Способ выделения биологически активных веществ из прополиса

Союз Советских Социалистических Республик(51)М, Кл,з А 61 К 35/64 Государственный комитет СССР по делам изобретеиий и открытийОпубликовано 301181, Бюллетень ЙЯ 44 Дата опубликования описания 30, 11, 81 ьное конструкторское бюро химизации Всесоюзногоственного хозрасчетного объединения по производсттоваров бытовой химии пеци осуд 73) Заявитель 54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ПРОПОЛИСАболее полное активных ологии ве- тов 10 1Изобретение относится к техн получения биологически активных ществ для косметических препара из прополиса путем экстракции.Известен способ получения биологически активных веществ из прополиса экстрагированием со смесью этилового спирта и воды с последующей фильтрацией 13.Однако этот способ не,обеспечивает полного вцделения флавоноидов, что связайо с выбором растворителей (спирт, вода).Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ выделения биологически-активных веществ из прополиса путем экстракции смесью этилового спирта и воды (2.Недостаток известного способа - 20 неполное отделение биологически- активных веществ, так как применение в качестве растворителей только этилового спирта и воды не обеспечивает выделения широкой гаммы биологически активных составных частей про" полиса, кроме этого этот способ,не обеспечивает полного отделения механических примесей и естественных загрязнений. : 30 Цель изобретениявыделение биологическивеществ из прополиса.Поставленная цель достигается тем, что в смесь этилового спирта и воды добавляют глицерин, обеспечивая соотношение в смеси этиловогО спирта, глинерина и воды. 75-85, 5-10 и 10- 15 вес.Ъ соответственно, а соотношение прополис: зкстрагент - 1:5, экстракцию ведут при 35-45 С с последующим охлаждением до (-5) (-8 )фС, а остаток после экстракции обрабатывают норковым маслом при 75-85 С и соотношении остаток: норковое масло - 1:2.Способ осуществляется следующим образом.Натуральный прополис охлаждают до температуры не ниже -10 оС,затем измельчают до величины гранул 2-4 см. Измельченный прополис и раствори- тель - глицерин и этиловый спирт- загружают в реактор и при перемешивании нагревают до 40 1 5 фС. При этой температуре проводят экстракцию прополиса в течение 4 ч.Потом экстрагируемую смесь охлаждают холодной водой до 20 ф 5 фС и пере сасывают в другой реактор. При пере884703 мешивании охлаждают экстрагируемую смесь в течение 5-6 ч до (-5)-(-8 ) С. Охлажденную смесь Фильтруют на нутчфильтре при вакууме 0,06 1 0,01 МПа (0,6+ 0,1 кгс/см).Экстракцию остатка прополиса норковым маслом проводят при 80 й 5 С в течение 3 ч. Горячую смесь фильтруют при 80 1 5 С нутч-фильтром при вакууме 0,0610,01 Мпа (0,6 + 0,1 кгс/см),Горячий фильтрат - масляный экстрактпрополиса выпускают в емкость дляхранения,Для полного выделения биологически активных веществ из прополиса проделана серия опытов с целью подбора растворителей и оптимальных их соотношений, а также для сравнения с известным способом.Таблица 1 Состав растворителя,вес. Пример Выход флавоноидов весГлицериндистил- лированный 94-ный Этиловыйспирт96-ный Вода 82,7 12,0 5,3 70,0 10 рО 5,0 85., 0 70,0 15,0 10,0 10,0 5,0 5,0 Ч 1 Ч 11 10,0 90,0 69,0 Из приведенных испытаний видно, что наиболее полное выделение флавоноидов (до 70) достигнуто при растворителе, содержащем, вес.;Спирт этиловый 75-85 Вода 10-15 Глицерин 5-10 При использовании растворителя, состоящего из этилового спирта и глицерина, выход Флавоноидов снижаетсяДля определения соотношения про- полис: растворитель проведены опыты, результаты которых даны в табл. 2. Таблица 2 лСвойства Соотношение прополис:растворитель 1:2 1:3 1;4 1:5 1:6 1;7 Продолжительность процесса, чТемпература,С 40 40 40 40 40 40 Растворимость в флавоноиде, вес. 63,0 65,0 68,0 70,0 700 70 тО Концентрация раствора,вес. . 