Способ микроклонального размножения грецкого ореха

%.( (Ь 1;Г- .-,С 11,; е гг) Г)110 ) )с с .) ц 9)ап 5О Ог 9 ап Ора 9 ат)оп ОГ А 9 г со 1 ц гав 2, И.2, 143 РАЗ 1 но- СОЕО, Что ПОт ОНО ЛЬНЫ исимОст стн в за о итие зк ланрля и НС(22) 1 Э.Оц.8916) 23.01.92. Ьюл, М. 3171) Отделение клеточной биологии и инже" ри;1 И исти)ута ботаники им, Н, Г. Холод нс,)(54) СПОСОБ МИКРОСОНА.ГУБНОГО МНОУЕНИ 1 ГРЕЦ,ОГО ОРЕХА с,57) Изобретение относится к биотехнологии, в астности к способам микроклснальИзобретение отссится к биотехнолоСи)(, в частности к спсс 06,;11 мкроклонального г.:змнй.кепи растений в культуре ткани, и может быть использовано в питомниководстве и при селекции цен)ых древесн),)к растен)1 й,Известен способ 11 икрор;змноженич Орекс плод ы х 1)у тем 1; н;ук)11",1;) д) (и ти в ы х пО,)егов из л;4)1)сто 1.Од) (1;0 1)а 1)(р 1 ь)х 3 (з)зх к) 1)в)ровс( 111)Я СЛНОИК)ЦЕ;111Х В Ч(ЗС 100) И ОС)СХ". СР-,ЦКОГО, П)ИСХО",.11 1)(С К(1)11+,. И 1 КРОЗ т ка(11 сксплта) гь ь 0 )Г(х 3)т)у 11 01 или дг)а(г, 11(.воз)сз;)1)(11". и(0.( .Сс 1),) (:)01)ац)и еГ Г (3 в". ( г е . з(, рСС( к" ,11) г С".: , . /ного размножения рпстсний в кул).туре ткани, и может быть использовано в питомниководстве и при се/1 екции цснных древесных растений. Целью иэсб)ретения является повысцение ьь)хода растений-оегенсрантов Микролональнсе размноженис осу)це.твляют путем использования н качестве материнского растеия сеянцев или привитых саженев, которые поедварительно ультипиоуют в телноте до образования трвянисть(х этиолирсванньх побегов, С этих побегов вычленяюг экспл 1,тать;, оторые затем высажлвают на пита-ельу)0 сроду Мурасиге-Скуга и кул)т 1)11 ру)ст дп получения растений-регенератов. Способ позволяет увеличить выход посадочного материала в 34 раза за счет (чле)ьц)ения количества поте)лнев)цих:-кс лснтлтов. Способ )ло;кет быть рекс.лендсва) для Сликроклонального раэ)лножс ния других древесных культур, 3 табл. побегов и растении. Из ние связа,о с а копле динений, которые, концентрации, упетаю татов в культуре,олее бл -ким к пргдл,)гаемом ц вляетс, способ размножен Ю 1 ГО Осока Гра)кого, С)11 ).ОТГ);)011 дс)П тельн.е побеги,),1)ферсн).),11 р(, ютс; з Х)ШС1(Ь)л Г 10 бсГПВ, К(ЛЬТ)1111;р Мь сргде Г 1 у )сгс-Скуго и)ц 1 сре, Вуда с)в(ами ГНК 1 О 1- О 5) 1(1 / С А 1) )Д-п(анто)0 гвой кислоты 1 слл 1 кисло)ь) 1 Сл, ГДОллзата клзсин(1 10Г;10л 0 25 30 35 40 50 55 ГК 3 0.1-) У "Г Поте;сон"с ).", истрэ- си л з ): т):. Е), и е,в "р,е. =.л в со стас Г,-ес,1с с,)1,. сТ)с).СИ дл)тсГог, ):. ки:О-,. )О 1)сглю- ц ИС; . 1 ;, у ,:.Е ТЕ) Т 1)с, с К)БЕ) О 3 Л НЬ)дг Г, .,1 уГ)л:, И д 1 .)Н ЕДС.мтком ИЗ ГЭСОГО С ПОСО,)а, уЛ.Еь);, щиЛ КО ЕЛН,И Ь Ход раСТс , й ЯиЛЯЕгСЛ 1 СПГЭс ЗЕ-:)И; )ОЭЕГОЕ), СОДЕРХСаЕ)елх е; 4 р; а Г; .е фенсльых соеелне- НИЙ, сЛ;с, с;),Е "Е) Е "ЛСГРС)сслНЬХ,ЦЕЛЕ НЭОС ;НИ ) - Пег Е Е: ИЕ ВЫХОДа срастс .;)-йегерГ)1 Е);,г 1 р и Ел е р 1, 1-)етнЕле сеян;ы в количсст ье 10 шту .апреле лесяе высая.ивают в сосуде с:е).-ей и вьра),)1 ьэю. в теплице в тем Оте. КонтролеЕл сгу,ат 50 растений, содсря;ац:.ихся; теплице. О при освеща и. Когда новые з 1 о )и;)сванные травянистые по еги достглот дл.:ны 10-15 сел, а содс.);кан)ле фенольных ссединений в них по сравнен О зелеь;ми сеижгется с 8,0 до 2,0 мг на 100 г сухо О сеса. верхушечные и боковье почк в количестве 50 шт, из этиолироганнь" побегов и -,.)