10 л 1 Л с доведением р- среды до 5,Р,0. Материал ичкубировали нд свету (0,5 4,0 тыс. лк) цри 26 1 С. Пер;год образования каллусд зависит от генотип;. до;(орного (лгдтер 15 сого 1, растеия, ис- Гользус; (эй среды. СОГ)тообразцг 1,раснокутскдя 4 с;О(, Рамбсгер, Верн;Сг, Й. 378 формир:е,)лгг калаус на третьеЙ, д Са)р",1 дц",л". 5 о 4 512 ид Гятей неп"ЛР К)сс,тИГи,)оЕдия. Сс,"С р. рОедииь й КЛЛЛУС ГЕЛИ)1 На Ч Д Ст И и П (3 Г) Е С с М(И г) Д Лг Г а а Г Д Г)З О 3 Д Н Н Ь Е оргд гоген;ые среды МГ) 5 и Елейдггза с добделеие 1 гормо;:оа б БАП 0,2 м;/л, дрожм(евого эксгрд.тд 2 г/л, ИУК кинетина 8 ко)цР)Г)э сях 0,1 - 1 л 1 Г/ для пэлучения элГ)ггоидод. Посуедн;ге ;д Го)монд испо,.згд;,ли цо отдельнос; и вместе, В ка- Ч Е С Т В С а Л; и г О К и С Л О Т Н Ог д О б д с К и В ор аногенные пи)атель (.е среды,гспольэоааЛ) Глис(ИН Б КОцсзНТрсЭСи)Х 0 2 М /Л. ВО всех варднтах опьтов ггсцольэоедли вь - борки в количестве не (енее 40 эксп;Г)нта- ТОЕ (ЛСто (О 3. )ссосС, КдЛЛУСОЕ И Т, П.) Р 3 повторностях. Лучшие результаты по выходу эиориоидов и по ускореиио их форм)Гования бьли получены иа питателшой среде УБс добавкам. ИУЕ и ки етина в концеигрдиях 0,1 - 0,5 мг/л каждого и глицинд 5 - 15 мг/л. Такое сочетание, крол"е повышения выхода эмбрио)гдов, сцосооствует быстрому фс рл 51,)О- в;гио зеленых с Г; ук)ур(цос ек, эмбриоидое).11 л форм,гровди, с проход)с по воэ говерхности кдллусно масс с;и имели торцедоьчгдуо форму рдз .го р; змер:, Первье )р",с).И;О,:;а(1 я З:ЛНЫХ ЗО д -тви среде :дблГ)1,лг 1 нд 5-7 дн, культеигоедния, в то время, кдк по ПГотипу - чср э 2 не/. Ге)ОД ОбРдзовсг 5 3 сех;)мГэИОНДол5 10 15 20 25 30 35 40 45 достигается 50 55 на калл-сах от пераог до 1 ос г днего, по ПРОтгтяпу О тафенЕ 3"НЕД а ПО ЭЗЯС лясмол",у посо.у,литса "."его 12- 1 д нсд Испо.;,;.-.:. энн ИУК и хе:нот,на а концснг рац;1 лх снее 0.1 е;г/л е раод 11 ло к сню;ению анхо,.;а эл 1 брио:1, Оа до уро.;нл безго".;:нальной ср;,ь,1;.л, 1), а концентрации б-ллс 0,5 мг/л снижали выбор, до 25 эмбрио.;-оа на 1 калпус и сни:али также обн;1 к.: Г=генрэционную се.особнось.Эл 1 б,.".,иды. по предлоя;еонному способу, имели тор-е;,ове 1 дн,ю фон:1 у с хорошим побегообра;:. аан, ем. Форл 1 ироьания корнсвой с 1 стел 1 ы добивались при дополнительной пе.асад е на безгормональную среду, ДОГавление а среду 5-15 мг/л глицина, совместно с вышсу; эзанными гормональныл 1 е 1 добавками, увеличивает выход змбриоидоа до 40 шт. на халлус (табл, 1) и скорость их сразования. Применение глицина в концентрациях менее 5 мг/л и более 15 мг/л не давало ма 1.симального выхода эмбриоидов, даже его добавление в безгормональную среду не Оказывает влияния на выход и скорость Форл 1 ирования эмбриоидов,Зависимость абсолютного выхода среднего количества змбриоидов люцерны от гормонального состава органогенной среды (шт, на 1 калаус) представлена в табл.1.Использование в качестве добавки гормонов (ИУК и кинетин) отдельно друг от друга ка фоне глицина не способствовало нормальном Формированию эмбриоидов. Добавление ь среду кинетина стимулировало образование побегов, не имеющих корнево 1 системы, Только пр; пересадке их на безгормонал: ую среду они формировали нормальную корчевую систему. Применение отдельно ИУК стимулировало образован 1.е корней, которые. однако. некротизировали через 10-15 дн. культивирования. Использввание в органогенезе 6-БАП, м прототипу, снижало образование эмбриоцдов с 40,0 до 5.4 эмбриоидов на каллус, т. е, в 7 раэ в сравнении с ИУК + кинетиц на фоне глицина. по заявленному способу(табл. 1). Их появление на среде с 6-БАП; ао прототипу. было заметно через 2 нед. культивирования, а рекомендуемые добавки по заявленному способу сокращали перодобразования эмбриоидоо до 5-7 дн., т. е, в 2 раза, Время выхода эмбриоидов на среде с 6-БАП дле ось по прототипу до 3-4 нед. культивирования в зависимости от генотипа гдат;эичского растения. а по заявленному способу сокрзщаш до 12-16 дн., т. е, в 1.