23,9 17,8 16,0 13,2 10,4 91 46 теля и соответственно снижается концентрация флавоноидов,Для определения оптимальной температуры наиболее полного выделения восков, бальзамов и смол из водно спирто-глицеринового экстракта,проИз опытов видно, что оптимальное соотношение прополис : растворитель 1:5, так как при соотношении 1;2, 1:3, 1:4 происходит неполное выделение флавоноидов, а при соотношении 1:6 и 1:7 повышается расход раствори 75,0 90,0 95,0 95,0 70,0 65,0 67,0 68,0884703 ведены опыты, результаты которых даны в табл.3.Т а б л и ц а 3 Из опытов видно что оптимальное соотношение остаток прополиса: норковое масло - 1:2, так как при соотношении 1:1 растворимость баль- замов, восков и смол неполное, а при соотношении 1:3 повышается расход нормального масла и соответственно снижается концентрация восков, бальзамов и смол в экстракте.Для определения оптимальной температуры в процессе экстракции остатка прополиса норковым маслом проведены опыты, результаты которых даны в табл. 5. Содержание восков, бальза.мов, смол в спиртоглице"риновой смеси, вес.Т,С+1 -4 -5 -8 50,5 Иэ опытов видно, что снижение температуры способствует полному выделению восков, бальзамов, смол в спиртоглицериновую смесь. Уже при -5 ОС выделяются все воска, бальзамы и смолы, а при повышенной температуре еще есть воска, бальзамы и смолы в спиртоглицериновой смеси.Для определения оптимальных соотношений остаток прополиса:норковое масло проведены опыты, результаты которых даны в табл.4.Таблица 4 Т,С 2 О 65 90 70 95 75 100 80 100 Свойства 1 1 1 2 1 3 100 85 Из .опытов видно, что температура до 80 ОС не обеспечивает полную.экстракцию восков, бальзамов и смол, поэтому снижается выход. Применение же температуры выше 85 С снижает качество продукции.Вещества, извлекаемые на каждом этапа экстракции, указаны в табл. 6. 80 80,100 100 95 15 30 21 Таблица 6 Извлекаемые вещества Экстрация флавоноидная Фракция прополиса флавоны - хризин,тектохриэин и другие флавонолы - галангин,изальпин рамноцитрин, кемферидфлавононы - пиноцембрин, пиностробинпроиэводные кверцетинаАроматические кислоты - кофейная, Феруловая, коричная, бензойная кислоты Ароматические альдегиды - ванилин, изованилинВодиорастворимые витамины В, С, РР Восковая часть прополиса: свободные углеводороды 10, жирные кислоты 15сложные эФиры, в главнбм производные церотиновой кислоты 70; бальзамымаслорастворимый витамин А(этап - вод-, но-спиртовоглицериновым растворителем при 40 + 5 Сэтап - норковым маслом при 80 й 5 фС Продолжительность процесса,ч Температура ОС Растворимость баль-.замов,восков,смол, Концентрация раствора,Соотношение .остатокпрополиса:норковое масло т Таблица 5Растворение восков, бальэамов, смол в норковом масле, вес.82,7 12,0 П р и м е р 2. Натуральный прополис охлаждают в холодильнике не ниже (-.10)ф С, затем измельчают на П р и м е р 1. Натуральный пропо-лис охлаждают в холодильнике не ниже -10 ОС, затем измельчают на измельчителе до величины гранул 2-4 см. В чис- тый эмалированный реактор с пароводяной рубашкой вместимостью 100 л, снабженный эмалированной якорной мешалкой и термометром, загружают 10 кг измельченного прополиса и растворитель следующего состава.кг вес..Этиловый спирт96-ный,в/о 41,35Вода 6,00Глицерин94-ный 2,65 5,3ВклЮчают мешалку и обогрев реакто. ра. Нагревают содержимое реактора до 40 ф 5 ОС. При этой температуре проводят экстракцию прополиса при перемешивании в течение 4 ч. Экстрагируемую смесь охлаждают холодной водой до 20 + 5 С ипересасывают в другой реактор, снабженный якорной мешалкой и водяной рубашкой. При перемеши вании охлаждают экстрагируемую смесь в течение 5-6 ч до (-5)-(-8)С.Охлажденную смесь фильтруют на нутч-Фильтре при вакууме 0,06+ 0,01 МПа (0,6 + 0,1 ксг/см).фильтрат - водно-спиртовой экстракт прополиса в количестве 53 кг, содержащий 7 кг флавоноидной Фракции прополиса или 70 пропЬлиса, собирают в емкость для хранения.