Способ получения гликозидов

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕНТУ Совэ СоветскихСоциалистическихРеспублик и 1963471(31) 18098/75 (33) Италия Государстеенный комитет СССРОпубликовано 30,09.82.БюллетеньРм 36Дата опубликования описания 30,09.82 по делам изобретений н открытий(53) УДК 9 ф 7,4 У, ,07(0888) ИностранцыФедерико Аркамоне, Альберто Барджотти, Аурелио ди Маркои Серджо Пенко(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОЗИДОВ 2 Н 0 Н 0 еОи. Нэ МН.р ь радикал, а или б, Х - группа б - водород ил(когда Х - группа Р - метоксирадика формулы в,. Р - во гликоэид общей фо 0 ОНметокс формулы когда ород),мулыбО ОК 15олучения гликози 0 бО е значения,ан - без- соотношераствором тствиитной тем-,р- ОН нб 1(1 где б и Х имеют приведенн растворенный в смеси диок водный метанол в объемном нии 4: 1, взаимодействует брома в хлороформе в прис этилортоформиата при комн Изобретение относится к способу получения новых гликоэидов - проиэвод. ных доксорубицина, обладающих ценными фармакологическими свойствами.Цель изобретения - получение новых соединений, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм с улучшенными фармакологическими свойствами.Поставленная цель достигается синтезом целевых соединений, основанным на известных реакциях переведения производных 4 -эпидаунорубицина в доксорубициновый аналог через 14-бром- производное 11,Согласно способу идов общей формулы где Х представляет группу формулы3 963471 пературе для получения 14-бромпроиз-е водного, которое затем подвергают кон. тролируемому гидролизу водным раствором формиата натрия при комнатной температуре в течение 2-4 сут с последующим выделением целевого, продукта в виде гидрохлорида.1 лП р и м е р 1. 3 ,4 -Эпи-оксидоксорубицин гидрохлорид ( 1 а).Раствор 0,3 г 3 4 -эпи-окси р дауномицин гидрохлорида в смеси 4,2 мл безводного метанола и 12 мл диоксана смешивают с 0,3 мл этилорто формиата и 1,1 мл раствора брома в хлороформе (0,93 г в 10 мл). Спустя 1 ч реакционную смесь при комнатной температуре выливают в 60 мл диэтилового эфира и 30 мл петролейного эфира (т, кип. 40-70 С), Образовавшийся красный осадок отфильтровывают, промывают несколько раз диэтиловым эфиром до полного удаления кислотности и растворяют в смеси б мл ацетона и 6 щ 0,25 н,водного раствора бромистого ведорода. Через 15 ч смесь сме- д шивают при комнатной температуре с 6 мл воды и экстрагируют (неоднократно) хлороформом для удаления агликонов. Водную фазу экстрагируют н-бутанолом пока экстракты не обесцвечивают-З ся. Органический растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема (около 5 мл) и получают 0,26 г 14-бром- производного в виде красного кристаллического продукта. Полученные 0,26 г3 14-бромпроизводного растворяют в Ь мл 0,25 н. водного раствора бромистого водорода и смешивают с 0,45 г формиата натрия в воде (4,5 мл). Реакцион" ную смесь перемешивают 100 ч при комнатной температуре и упаривают досуха под вакуумом. Остаток растворяют в 120 мл смеси хлороформ - метанол (2:1 по объему), промывают 2,53-ным раствором бикарбоната натрия (дважды 50 мл),45Водную фазу экстрагируют хлороформом,пока экстракты не обесцвечивается.