Способ определения содержания азота нерастворимого остатка в белке муки из зерна пшеницы

(54) СПО ДЕРЖАНИ ОСТАТКА В НИЦЫ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) НИЕ ИЗОБРЕ УУ СВИДЕТЕЛЬСТВ%14учно-исследовательский и агропочвоведения им Ф. Лысенкоеп., Соп 1 рагабче з 1 цбу вЬеас о 1 бгезе Ьайпд гпа оХ 1 Ье Аозтга)ап га Зсепсе, 1976, ч. 42,ОПРЕДЕЛЕНИЯ СООТА НЕРАСТВОРИМОГО КЕ МУКИ ИЗ ЗЕРНА ПШЕИзобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к способам оценки свойств клейковинных белков зерна пшеницы, Область использования - селекция пшеницы, а также растениеводство и физиология растений,Цель изобретения - повысить производительность способа определения белка нерастворимого остатка (высокомолекулярный глютенин), количество которого характеризует технологические качества зерна пшеницы, что важно для использования этого способа в селекционной работе.Сущность изобретения и его отличительные (от прототипа) признаки, Способ осуществляется следующим образом: навеску мелкоизмельченной муки из зерна пше 1809382 А 1 7) Назначение: селекция, определение войств клейковинных белков зерна пшеницы, может быть использовано в сельском хозяйстве, Навески муки иэ зерна пшеницы по 250 мг помещают в пакетики из двух слоев фильтровальной бумаги, применяемой для изготовления чайных пакетиков, и пакетики помещают в колбу и заливают 0,05 н. уксусной кислотой на ночь в соотношении навеска-растворитель 1: 100, Затем пакетики с мукой промывают тем же растворителем в соотношении 1,50 и в них определяют по методу Кьельдаля содержание азота белков, нерастворимых в уксусной кислоте (в основном высокомолекулярные глютенины), Их содержание выражают в процентах от общего азота муки, 1 ил 5 табл. ницы (просеянной через сито 0,25 мм) 250 г помещают в пакетик размером 3 х 6 см, сложенный из двух слоев фильтровальной бумаги, применяемой для изготовления чайных пакетиков (марки Раретегез Вооге Оз)пе бе Тгоуез, Франция). Пакетики помещают в колбу и заливают 0,05 н, уксусной кислотой (в соотношении навеска муки: растворитель 1: 100) и оставляют йри комнатной температуре (20 - 22) на ночь (15 ч). Затем растворитель сливают и заливают новой порцией для промывки образцов (1; 50), После промывки пакетики с навеской муки помещают в колбы Кьельдаля на 100 мл и сжигают обычным способом с концентрированной серной кислотой и селеновым катализатором для определения содержанияазота в остатке, нерастворимом в уксусной кислоте, Одновременно ставится контроль на содержание азота в бумаге и реактивах. Содержание азота в остатке определяют по микрометоду Кьельдаля и выражают в 7 ь от суммарного азота в муке, Содержание азота этого остаточного белка (в основном высокомолекулярный глютенин) характеризует свойства клейковинных белков,Предлагаемый нами способ по сравнению с прототипом (Ог 1 1 т, ОВ г 1 еп, 1976) является новым и имеет следующие преимущества: длительная процедура экстракции уксуснорастворимых белков в аппарате для механического встряхивания с последующим центрифугированием заменена помещением образцов муки на ночь в раствор уксусной кислоты в пакетиках из особой фильтровальной бумаги, причем в одну колбу (или какой-то другой сосуд) можно поместить до 50 штук и более, Это важно для проведения массовых анализов, В способе же Огй, ОВг еп (1976) экстракция каждой навески проводится в отдельной пробирке, Предлагаемый способ является более производительным, он в 2 - 3 раза экономит время и является экономически более эффективным.П р и м е р 1. Содержание азота нерастворимого остатка (после экстракции уксусной кислотой) определяли в образцах зерна яровой пшеницы, выращенной в вегетационных условиях при различной обеспеченности растений азотом и водой (табл, 1),Образцы зерна существенно различались по содержанию общего азота в муке и азота нерастворимого остатка в белке, С повышением Осуммарного белка в зерне доля азота нерастворимого остатка в белке в большинстве случаев снижалась, Так, содержание общего азота в зерне варианта 9 было выше, чем в вар,7 более, чем в 2 раза, а содержание азота нерастворимого остатка в белке при этом снижалось с 67,2 до 43,6%,П р и м е р 2, В одних и тех же образцах было определено содержание азота нерастворимого остатка два раза с интервалом 1 месяц, Как видно из данных табл, 2, полученные