Нерастворимый в смеси растворителей остаток прополиса составляет 3 кг или 30 от взятого прополиса.В общем объеме раствора фильтрата содержится,вес.: вода и этиловый спирт 81,8.; глицерин 5,0; Флавоноидная фракция 13,2.В чистый эмалированный реактор с пароводяной. рубашкой вместимостью 25 л, снабженный якорной мешалкой и термометром, загружают 3 кг высушенного остатка прополиса и б кг норкового масла. Включают мешалку и обогрев реактора. Содержимое реактора нагревают при перемешйвании при 80 й 5 ОС в течение 3 ч. Горячую смесь выпускают из реактора и при 80 1 5 фС Фильтруют на нутч-Фильтре при вакууме 0,06+ 0,01 МНа (0,6+ 0,1 ксг/см ),Горячий фильтрат - масляный .экстракт прополиса в количестве 7,1 кг, содержащий 16 прополиса. или 1,6 кг восковой части прополиса,вы- пускают в емкость для хранения.Масляный фильтрат содержит,вес.; восковую часть прополиса 22,0; норковое масло 78,0 на фильтре остаются механические примеси в количестве 1,4 кг или 14 от взятого прополиса, которые выбрасываются.измельчителе до величины гранул2.-4 см. 0 65 На Фильтре остаются механические примеси в количестве 1,4 кг или 14 от взятого прополиса, которые выбраФсываются.П р и м е р 3, Натуральный прополис охладевают в холодильнике не В чистый эмалированный реакторс паровсдяной рубашкой вместимостью100 л, снабженный эйалированной якор- ной мешалкой и термометром, загружают 10 кг измельченного прополисаи растворитель следующего состава:кг вес.Этиловый спирт96-ный, в/о 34,085,0Вода 4,0 10,0Глицерин 2,0 5,0ВКлючают мешалку и обогрев реактора. Нагревают содержимое реактора1 до 40 + 5 ОС. При этой температурепроводят экстракцию прополиса приперемешивании в течение 4 ч.Экстрагируемую смесь охлаждают хо-.лодной водой до 20 1 5 С и пересасы 20 вают и другой реактор, снабженный якорной мешалкой и водяной рубашкой. Приперемешивании.охлаждают экстрагируемую смесь в течение 5-6 ч до (-5)(-8) С. Охлажденную смесь фильтр 5 руют на нутч-Фильтре при вакууме0,06 + 0,01 МПа (О,6 Й 0,1 кгс/см) .фильтрат - водно-спиртовойэкстракт прополиса в количестве42,8 кг,содержащий 6,8 кг флавоноидЗ 0 ной фракции прополйса или 68 отвзятого прополиса, собирают в емкость.для хранения.Нерастворимый в смеси растворителей остаток прополиса составляет3,2 кг или 32 от взятого прополиса., В общем объеме раствора фильтратасодержится, вес,: вода и этиловыйспирт 79,0; глицерин 5,0; Фланоидная фракция прополиса 16,0.В чистый эмалированный реактор40 с паровопяной рубашкой вместимостью25 л, снабженный якорной мешалкойи термометром, загружают 3,2 кгвысушенного остатка прополиса и6,4 кг норкового масла. Включают ме.4 шалку и обогрев реактора. Содержимое реактора нагревают, перемешивая при 80 ф 5 С в течение 3 ч.Горячую смесь выпускают из реактора и при 8025 РС Фильтруют на нутчу 0 Фильтре при вакууме 0,06 + 0,01 МПа(0,6 й 0,1 кгс/см ),Горячий Фильтрат - масляный экстракт прополиса в количестве 7,5 кгсодержащий 16 от взятого прополисаили 1,6 кг восковой части прополиса,выпускают в емкость для хранения.ниже температуры (-10 С), затем измельчают на измельчителе до величины гранул 2-4 см. В чистый эмалированный реактор с пароводяной рубашкойвместимостью 100 л, снабженный эмалированной якорной мешалкой и термометром загружают 30 кг измельченного прополиса и растворитель следующего состава: кг вес.Этиловый спирт96-ный,в/о 42,50 75,0Вода . 7,50 15,0Глицерин94-ный 5,00 10,0Включают мешалку и обогрев реактОра. Нагревают содержимое реактора до40 й 5 цС. При этой температуре проводят экстракцию прополисапри перемешивании в течение 4 ч. Экстрагируемую смесь охлаждают холодной водойдо 20 + 5 С и пересасывают в другойреактор, снабженный якорной мешалкой 20и водяной рубашкой. При перемешиванииохлаждают экстрагируемую смесь в течение 5-6 ч до (-5)-(-8) С. Охлажденную смесь фильтруют на нутч-фильтрепри вакууме 0,06 + 0,01 ИПа (0,6 фф 0,1 кгс/см ),фильтрат - водно-спиртовой экстракт прополиса в количестве 61 кг,содержащий 