Способ прогнозирования гнойно-воспалительного осложнения у хирургических больных

(19) 51)5 6 01 М 33/5 ЗОБРЕТЕНИ ОПИСА РСК ИДЕТЕЛ ЬСТ(21) 4850336/14 (22) 12,07.90 (46) 15.03.93. Б (71) Казахский инСтитут клини хирургии им, А, (72) М,А,Алиев, В,А.Писанка и (56) Грудная хи юл, М 10 научно-исследовательский ческой экспериментальной Н,Сызганова .С,А,Воронов, Б.В,Каральник, .Б,Ракишев ургия, 1989, М 6, 74-78,(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГНОЙ-. НО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ХИРУРГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью изобретения является прогнозирование гнойно-воспалительных осложнений развивающихся в послеоперационном периоде у больных с хроническими заболеваниями легких. Цель достигается путем применения индивидуИзобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и может быть использовано для диагностики гнойных осложнений у хирургических больных в послеоперационном периоде.Целью изобретения является упрощени и сокращение времени способа, повыше 1 ие его прогностической ценности при прогнозировании послеоперационных гнбйно-воспалительных осложнений у отдельно взятых больных.Цель достигается тем, что согласно способу комплексной клинико-лабораторной диагностики, включающему клиническое обследование больных в динамике, клинико-лабораторные показатели, иммунологические показатели Т- и В-системы ГосудлРственное пдтентноВЕДОМСТВО СССРГгоспдтент сссР) альной схемы забора крови в динамике процесса изменения показателей иммунологической реактивности до- и послеоперационного периода, а также применения интегрального иммунологического теста определения адгезивных свойств лейкоцитов, включающего такие процессы как: адгезию лейкоцитами эритроцитов, феномен антигеннеспецифического по.вреждения гранулоцитов, фагоцитов, прилипание лейкоцитов к поверхности пробирок. Обработка результатов исследования автоматизирована за счет применения электронных счетчиков микрочастиц Пикоскель, венгерской фирмы Медикор-Будапешт, и программного обеспечения на отечественной ЭВМ СМ 1420. Способ может быть использован в иммунологических лабораториях для научных и клинических исследований. 1 ил., 1 табл. иммунитета, основные классы иммуногло-Обулинов А, М, О, фагоцитарную активность, уровень циркулиоующих иммунных комплексов, определение индекса тяжести (клинического и лабораторного), путем оценки степени риска послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений, прогнозируют послеоперационные гнойно-воспалительные осложнения у конкретных больных путем наблюдения каждого из них в динамике по строго определенной схеме, где исходное значение определяют обяэател ьно за сутки до оперативного вмешательства, затем за 15-20 мин до начала и по окончании операции и далее в 1-е, 2-е, 3-и и последующие сутки послеоперационного периода в зависимости от конкретно сло 1802327жившейся ситуации для данного больного с использованием для этой цели интегрального иммунологического способа определения адгезивных свойств лейкоцитов (впервые разработанного в нашей лаборатории), включающего адгезию лейкоцитами эритроцитов, фагоцитов, прилипание клеток к стеклу, антигеннеспецифическое разрушение нейтрофильных лейкоцитов при определении всех этих показателей одномоментно и выражающихся суммарным индексом адгезии (ИА), который в данном случае имеет качественное значение и при наличии тенденции к снижению относительно исходного и предыдущего значения в любой точке временной последовательности послеоперационного периода расценивается как показатель развития гнойно-воспалительного осложнения, развивающегося как правило через 18-20 часов от начала снижения ИА,Предлагаемый способ интегральной оценки адгезионных свойств лейкоцитов заключается в следующем,В центрифужную пробирку помещают 0,1 мл чистой взвеси лейкоцитов, состоящих из нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов и др. клеток, с содержанием 5 + 0,5 тыс, клеток в 1 мм и 0,1 мл эритроцитов барана с содержанием 50 + 1,0 тыс,клеток, Соотношение 1:10, Клетки подсчитывают аппаратным способом (контрольная проба). Взвесь клеток инкубируют в течение 5 мин при 37 С на водяной бане, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин и выдерживают в течение 60 мин при 12 С, За это время в клетках заканчиваются все биологические процессы. Затем клетки ресуспендируют и вновь подсчитывают(опытная проба). Полученное .значение счета опытной пробы вычитают из значения счета контрольной пробы и полученную разницу выражают в процентах по отношению к контрольной пробе.