Органическую фазу объединяют с хлороформными экстрактами, сушат надбезводным карбонатом натрия и упаривают под вакуумом до небольшого объема (30 мл). Красный раствор доводят до рН 3,5 (на конго-рот) при помощи безводного метанольного раствора хлористого водорода, смешивают с избытком диэтилового эфира и получают0,12 г 3 ,4 -эпи-оксидоксорубици.с ) фна (1 а) в виде гидрохлоридаТ. пл.158-160 С (разл,), Ы)Яф = + 178 С 4(С = 0,01 в МеОН), Тонкослойная хроматограмма на силикагеле Мерк, буферированном до рН 7/Я 15-фосфатом, сприменением системы хлороформ - метанол - вода 13:6-1) по объему, ВГ0 32.П р и м е р 2, 3,4 -Эпиадриамиции 11 б.3 -4 -Эпидаунорубицин гидрохлорид(0,5 г) переводят аналогично примеру 1 в его доксорубициновый аналог(1 в) в смеси из 5 мл безводного метанола, 14 мл диоксана и 0,35 мл этилортоформиата обрабатывает 1,4 мл раствора брома в хлороформе (0,93 гброма в 10 мл хлороформа). Через0,5 ч реакционную смесь при комнатнойтемпературе выливают в смесь 70 млэтилового эфира и 35 мл петролейногоэфира. Выпавший осадок красного цветаотфильтровывают и промывают несколько раз этиловым эфиром до полногоудаления кислотности, затем его растворяют в смеси из 7 мл ацетона и 6 мл0,.25 н. водного раствора бромистоговодорода. Через 15 ч при комнатнойтемпературе в смесь приливают б млводы и несколько раз экстрагируютхлороформом для удаления агликонов.Затем водную фазу экстрагируют н-бутанолом до получения бесцветных экстрактов. Органический растворитель отгоняют под вакуумом до небольшогообъема (около 6 мл) и получают 0,26 г14-бромпроизводного, который растворяют в 6,7 мл 0,25 н. водного раствора бромистого водорода и обрабатываютраствором .0,5 г формиата натрия в5 мл воды. Реакционную смесь перемешивают 48 ч при комнатной температуре,затем упаривают досуха под вакуумом.Остаток растворяют в 120 мл смеси хлороформ-метанол 2:1 по объему, промывают 2,5-ным водным раствором бикарбоната натрия (2 х 50 мл). Воднуюфазу экстрагируют хлороформом дополучения бесцветных экстрактов,сушат над сульфатом натрия, упариваютдо небольшого объема (30 мл) под вакуумомДоводят рН красного раствора; Таблица 1 Доза, мг/кг Т/С,Количествоживотныхпродолжительноговыживания Соединение 1/10 123 226 2/10 138 6,7 138 10,5 4,5 1/10 250 5 9634 до 3,5 (на конго-рот) при помощи безводного метанольного хлористого водорода, приливают избыток этилового эфира и получают 0,17 г 4-деметокси- -эпидоксорубицина (формула 1 в) в видегидрохлоридакоторый очищают хроматографией в колонне с порошкообразной целлюлозой, применяя в качестве элюента хлороформ-метанол-воду (140: :20:2 по объему). Чистый продукт пла вится при 1780 С (разл.), Тонкослойная хроматограмма на силикагеле Мерк 254, буферированном до рН 7 при помощи И/15-фосфатного буфера, с применением системы хлороформ-метанол-вода О (130;60: 10 по объему), ВУ 0,54.3,4 -Эпи-оксидоксорубицин гид/рохлорида активен при экспериментальных опухолях. В табл. 1 приведены сведения об активности при асцитной 20 саркоме 1 80 у мышей, Тест проводили на группах по 10 мышей (и 1 зз С 01). Соединение вводили внутрибрюшинно в различной дозировке испытуемым животным через день после внутрибрюшинной 25 инокуляции 1 10 клетками опухоли мышей,Средняя продолжительность выживания дана в процентах от продолжительности выживания необработанных живот- зц ных, которая ( условно)принята за 1004.4-Деметокси-эпидоксорубицин ис" пытывали, сравнивая с доксорубицином нг 3 ,4 -Эпи-оксидоксорубицин гидрохлорида4,5 Доксорубицин гидрохлорида 71 6нескольких системах 1 п ч 1 Фго, при экспериментальных опухолях у мышей. Результаты опытов 1 и ч 1 Сго приведены в табл. 2. Это соединение активнее, чем доксорубицин. Результаты, полученные при экспериментальных опухолях у мышей, представлены в табл. 3-5, Во всех испытанных системах 4-деметокси- -4 -эпидоксорубицин проявил противо/опухолевое действие при дозе в 10 раз меньшей, чем доза доксорубицина.