Способ определения цистеина

)4 Е ИЗОБРЕТЕНСВИДЕТЕЛЬСТВУ ИСА АВТОРСКОМ СТЕИанализи ата мео т что, с ьности качест пириние про та натр 4,4-4,8 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(71) Киевский научно-исследовательс кий институт фармакологии и токсикологии(56) Фармакопейная статья 42-1048- 76. Цистеин.Эшворт М.Р.Ф. Титриметрические методы анализа органических соедине ний. М., "Химия", 1968, с. 553.Авторское свидетельство СССР В 545354, кл. С 01 И 31/16, 1975,Яадагдхопз Л.А ЙТ а 11, МсгойегегпппаТоп оК е-АлппоасЫез Ьу Йгесг. Тгаоп мгЬ Сорреп (11) Яц 1 рЬае Зо 1 пг.оп, МдсгосЬдщдса Асга, 1974, В 6, р. 1003-1008. 801176241 А(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯНА путем прямого титрованируемой пробы раствором сулди в присутствии индикаторл и ч а ю щ и й с я тем,целью повьппения чувствителизбирательности способа, виндикатора используют 1(2 дилазо)-нафтоли титроваводят в присутствии сульфаи буферного раствора с рН1176241 10 30 35 40 45 50 55 Индикатор ПАН представляет собой 0,1%-ный спиртовый раствор 1-(2-пиридилазо)-нафтола.0,02 И раствор сульфата меди; растворяют 0,4994 г САБО 5 Н, 0 в воде в мерной колбе емкостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. При необходимости титр полученного раствора устанавливаютйодометрически. 0,002 М раствор сульфата меди готовят разбавлением 0,02 М раствора водой 1:10. Результаты количественного определения цистеина (полумикрометод) представлены в табл.1.Микрометод титриметрического определения цистеина в препарате: около 0,03 г цистеина (точная навеска) растворяют в 100 мл воды, 1 мл полученного раствора или 1 мл 0,03% раствора цистеина (0,3 мг препарата) помещают в небольшуюколбу или пробирку, прибавляют0,5 мл буферного раствора рН = 4,6,одну каплю раствора индикатора ПАН и титруют медленно по каплям 0,002 М раствором сульфата меди до образования розово-фиолетовой окраски, не исчезающей при взбалтывании в течение более 1 мин.1 мл 0,002 И раствора сульфата меди соответствует 0,0004846 г цистеина.Результаты количественного определения цистеина,в препарате по известному способу приводятся в табл.3, результаты определения цистеина в препарате по известному способу (количество цистеина соответствует микрометоду) представлены в табл.4; П р и м е р 2. Определение цистеина в лекарственных формах.Смесь У 1, Раствор цистеина 1% - 5 мл (глазные капли) .Отбирают 0,3 мл испытуемого раствора и производят определение по описанной методике (полумикрометод).П р и м е р 2. Определение цистеина в лекарственных формах.Смесь Ф 1. Раствор цистеина 1%-5 мл (глазные капли). Отбирают 0,3 мл испытуемого раствора и проводят определение по описанной методике (полумикрометод).1176241 20 Таблица 1 Израсходовано0,02 М раствора сульфатамеди, мл Содержание цистеинав навеске, мг. мг 1,551103,42,954 98,53,053 101,24,361 96,9 1,50 Х = 100,0 0,32 Б = 2,4 3,00 0,61 Бг = 0.027 3,00 0,63+яс = + 7,6 4,50 0,90 Таблица 2 Найдено цистеина Содержание цистеинав навеске, мг Израсходовано0,002 М раствора сульфатамеди, мл Метрологические характеристики мг Х = 100,03Я = 3,34Яг = 0,033(глазные капли)Количественное определение цисте ина. К 1 мл исследуемого раствора прибавляют 9 мл