ИА - , 100 где ИА - индекс адгезии лейкоцитов;К - контрольная проба;Оп - опытная проба.Разница между контрольной и опытной пробами представляет собой 4-х системный интегральный показатель, который включает в себя такие процессы как: адгезия, фагоцитоз, прилипание, антигеннеспецифичесчкое повреждение гранулоцитов, накладывающиеся во время реакции лейкоцитов с эритроцитами один на другой и определяемый в виде суммарного индекса адгезии (ИА).В зависимости от происходящих в организме человека изменений в норме и пато 5 логии, различают два основных видаиммунологических сдвигов, в положительнуюили отрицательную сторону. При антигеннеспецифическом повреждении лейкоцитов преобладает отрицательная реакция, когда10 опыт превышает контроль. При адгезии лейкоцитами эритроцитов, фагоцитозе, прилипания лейкоцитов к стенкам пробирок -преобладает положительная реакция. Вэтом случае контроль превышает опыт,15 В зависимости от конкретной иммунологической ситуации, наблюдаемой у больного в динамике в до- и послеоперационномпериоде, а также у практически здоровыхлюдей и доноров станции переливания кро 20 ви, значения показателей распределяются. следующим образом:1, "контроль меньше опыта" - отрицательная реакция; превалирует процесс антигеннеспецифического разрушения25 гранулоцитов, наблюдается у доноров,П. "контроль превышает опыт" - положительная реакция; превалируют процессыадгезии лейкоцитами эритроцитов, фагоцитоз, прилипание клеток к стеклу; наблюда 30 ются у больных с патологией легких (рак,хронические заболевания)1 И, "контроль равен опыту" - процессыуравновешены; наблюдаются у практическиздоровых людей.35 "ИА" в.норме и патологии в абсолютныхзначениях распределяются следующим образом:у доноров - /-/ 11 - /-/ З ;у практически40 здоровых людей - /-/ 3- /+/ 3 ь;у больных спатологией легких -- раковые больные - /+/ Зф - /+/ 10;- хронические забо 45 левания легких - /+/ 10 ф - /+/ 306.Отрицательные значения ИА свидетельствуют о том, что в реакции взаимодействиялейкоцитов с эритроцитами барана преобладает процесс антигеннеспецифического50 повреждения нейтрофильных лейкоцитов.Положительные значения ИА свидетельствуют о преобладании процессов адгезии лейкоцитами бараньих эритроцитов,фагоцитоза и прилипания клеток к поверх 55 ности пробирок.У практически здоровых людей процессом антигеннеспецифического повреждения гранулоцитов, адгезии, фагоцитоза иприлипания - уравновешены.Схема индивидуального прогнозирования послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений показана на фиг,По оси ординат графика откладываютзначения ИА здоровых и больных людей, По 5оси абсцисс - время забора крови в суткахи часах до- и послеоперационном периоде,П р и м е р, Точкиа, б, в, г нанесенные. на ось ординат за сутки до начала оперативного вмешательства свидетельствуют о различных вариантах исходных уровнейСостояния иммунологической реактивностиОрганизма больных.Затем наносят значения ИА, полученные за 15-20 мин до начала оперативного 15вмешательства. Эти значения имеют тенденцию к резкому снижению по сравнениюс исходными данными, Процесс сниженияисходных значений ИА расценивается какстрессовая реакция организма, возникающая под воздействием психо-эмоциональных факторов на предстоящую операцию(на фиг. отрезки а, б, в, г - 2),В конце операции отмечается небольшой подъем показателей ИА (отрезок 2 - 3), 25. В первые сутки послеоперационногопериода значения ИА оезко возрастают и внекоторых случаях достигают исходных показателей превосходят их (отрезок 3 - 4).Собственно прогнозирование гнойновоспалительных осложнений начинается стого момента когда, в первые, или на вторые, или на третьи, или на четвертые и т.д;сутки (точки 4, 6, 8, 10) послеоперационного периода отмечается резкое снижение показателей ИА отрезки 4 - 5, 6 - 7, 8 - 9, 10 - 11)Относительно их исходных значений ( а, б, в,г) или предыдущих максимальных значений(точки 4, 6, 8, 10).Таким образом диагностика гнойных 40осложнений осуществляется в динамикеЙри сравнении показателей ИА по вертикали и горизонтали координатной сетки осейординат и абсцисс.При установлении факта снижения показателей ИА в определенный временнойМомент послеоперационного периода,гной но-вос пал ител ьн ые осложнения развиваются как правило через 18 - 20 ч.П р и м е р 1. Больной И., 42 года. Дз: 50Хронический абсцесс,Кровь у больного забирали из локтевойвены в количестве 4-5 мл.