Способ определения асептического воспалительного процесса при повреждении ткани

(50 4 33/48 ГОСУД ПОД ррруоф 4 О ТЕНИ щ ЙЙЙТГ.(21) (22) (46) (71) ь к медициается спо РСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР АМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ НИЕ ИЗОБ РСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС 955550/28-143,06,859.0288 Бюп, У 8осковский научно-исследованститут педиатрии и детско хирургии(56) Серов В.В, Морфологические основы иммунопатологии почек. М.: Медицина, 1968, с, 30-35,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА ПРИ.ПОРЕЖДЕНИИ ТКАНИ(57) Изобретение относитсяне, точнее к педиатрии, кас собов диагностики асептического вос.-. палительного процесса в организме ребенка при различных заболеваниях. Цель изобретения - снижение травматичности способа, Для этого проводят биохимический анализ количества липидов, выделяемых с мочой за сутки, Обнаружено, что суммарная экскреция липидов. за сутки является специФичныи и чувствительным тестом для диаг . ностики наличия, активности и тяжести асептического интерстициального воспаления в ткани почек, в коже у детей. При уровне метаболитов липидов, экстрагируемых н-бутанолом, 1200 мг/сут и более при наличии хе" а мотаксической и цитолитической актив- Е ности определяют асептический воспалительный процесс, Предлагается безбиопсийный атравматичный метод контроля эа течением воспалительного процесса у детей. 2 табл.Изобретение относится к медицине,в частности к педиатрии, и можетабйть использовано для определенияасептического воспалительного про"цесса у детей.Целью изобретения является снижение травматичности способа за счетиспользования в качестве биологического материала мочи ребенка, в которой определяют содержание метаболитов липидов.Способ осуществляют следующим.образом,Н-бутанольный экстракт метаболитов липидов производят из 5 мя суточной мочи, предварительно центрифугируют мочу от. клеток при 1,5 тыс.об,мин в течение 5 мин, К 5 мп надосадочной мочи добавляют 5 мп н-бутанола и оставляют на 30 мин при комнатной температуре при периодическомвстряхивании. Затем помещают смесь. в делительную воронку удаляют ниж-,25ний слой обезжиренной мочи, а бутанольный экстракт переносят в сахарный стаканчик и выпаривают досуха ввытяжном шкафу в.песочной (водяной)бане при 60 С, можно использоватьструю сжатого воздуха или азота дляускорения выпаривания, Сухой остаток взвешивают и пересчитывают насуточное количество мочи, Увеличениеэкскреции биологически активных метаболитов липидов более 1200 мг/сут 35свидетельствует о наличии асептического воспаления,Полученный сухой экстракт взвешивают, растворяют в 5 мл физраствораи используют для определения его 40хемотаксических и цитолитическихсвойств методом "кожного окна" у здоровых взрослых добровольцев 1,п что.На сгибательную поверхность пред"плечья, предварительно обезжиренную 45спиртом, наносят экскориатором сеточку (1,Оя 1,0 см) так, чтобы не былиПовреждены капилляры и на коже появилась только плазма, которую снимают сухим тампоном. На ранку, сделан"ную проксимальнее контрольной на5 см, наносят каплю липидного экстракта в изотоническом растворе БаС 3.После экспозиции, равной 1 мин, остаток капли экстракта устраняют марлевым тампоном, На обе ранки накладывают предметные стекла на 9 ч,которые меняют на вторые стекла иснимают их через 24 ч, Снятые стекла фиксируют 96 метанопом, окрашивают по Романовскому, изучают подиммер сией,П р и м е р 1, Больная О 6 лет,поступила 16.05,85 г, Получила ожогкипятком (253 поверхности тела),перенеспа шок. Была многократнообследована, в моче постоянно определялся мелкогранулированный тканевой детрит, высокая повреждаемостьклеток воспаления липидами. В результате консервативной терапии втечение 1 мес в отпечатках "кожногоокна" постоянно выявлялись нейтрофилы, макрофаги - 28, гранулоциты 4 (1), через 24 ч нейтрофилы - 60,макрофаги - 20, гранулоциж - 16 (11),Все клетки воспаления имели выраженные признаки дистрофии в виде наличия крупных вакуолей в цитоппаэме ипикноза ядер, Полярные метаболитылипидов постоянно определялись вмоче: 18,05,85 1,66 г/сут, 2,06,856,2 г/сут, 26,06.85 7,45 г/сут.П р и м е р 2. Больная Н.,9 мес. поступила в отделение с подозрением на порок развития мочевойсистемы, Девочка от 3-й беременности,вторых родов протекавших с токсикозом 1 и 2-й половины. Во время беременности в 1-й половине мать былапривита противогриппозной сывороткой.