воды. К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл буферного раствора рН 4,6, 2 мл насьпценного раствора сульфата нат рия, одну каплю раствора индикатора ПАН и титруют по каплям при взбалтывании 0,002 М раствором сульфата меди до устойчивого розовофиолетового окрашивания.1 мл 0,002 М раствора сульфата меди соответствует 0,0004846 г цистеина. Цистеин 0,06 гНипагин 0,02 гБорная кислота 0,4 гАскорбиновая 5 кислота 0,04 г 4В табл.5 даны результаты определения ингредиентов в лекарственных смесях с цистеином.Результаты определения цистеина с использованием буферного раствора с различной величиной рН представлены в табл. 6 и 7 (соответственно полумикрометод и микрометод).Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным обеспечивает более высокую чувствительность (чувствительность известного спасоба 1,25-7,50 мс) и избирательность, что дает возможность проведения анализа в присутствии ряда других анионов и восстановителей (например глютаминовой, аденозинтрифосфорной, аскорбиновой кислот), цистеина, продукта окисления цистеина, что имеет значение ввиду неустойчивости растворов цистеина, Метод позволяет контролировать степень разложения препарата в растворе. Найдено цистеина, Метрологическиехарактеристики(в виде 0,3%"ногораствора) Найдено цистеина,мг 1,62 0,33 1,50 3,15 0,65 3,00 0,63 3,05 3,00 0,94 4,55 4,50 Т а б л и ц а 4 Взято цистеина, мгв виде 0,03%-ногораствора ) Израсходовано0,002 М растворасульфата меди, мл Найдено цистеина,0,45 0,15 0,22 0,30 0,81 0,39 0,30 0,83 0,40 0,45 1,17 0,57 П р и м е ч а н и е. При оттитровании на 120% окраска жидкости еще фиолетовая, затем постепенно переходит (через оранжевую) в желтую. В присутствии аскорбиновой кислоты титрование невозможно, перехода окраски индикатора нет. Таблица 5 Наименованиеи количествосвязавшегося титСодержание препарата в навеске,мг Найдено,Ингредиенты рованного раствора, мл мг 0,02 М раствор сульфата меди Смесь В 1Цистеин 103,4 99,5 0,32 1,50 0,62 3,00 4,50 0,91 97,1 0,002 М растворсульфата меди Смесь В 2 1,551 2, 994 4,410 106,6 105,0 101, 7 101,2 146,6 130,8 134, 1 125,91176241 Продолжение табл.5 Наименованиеи количествосвязавшегося титСодержание преНайдено,парата в навеске,мг. Ингредиенты мг рованного раствора, мл Цистеин 0,15 0,33 106,6 0,30 О, 60" 97,0 0,45 0,89 95,7 Таблица 6 Найдено цистеина,мг 4,6 100,0 3,00 0,62 3,00 3,00 4,3 2,90 97,0 0,60 4,3 2,86 95,3 3,00 0,59 0,64 3,00 4,9 3,10 4,9 0,64 3,10 3,00 0,61 3,00 4,4 2,95 101,8 4,8 0,63 3,05 3,00 П р и м е ч а н и е. При рН 4,3 и 4,9 переход окраски несколько растянут, но титрование возможно Таблица 7 Взято цистеина, мг в виде 0,03%-ного рН раствора) Найдено цистеина,Израсходовано0,002 М растворасульфата меди, мл мг 4,6 0,63 101,8 0,30 98,3 4,3 0,61 0,30 4,3 0,30 0,60 97,0 0,65 4,9 105,0 0,30 105,0 0,65 4,9 0,30 Взято цистеина, мг Израсходовано1176241 Продолжение табл.7 Найдено цистеина, мг7 рн 4,4 0,30 0,63 0,30 0,64 4,8 П р и м е ч а н и е. При рН 4,3 и 4,9 переход окраски индикатора несколько растянут, титрование возможно. Составитель В. ШкильковаТехред,С,Мигуунова Корректор С. Шекмар Редактор С. Тккохина Заказ 5353/44 Тираж 897 Подписное ВНИИ 1 И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5