Для стабилизации крови применяли геПарин из расчета 25 ед на 1 мл. 55Затем кровь отстаивали при комнатнойтемпературе 20 - 25 С в течение 40-60 мин,Верхний слой плазмы, содержащий лейкоциты, переносили в чистую пробирку. Для отсасывания и переноса клеток из одной пробирки в другую использовали шприц с иглой 130 мм и диаметром отверстия канала 0,6 мм.Полученную взвесь клеток разливали в центрифужные пробирки 1 мл и центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин. После окончания центрифугирования верхний слой плазмы отсасывали до плотного осадка и затем осторожно ресуспендировали. Небольшую примесь эритроцитов удаляли осмотическим шоком, Для этого в пробирку добавляли 0,3 мл дистиллированной вбды на 15 сек и поперечными колебаниями пробирки обеспечивали полный лизис эритроцитов. Время лизиса эритроцитов строго выдерживали. По прошествии 15 сек быстро добавляли 1 мл 0,85-ного раствора хлористого натрия или среды 199. Полученную взвесь лейкоцитов дважды отмывали центрифугированием по 10 мин при 1000 об/мин. Клетки подсчитывали аппаратным способом.Подсчет клеток на аппарате типа Пикоскель; С помощью микропипетки 0,02 мл взвеси клеток переносили в стаканчик с 12,5 мл электролита (0,85;-ный раствор хл, натрия) и наклонными движениями перемешивают содержимое. После этого флакончик устанавливают в аппарат. Для подсчета лейкоцитов используют измерительный капилляр диаме 1 ром 100 мкм. Режим подсчета клеток на аппарате - "для лейкоцитов", устанавливают путем нажатия соответствующеи клавиши.Измерения проводят не менее 3-х раз, после чего выводят среднее арифметическое. Полученное значение счета умножают на 100 и получают количество лейкоцитов в 1 мм . Например: На табло аппарата или после усреднения получено значение счета равное 50. Это значение умножают на 100 и получают 5000 клеток и в частности лейкоцитов в 1 мм . Затем готовят стандартные количества эритроцитов 50 + 1,0 тыс. в 1 ммз) и лейкоцитов (5 . 0,5 тыс. в 1 ммз).Подсчет эритроцитов в данном случае проводится в режиме работы аппарата "Для лейкоцитов",Способ определения адгезивных свойств лейкоцитов осуществляется следующим образом: 0,1 мл эритроцитов барана с содержанием 50 тыс. клеток с 1 мм помещают в центрифужную пробирку, В эту же пробирку добавляют 0,1 мл лейкоцитов с содержанием 5 тыс. клсток в 1 мм, Взвесь клеток осторожно перемешивают путемвращения пробирки вокруг ее продольнойоси,С целью повышения достоверности результатов готовили не менее 3 параллельных проб. 5Из каждой пробы по 0,02 мл взвеси клеток переносят в три флакона с 12,5 мл электролита и подсчитывают на аппаратеПикоскель в режиме работы аппарата дляподсчета лейкоцитов (контрольная проба), 10Полученные значения измерений в трехпробах усредняют. Затем пробы выдерживают на водяной бане 5 мин при 37 С, Послеэтого центрифугируют 5 мин при 1000об/мин и инкубируют в течение 60 мин при 1512" С. Осадок клеток осторожно ресуспендируют и подсчитывают нэ аппарате Пикоскель (опытная проба) в том же режиме,Полученное значение счета опытнойпробы вычитают иэ значения счета контрольной пробы и полученную разницу выражают в процентах по отношению кконтрольной пробе.Все математические и статистическиерасчеты производились на ЭВМ СМ 1420 25отечественного производства по специально составленной для этих целей программеи распечатывались в виде бланка с указанием паспортных данных больного, диагнозаи полученных результатов исследования. 30По мере накопления данных в динамикеЭ ВМ изображает их в виде графика и распечатывает на бланке,Динамика показателей ИА у больногоИ о , 35за сутки до операции 18,6перед началом операции 3,4в конце операции 13,1в первые сутки послеоперационного периода 15,9 40на 6-е сутки 3,5на 8-е сутки 1,8Интервал между 1-ыми и 6-ыми суткамипослеоперационного периода характеризуется резким снижением ИА, Снижение составило относительно исходного уровня -81,2 .Осложнения гнойно-воспалительногохарактера у больного начались на 2-е суткипослеоперационного периода и достигли 50своего наивысшего развития к 6-ым суткам.В это время у больного появились температура 38 С, недомогание, слабость, В периферической крови обнаружены пэлочкоядерныенейтрофильные лейкоциты, СОЭ увеличилась до 51 мм/ч,П р и м е р 2, больной Г 55 лет. Дз:Плоскоклеточный неороговевэющий ракнижней доли левого легкого. Динамика показателей ИА у больного Г., :эа сутки до операции 5,4перед началом операции 2,9в конце операции 8,4на вторые сутки послеоперационного периода 19,2на пятые . 5,6Интервал между 2-ыми и 5-ыми суткамипослеоперационного периода у больногохарактеризуется резким снижением ИА.