Девочка родилась весом 2800 г, до3-х мес развивалась нормально, В3 мес появилась дизурия, подъем температуры тела до 39 С, изменения вмоче, антибактериальная терапия небыаа эффективна, Поступила в тяжеломосостоянии, температура до 38 С, явления токсикоза,. частые болезненныемочеиспускания, После проведения обследования на урограммах выявлено удвоение левой почки, функция снижена,гидронефрические изменения,.мочеточиик резко расширен, извитой. На цистограмме патологии нет, имеется дефект наполнения на 5 ч, Поставлендиагноз: мегауретер верхней половиныудвоенной почки слева, уретроцеле.После проведения дезинтоксикационнойтерапии состояние несколько улучшилось, нормализовались показатели крови. Больной проведена операция геминефруретерзктомия слева, иссечениеуретроцеле, Послеоперационный периодпротекал тяжело, потребовались прямые переливания крови В 4 по 50 мп,длительная инфузионная терапия, за1377737 0,0663 БелокСплошь Ьвсе поле Нет2-3 вполезрения 15 БелокЬ ЭритроцитыПосевмочи Эритроциты Нет Посев мочи Нет 20 Кишечная 500 тыс палочка микроббактери- ных тел урия Ростанет Анализ кровиобщий Анализ кровиобщий 60 ед.6 ЗОО Норма НвТоз 30 РОЭ 12 мм/чБиохимическийанализ мочи Биохимическийанализ мочи 35 ФосфолипиФосфолипиды 0 Этаноламин Э таноламин 250 700 4 С Фосфолипаза С 0Фосфолипаза С 0,6 Фосфолипаза А 0 фосфолипаза А 0 45 Полярные метаболиты липи,48 г/сут дов Полярныеметаболиты липидов 0,58 г г/сут 50живление раны первичное. На 20-е сут выписана домой в удовлетворительном состоянии. При обследовании в динамике через б и 12 мес функция оставшей ся половины удовлетворительная. Анализ мочи - норма.Результаты исследования: Анали мочи при Анализ мочи в капостунлении тамнезе 10 териальное воспаление и нормализует, ся метаболизм.П р и м е р 3. Больная И.К., 6лет, гидронефроз, хронический пиелонефрит, Поступила с обострением,осенью. В моче определяются полярныелипиды до 500 мг/сут, кристаллы, единичные лейкоциты. После 1,5-месячного лечения в моче липиды до 100мг/сут, общее состояние удовлетворительное.П р и м е р 4. Больной П Р.,14 лет, ожог (152) кипятком. Клиническое течение тяжелое, заявлениепротекало плохо, с отторжением трансплантата кожи, с нагноением и некроэом, образованием келоидных рубцови наличием выраженной интоксикации,Липидурия в моче 1900 мг/сут.П р и м е р 5. Больной В.В.,8 лет, ожог пламенем верхних конечностей, площадью 107 Клиническоетечение средней тяжести, зпителиэация первичным натяжением без нагноения с приживлением трансплантата кожи через 8-10 дней, выписан в удовлетворительном состоянии, Липидурияв моче 230 мг/сут,П р и м е р б, Больная С,А4 года, проникающий перелом теменнойобласти, ушиб и раэмоэжение мозга,ликворея, Острый период клиническипротекал тяжело, липидурия в моче1200 мг/сут, Состояние после пластики тяжелое, длительная температура.П р и м е р 7. Больная К.С5 лет, перелом левой теменной области, ушиб головного мозга. Острый период протекал тяжело, однако температурная реакция была только одиндень, проводилась инфузионная терапия, лечили нейролептиками. Уровеньлипидов в моче 200 мг/сут.Проведена диагностика воспалитель.ного процесса с помощью предлагаемого способа у 40 детей с интерстициальным нефритом (биопсия), а такжеу больных с ожогами (ЗО чел) и скелетной травмой (10 чел,). Результатпредставлены в табл,1 и 2, Существующее абактериальное интер- стициальное воспаление осложняется ,у данного ребенка присоединением микробного воспаления и нарушенным оттоком мочи. Оперативное вмешательство, направленное на нормализацию оттока мочи, приводит к клиническому выздоровлению, ликвидируется бакВ контрольных отпечатках через 9 ч воспалительный процесс характеризоватся проявлением нейтрофилов, которые через 24 ч замещались макро" фагами. Признаков деструкции клеток не выявлялось, Результаты исследова" ния морфологической картины в отпе 5 1377чатке "опытной" кожной ранки показали наличие извращенного хемотаксичес-,кого действия биологически активныхметаболитов липидов: вместо пришед 5ших в контрольную ранку нейтрофилов(норма) через 9 ч (табл,2) в опытнойранке появляются гистиоциты и макро"фаги с признаками дистрофии,а у двухобследуемых (1,3) преобладал цитоли Отический эффект над хемотаксическим,так как практически все клетки, приходящие в опытную ранку, были разрушены в течение всего периода наблюдения (через 9 и 24 ч). В остальныхслучаях (2,4,5) во 2 й фазе воспале"ния в опытном кожном окне отмечалось сохранениеили усиление извращенного макрофагального хемотаксиса привыраженном цитолитическом эффекте 20биологически активных метаболитовлипидов. Лимфоциты оставались неизменными. Нормальной смены клетоквоспаления не наступало, Кроме того,в отпечатках кожной ранки в опыте 25отмечались в большом количестве мелко гранулированные липидные структуры, а в ряде случаев кристаллы уратов.