7,0 кг Алавоноидной фракции прополиса или 70 от взятогопрополиса, собирают в емкость дляхранения. Способ выделения биологически активных веществ из прополиса путем ркстракции смесью этилового спирта и Воды, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью более полного выделения вещества, в смесь этилового спир-, та и воды добавляют глицерин, обеспечивая соотношение в смеси этиловОго спирта, глицерина и воды 75-85, 5-10 и 10-15 вес. соответственно, а соотношение прополис:экстракт 1:5, экстракцию ведут при 35-45 С с,последующим охлаждением до (-5)-(-8)ф С, а остаток после экстракции обрабатывают норковым маслом при 75-85 С и Нерастворимый в смеси растворителей остаток прополиса составляет 3 кгЗ 5 или 30 от взятого прополиса,В общем объеме раствора фнльтрата содержится, вес.: вода и этиловый спирт 89,5; глицерин 8,0; флавоноидная Фракция 11,5.В чистый эмалированный реактор с 40 пароводяной рубашкой вместимостью 25 л, снабженный якорной мешалкой и термометром, загружают 3 кг высушенного остатка. прополиса и б кг норкового масла. 45 Включают мешалку и обогрев реактора. Содержимое реактора нагревают,перемешивая, при 80 ф 5 С .в течение3 ч. Горячую смесь выпускают из реактора и при 80 + 5 фС фильтруют на нутч- .фильтре при вакууме 0,06 + 0,01 ИПа(0,60,1 кгс/см),Горячий фильтрат -масляный экстракт прополиса в количестве 7,1 кг,содержащий 16 от взятого прополисаили 1,6 кг восковой части прополиса,выпускают в емкость для хранения,В масляном фильтрате содержится.вес.; восковая часть прополиса 22,0; 60норковое масло 72,0.На фильтре остаются механическиепримеси в количестве 1,4 кг или 14от взятого прополнса, которые выбра-,сываются. 65 Использование в качестве растворителя смеси этилового спирта, глицерина и воды позволяет выделить из прополиса более широкий диапазон биологически активных веществ,Для выделения бальзамов, восков, смол применяется норковое масло. Благодаря низкой температуре застывания норковое масло обладает высокой экстрагирующей способностью, что связано с высоким поверхностным натяжением.Поэтому норковое масло является оптимальным экстрагирующим компонентом при экстракции смол, восков и .бальзамов прополиса. Таким образом, при вышеизложенном разделении прополиса для косметических целей получают, водно- спирто-глицериновый экстракт, состоящий иэ флавоноидов и содержащий в своем составе все биологически активные компоненты прополиса, мягкие режимы экстракции которого обеспечивают сохранение биологически активных компонентов флавоноидов, а оптимальное соотношение растворителей обеспечивает ускорение процесса экстракции, полноту извлечения и оптимальную концентрацию флавоноидов в экстракте; втехнологии приготовления косметических препаратов предусмотрено введение водно-спирто- глицеринового экстракта в технологический процесс при темпегдтуре выше 50 С. Получают экстракт бальзамов, смол и восков прополиса на норковом масле. Воска прополиса придают крему блеск. В смеси с норковым маслом является полезной добавкой косметических препаратов. В технологии приготовления косметических препаратов предусмотрено введение масляного экстракта, бальзамов, восков и смол в технологический процесс при 80- 90 фС. А также получают фракции механических примесей и загрязнений прополиса, которые выбрасываются. Формула ,изобретения884703 12 Составитель А. ЯнсонеТехред М.Голинка Корректор Н., Стец Редактор И. Ковальчук Заказ 10318/6 Тираж 690 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 соотношении остаток:норковое масло1 2Источники информации,щжщИЩ во внимание нри экспертизе 1. Научные исследования.и мнения о составе, свойствах прополиса и егоприменение в терапевтических целях. Бухарест, фАпимондии", 1975, с. 252. "Новые исследования по апитерапии" (Второй Международный симпозиум по апитерапии, Бухарест-,2,7 сентября 1976), фЬпимондии", бухарест, 1976., с.,155-157 (прототип).