Снижение составило относительно предыдущего уровня - 70,8%,Гнойно-воспалительные осложненияначались на 3-и сутки послеоперационногопериода и характеризовались подьемомтемпературы до 37,8 С, увеличением СОЭдо 47 мм/ч, появлением палочкоядерныхнейтрофильных лейкоцитов - 7%.П р и м е р 3, Больной С., 72 года. Дэ:Кавернозный рак правого легкого,Динамика показателей ИА у больного%,за сутки до операции 3,8в первые сутки послеоперационного периода 4,7на вторые стуки 4,7на восьмые 11,3Резких снижений ИА на протяжении 8 ми суток послеоперационного периода убольного не отмечается.Гнойно-воспалительное осложнениенеразвилось. П р и м е р 4. Больной Т. 23 года. Дз;Эхинококкоз легких,Динамика показателей ИА у больного Т%:за сутки до операции 1,5в первые сутки послеоперационного периода 6,7на третьи сутки /-/1,2на шестые сутки 7,0Интервал значений ИА между 1-ыми и3-ми сутками послеоперационного периодарезко снижен - до 117,9 относительнопредыдущего значения (6,7).Гнойно-воспалительное осложнениеразвивалось на 2-е сутки послеоперационного периода и характеризовалось подьемомтемпературц до 38 С, появлением в периферической крови палочкоядерных лейкоцитов,увеличением СОЭ до 50 мм/час,Таким образом, предлагаемый способпрогнозирования гнойно-воспалительныхосложнений позволяет с высокой степеньюнадежности, в отличие от известного способа оценки степени риска гнойных осложнений, прогнозировать послеоперационныегнойно-воспалительные осложнения у отдельно взятых больных,10 1802327 Формула изобретения Иммунологические показатели прогнозирования послеоперационных осложнений у больных с хроническими заболеваниями легкихИспользование в предлагаемом способе интегрального иммунологического теста определения адгезивных свойств лейкоцитов, включающего такие одновременно протекающие процессы как: адгезия лейкоцитами 5 Эритроцитов, феномен антигеннеспецифичеСкого повреждения нейтрофильных лейкоцитов, фагоцитоз, прилипание клеток к стеклу пробирок и выражающихся через суммарный индекс эдгезии (ИА), определяемого одномо ментно, позволяет упростить и сократить время диагностики гнойно-воспалительных осложнений.Одномоментное определение в предлагаемом спосоое ведущих иммунологических 15 тестов путем автоматизированных вычислений полученных значений счета контрольйой и опытной проб, минуя промежуточные подсчеты клеток визуальным способом на предметных стеклах, как это происходит в 20 известном способе, также упрощает и сокращает время способа.Использование отечественной ЭВМ СМ 1420 со специально составленными программами и электронных счетчиков клеток 25 тпа Пикоскель ПС, венгерской фирмы "Медикор", позволяет в автоматическом режиме следить за состоянием больного и своевременно сообщать об изменениях в иМмунном статусе больного, что обеспечи вает точную и надежную диагностику гнойнр-воспалительных осложнений.Способ поясняется таблицей и чертежом, где35- доноры станции переливания крови- практически здоровые люди И - больные с раковыми заболеваниями легкихЧ - больные с хроническими заболеваниями легкихсдо/оп - 1-е сутки до операции до/оп - до операции за 15-20 мин и/оп - после окончания операции с и/оп - 1-е сутки послеоперационного периода2,3,4,5, - и т.д. сутки послеоперационного периода Способ прогнозирования гнойно-воспалительного осложнения у хирургических больных с заболеванием легких путем иммунологического обследования больного, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности прогнозирования и упрощения способа, в динамике определяют показатели адгезии лейкоцитами эритроцитов, адгезии клеток к стеклу, фагоцитоза и антигеннеспецифического разрушения гранулоцитов за сутки за 15 - 20 мин до операции, в конце операции и далее в первые, вторые и третьи сутки послеоперационного периода высчитывают суммарный индекс адгезии и при снижении его относительно исходного или предыдущего значения прогнозируют гнойно-воспалительное осложнение.-ая г ппа- ая г ппа- г ппа 1,7+О,2 6,8+О,6 Клинический ПкЛабо ато ный Пл 1,24-0,1 4,9 М,6 1,1 +0,1 4,3+0,2- группа тестов свысокими показателями,-- " -- " - с низкими",Нф - нейтрофильные лейкоциты,Лф - лимфоциты,Е-РОК - Е - розеткообразующие клетки (Лф с 3-мя и более адгезированнымиэритроцитами),ц М - иммуноглобулин,ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы тв Составитель Г,КрюковаВ.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор М.Керецма ственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина Про аз 847 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР13035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5