При лейкемиях 1.1210 и Р 388 проти, воопухолевое действие при оптимальной (не токсической) дозе сравнимо с дей ствием доксорубицина. При распростра" ненной саркоме 1. 80 ингибирующее дей. ствие на рост опухоли на 11 день не. сколько слабее, чем у доксорубицина, при эквитоксических дозах. При лейкемии Гросса (системная опухоль, прививаемая внутривенно), увеличение продолжительности жизни у мышей, обработанных двумя соединениями в эквитоксических дозах, одинаково.Таким образом, 4-деметокси-эпидоксорубицин проявляет сильное противоопухолевое действие на мышах, аналогичное доксорубицину, но доза его в десять раз меньше.Действие 4-метокси-эпидоксору. бицина на асцитную лейкемию. Лечение внутрибрюшинно, в 1 день, Данные приведены в табл. 3.963471 Таблица 2Действие 1 п 1 сго 4-деметокси-эпиадриамицина в сравнениис адриамицином, О (мкг/мл) 3МЕР Соединение 2 8 24 72 72 125 28 12,5 О, 01 0,026 Доксорубицин гидрохлорида4-Деметокси-эпидоксорубицин гидрохлорида 0,35 0,1 0,03 0,003 с 0,003 П р и м е ч а н и е. Клоновая эффективность клеток Не 1 а.2.Ингибирование образования очагов у М 5 Ч,Ингибирование пролиферации фибропластову эмбрионов мышей,Таблица 3 1.ТЗ Гибельтоксин. Т/С.Доза, мг/кг Соединение Лейкемия Доксорубицин 155 4/11 О/11166 1/11 1/11155 3/11 7/11155 О/11 О/11963471 10 Таблица Ь Действие 4-деметокси-Ь-эпидоксорубицина на распространенную саркому 1.80 при лечении внутривенно в 1-5 день. гидрохлорид 0,25 9/9 05 П р и м е ч а н и е. Вес опухоли на 11 день, Ф противнеобработанных контрольных (см.табл 5). таблица 5Действие 4-деметокси 4 -зпидоксорубицина на лейкемиюГросса при лечении внутривенно на 13 день (среднееот двух экспериментов)в в е е вт вав тат еаСоединение Доза, Т/С, ., 1.Т 5мг/кг Гибель токсин,О/20 3,5 . 164 О/20 Доксорубицин гидрохлорида О/20 4,5 182 О/20 1/10 1/10 О/10 3/104 ДеметоксиО/10 2/20 О/20 О/2011формула изобретения Способ получения гликозидов общейормулыул О О,онНю оксирад- водород да Х " гру метоксирадлы в,или ме ппа фор икал, авод щ и й с(ко В -лыаиогда Ход),тем,группа формуо т л и1 лию Составитель Г. КонноТехред Т.фанта ктор И. Демч Редакт Ковач аказ 7 Ж/8 тираж 388 ВНИИПИ Государ по делам изо 13035, Москва, филиал ППП "Патент", г. Ужгород,оектна где Х представляет груп 96347112 козид общей формулы 1 О Он бо-бы ОН Хгде К и Х имеют приведенные значениярастворенный в смеси диоксан-безводный метанол в объемном соотношении4: 1, подвергают взаимодействию сраствором брома в хлороформе в присуствии этилортоформиата при комнатнойтемпературе, полученное 4-бромпроизводное подвергают контролируемомугидролизу водным раствором формиатанатрия при комнатной температурев течение 2-4 сут с последующим выделением целевого продукта в видегидрохлорида.Источники информации,принятые во внимание при экспертизеПатент США У 3803124,кл. 260-210, опублик. 1974. Подписноетвенного комитета СССРретений и открытий