результаты довольно близки, коэффициент корреляции между ними составляет 0,97, что свидетельствует о стабильности результатов, получаемых даннымспособом,П р и м е р 3, Было проведено сравнение результатов определения содержание азота нерастворимого остатка нашим методом (экстракция уксуснорастворимых белков в бумажных пакетиках) и обычным методом экстракции каждой навески муки в отдельной пробирке на качалке с последующим центрифугированием,Как видно иэ данных табл. 3 результаты,полученные разными способами, очень5 близки, коэффициент корреляции равен0,91,В примере 3 приведены данные по определению азота белка, нерастворимого врастворе уксусной кислоты. обычным мето"0 дом (экстракция каждой навески в отдельной пробирке) и предложенным намиспособом экстракции из пакетиков, Для наглядности сравнения этих способов резуль-,таты изобразили в виде графика (см.15 чертеж). Как видно, полученные этими двумяспособами результаты очень близки, коэффициент корреляции составляет 0,91, Полученные нашим способом результатынесколько выше, чем обычным способом.20 Это может быть связано, с "загрязнением"низкомолекулярными белками,Результаты дисперсионного анализаопыта по повторному определению (черезмесяц) азота нерастворимого остатка (высо 25 комолекулярный глютенин).Доказано, что влияние условий выращивания (варианты опыта) на содержание азота высокомолекулярного глютенинаявляется существенным (Ефакт. = 6,15 приГо,5 теор, - 2,51), Время хранения образца втечение 1 месяца не оказало достоверноговлияния на значение рассматриваемого показателя (Гфакт. = 0,85, Ео,5 факт. = 4,41).Результаты дисперсионного анализа35 показали достоверность различий по содержанию азота нерастворимого остатка (высокомолекулярный глютенин) междувариантами вы ращивания (Гфакт. = 29,47 приГо,5 теор. 2,51), Абсолютные показатели по40 предлагаемому методу несколько выше, нокоэффициент корреляции между методамивысок (В = 0,91 при Ро,1).Э ф ф е к т и в н о с т ь . Исключение впредлагаемом способе длительной проце 45 дуры экстракции в аппарате для механического встряхивания и последующегоцентрифугирования, а проведение экстракции в пакетиках из специальной фильтровальной бумаги повышает50 производительность метода в 2 - 3 раза посравнению с прототипом (Огй, ОВг 1 ей,1976), Это увеличивает возможность применения способа на ранних этапах селекции.формула изоб ретен и яСпособ определения содержания азотанерастворимого остатка в белке муки иззерна пшеницы, предусматривающий экстракцию ниэкомолекулярных глютенинов изнавески пробы муки уксусной кислотой, разделение белковых фракций и установление1809382 Таблица 1 Содержание азота нерастворимого остатка в зерне пшеницыТаблица 2 Результаты повторного определения содержания азота нерастворимого остаткасодержания азота нерастворимого остатка в белке в; по отношению к общему белку навески пробы муки, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения производительности, процесс экстракции ведут в две стадии и совмещают с процессом разделения белковых фракций, при этом перед экстракцией навеску пробы муки размещают в пакетики из фильтровальной бумаги марки Раресегез Вооге Озпе бе Тгоуез, процессы экстракции и разделения белковых фракций на первой стадии ведут в течение 15 ч при соотношении навески пробы муки к уксусной кислоте 1: 100 с последующим сливом экстракта, а на второй с 1 адии в гечение одноразовой промывки экстрагентом навески пробы муки при соотношении последней и уксусной кислоты 1: 50 с после дующим сливом экстракта и оэолениемнерастворимого остатка непосредственно с пакетиком из фильтровальной бумаи, параллельно ведут холостой опыт для установления значения содержания азота в 10 фильтровальной бумаге и используемых реактивах, а определение содержания азота нерастворимого остатка в белке муки из зерна пшеницы осуществляют с учетом установленного значения холостого опыта,1809382 Таблица 3 ица 4А - варианты условий выращивания В - срок определения показателя А х В - взаимодействие А и В.аблиц ВАхВ рианты условий выретоды определениявзаимодействие А и иваниясокомолекулярного глюгени1809382 оставитель Н,Арцыбашеваехред ММоргентал Корректор И.Шул дактор А.Б оиэводственно-издательский комбинат "Патент", г, ужгород, ул,Гагарина, 101 Заказ 1283 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5