Таким образом, исследование 30свойств, биологически активных метаболитов липидов на клетки воспаленияхп чьего у взрослых зцоровых добровольцев методом "кожного окна" свидетельствует о хемотаксической ицитолитической активности их, чтополностью подтверждает наличие зндогенного асептического воспаления ворганизме ребенка.Для идентификации и характеристики зкстрагируемых из мочи полярныхметаболитов липидов применялись следующие методы:- ИК-спектрометрия и масс-спектрометрия - показано, что основнаячасть экстрагируемых липидов мочи представлена длиноцепочечными жирными кислотами (С, о), эмульгированиыми этаноламином или мочевиной. Это было подтверждено проведением высо ковольтного электрофореза на бумаге;тонкослойная хроматографическая иа силикагеле в неполярной системе растворителей для разделения общих , пипидов (1) и в полярной системе 55 растворителей, используемой для раз 37деления фосфолипидов (2), Фракция,остающаяся на старте при применении1-й системы растворителей, во 2-йсистеме растворителей разделяется наряд фракций, которые не совпадают повеличине Р с основными .фракциямифосфолипидов;- газожидкостная хроматографияполярных метаболитов липидов показала, что 32+3,13 от общего количестважирных кислот составляет арахидоно-гвая кислота, а также отмечается высокое содержание моно- и полиненасьпценных жирных кислот.В моче здоровых детей и взрослыхполярные метаболиты липидов отсутствуют, появление незначительных количеств (до 500-800 мг/сут) не свидетельствует о наличии воспалительногопроцесса в организме, являясь разновидностью адаптации цитомембран кстрессовым ситуациям, т.е. ответнойреакцией на воздействие новых факторов окружающей среды (перемена климатических зон, сезона года), на воздействие повреждающих факторов (местный ожог, травма). Изучение действиямалых концентраций полярных метаболитав липидов в кожном окне показалоотсутствие провоспалительного действия этих концентраций: не былоотличия воспалительной реакции вранках "кожного окна" под действиемтаких доз препарата и под действиемизотонического раствора хлористогонатрия (физраствор)Предлагаемый способ определенияасептического воспалительного процесса у детей является атравматичным,доступным для воспроизведения вклинических лабораториях,Ф о р и у л а изобретенияСпособ определения асептического воспалительного процесса при повреждении ткани путем исследования биологического материала, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью снижения травматичности способа, определяют содержание в моче метаболитов липидов, экстрагируемых н-бутанолом, и при их уровне 1200 мг/сут и более при наличии хемотаксической и цитолитической активности определяют асептический воспалительный процесс,1377737 Т а б л и ц а 1Критерии диагностики воспалительного процесса у детей схирургической патологией Выраженностьдеструкции Характер хемотаксиеа в кожном окне Ноэоология Резко. повышен при на Выражена Ф личин цитолизаИнтерстициальный нефрит (40) 5,9+0,7 Ожоговая болезнь (30) 5,1+0,61 Резко повышен приналичии цитолиза Скелетная травма (10) 2,67+0,3 Повышен Умеренный, нейтрофилы 0 Здоровые дети Невыражена Таблица 2Результаты токсического действия полярных метаболитов липидовна клетки воспаления у добровольцев (метод "кожного окна") Обследуемый, В п/п Контроль 9 ч 24 ч,ЕдиничныемнлмммнннмлэозэозКоличестволипидов,г/сут нг1 Клеток нет, большое количестворазрушенных клеток Большое количество.фрагментов разрушенных нейт,рофилов Большое количество фрагментов разрушенных клеток н и-О/20 цитолиэ Выражена Выражена Единичныелимфоци ты,обильныйтканевойдетрит Фибриллы,обильныйтканевой,детрит Клеток невыявляется,обильныйтканевойдетрит. Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Я, Раушская наб., д,4/5 Заказ 865/40 Производственно нолиграфическое нредприятие, г,ужгород, ул.Проектная,4