Браза к рое, Структуры по прототипуимели сердцевидную форл 1 у. плохо прорастали идавали низкий внод зеленых растении (45-6) от коли естса кс 1 лусое 1, а по злявленнолу способч е 1 дРли болсс рал,;тую торпедоееидн,цо форму г. корон и л форл 1.1 пованисм е 1 О,-гоа и:;орнслой сисгел ы. Вьдхгед зеленых растений-регенсрантоа по заявленному способу г;оставлял 70-90 от количества культивируемых каллусоэПрименение дрожжевого экстракта по аналогу, способствовало форл 1 ироаанию на каллусах по 30-40 эмбриоидоа, они имели торг 1 едовидную форму, хорошо прорастали на безгормональных средах (МБ). Их развитие наблеодэли только на 20-25 дн.ультивироаания на агаризованных органогенных средах. В предлаггемое 1 способе развитие эмбриоидов наблюдали на 5 - 7 дн т. е. а 4 раза быстрее.Эмбриоиды, полученные на предлагаемой органогенной среде МБ. плотно срастались между собой и при пересадке большая часть эмбриоидов траемируетсл. Для лучшего отделения эмбриоидов их помещали на 2-4 дн. в камеру с температурами 10 - 15 С и 16-часовым фотопериодом, В этих улоаиях происходило индивидуальное развитие корневой системы. что способствовало последующему лучшему укоренению. Уменьшение срока охлаждения л 1 енее 2 дн. (например. до 1 дн.) затрудняло отделение эмбриоидов друг от друга. а уменьшение температуры менее 10" С (например, 9" С) сни кало жизнеспособность эмбриоидов и не наблюдалось их развития. При пятидневном культивировании эмбриоиды хорошо отделялись друг от друга и имели резко выраженную гипертрофированчую корневую систему. нп при этом снижалась их жизнеспособность из-за этиолирования,Аналогичное применение предлагаемой схемы технического решене 1 я нэ основе использования в качестве доноров непосредственно растений на сортообразцов. не прошедших регенерации 1 л чЕго, приводит к результатам по выходу и скорости образования эмбриоидов на уровне прототипа и ниже, т. е. в этом случае цель не В табл. 2 представлено сравнение настоящего способа с прототипом по выходу регенерантов (на 40 культивируемых каллусов для каждого сорта и варианта среды). Таким образол 1, настоящий способ посравнению с известными, является более продуктивным по выходу эмбриоидов и растений-регенерангов, причем, с увеличенной скоростью их роста и развития, которая лежит в оснрве искусственного повышения и ускорения интенсивности размножения люцерны."з 4,0 3,6 р и м е ч а н и е .- выход эмбриоидов по аналогу- выход эмбриоидов по прототипу;+ - выходэмбриоидов по заваленному б Таблица 2 ртообра о способ ыход дастен аяввеннам 143 16звестному 6 снокутскарусинскаярелаия 451 300 349 ) 4. О р 1 л у л;1 и 3 О б р е т е 1 и ,: Сособ ;ГеСрс 1 ии раснлв. лсцс рны Г .1 ГО, Г.лз 1 аао".: Отбор,:1",.ин-.к 1 х рас- ТЕНй, ЭКСПЛЛНтацИ,О лори аЗОВННЫХ Са Г мгнтп 1 их л 1 отьсв на пи 1 асльнуо сг,:ду Га .ОО а, молиЧ 111 чроаа 1",10 доба;лс 11 ис 1 аилани,ного воа и пов в;нньи с; дсчханием хелгата железа, культиеировние до ПОЛУЧЕНИЯ КаЛЛУСа, ПассаасааНИЕ На ПитаТСЛЬУ 10 СРСД/ ДЛЯ ПОЛУЧЕвЯ СО 1,дТИЧЕ ККХ эмбриоидсв, перенос со ят 1 ческ; эмбриоидсв на безгормональнуоита гельнуго среду с уменьшенным вдвое содергканием лакро- и 1 ЛИ 1;РосЛЕЙ ВЛЯ РПГЕНСРЛ 11 ИИ, ПЕ,1 Г;НОС Г, учснных рс, снеранто в почву и ада;т,цио ИХ , УсОЬИЯаЛ ОТКРЬОО ГРУНта, О т Л И Ки 1 З С Я ТО 1, аТО, С фсл 1 ПП ЗЬ 1 ЕИ;5 выхода эмбриоидов и расени.", рогеСран - ГОЕ П ми УСввРЕ 11 КИ ИХ СЧЭ 1 НО:,С 1 ИЯ, В 1:аС ство мат.риских растсни 1 исОлсую раес полученЫе растения-рсгенер;нть, солатиес;ис эмбриоидь получо при до.10 бавлсн, и в питэтельнуо среду 0,1-0,5 мг/л ЫУК, 0,1 - 0,5 лг/л к 11 нетин и 3- 15 мг/л глицина и перед переносом на среду для рсге нерации их культивиругот в,ачение 2-1 суток при 10-150 С на свету,15