О е. из зеленых стег)илизуот ,." .тнь 1 способом, высэжив От на агаозоеанную питательную среду 1.1 урэс)Ге-Скуга (1 С), в которой концентрац о слакросоле 11 уменьшают в 4 раза (1 этап культивирования, табл. 1) и выдержисают в темноте. Через неделю эксплантаты переносят на питательную среду МС, содержащуо половинную концентрацию макросолай (11 этап ".ле-.эировз:-ия) и наряду с Оргасче к 1,сека 11 флтог 01 э 1 оны.14 ЛК (г 11 - 0,г 2) мгг и ЬЛ 1 1 Елг/л (табл. 1). ,")плэ,таты пслеща)от в условия низкой освещенност 1 (1;0-200 лк), Через три недели к льтиьировэния используют среду с полной концентрацией ма кросолей (111 этап, табл. 1). а осве;цение эксплантатов увеличивают до 500 пк. В процессе культивирования выбраковывают почерневшие эксплантаты, Чсрез месяц в варианте с этиолированным почками остапссь 90 не потемневших эксплантатое, тогда как в варианте с зелеными - 88,2(табл. 2). Через три месяца в варианте с зтеОлироеан ыми почками было 20,04 начавшими рост побегов. а в варианте с зелеными - 5,8%, т. е. в 3,4 раза меньше,. П р и м е р 2. 3-летне привитые саженцы в количестве 10 ее)чк в апреле высаживают в сосуды с зев:зй и выращивают в теплице без освещения. Контролем слу)кат 5 растений, со,;баржа)еихся в теплице при освещении. Когда новые зтиолированные побеги достига.с длины 10-15 см, а содср- жаНИЕ фс)ЕОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ С НИХ ПО Са)сЕН.;О С ЗЕЛ",:НЕ,)ЛЛ С ИХСастся С 8,7 до 2,2 ",Г н 100 Г с"хоО езс;с; ве 1; уечне)е бо,с)ЕьО почки в кол,;чесгге 5 шт из э)тип лировле);),)х л 3)0 шт, из зеленых поэегов сСои)изуОТ лз)сстн,1 спссобо.л и выса);В ЛГ) Т 1 Л аа 1)Л З Осу Ю П И Т а Т С Г Ь. .) С 1,"сду МС (1 "т и куьт)гиросг)Е) в которой "Он1).О макрс)солги чь.саОт в 4 раза и ь,держивэог в тс,мноте (табл. 1). Через едал)о эксплантатпере)Осят на питательную среду 1 ЛС, содержащую половинуО коецентсэциО м; кросолей (11 этап куль)пирс .,ания) и наряду с о)ан,ескими добавками - фи) огормоны: И 1 ЛК е),01 - 0,02) Елг/л и БАП 1 Елг/л (табл, 1), 3);со)антать пс)елещаОт в условия низкой Освещенности (150-200 лк), Через т 1, недели кул.тиеировэния используют среду с полн й 1 концентрацией . акросолей.тап, табл, 1), а освещение эксплантатов увзличиваЕОт до 500 лк, Через месяц в варианте с этиолирое)аенЕли почка;ли осталссь 60,0 сне пот,мневепих эксг)лантатов, тг)гда :ак в вариан) е с зелены;ли - 42,9% (табл. 3). Че РЕЗ тРИ ь)ЕС.Ца Г ВЛРаНТЕ С ЭтИЛИРОВаННЫ- ми по хами было 10,0 начавшими рост побе Ов. а в варианте с зелеными - 2.5 с)., т. е. в 4 раза меньше.Состав питательных сред, используемых при микроклональном размножении ореха грецкого, представлен в табл. 2Количество развившихся эксплантатов при кульгивировании почек из этиолироаанных и зеленых побегов сеянцев представлено в табл. 2,Количество развившихся эксплантатов при культивировании почек их этиолированных и зеленых побегов привитых саженцев представлено в табл, 3,Способ позволяет увеличить выход размножаемого рас Гительного глатериала в 3 - 4 раза и более по сравнению с известн м. Кроме то О, при этом уменьшаются затраты . руда и сред те, поскольку умен ьшает ся количество потемневших эксплантатов, на культивирование которых затрачивалась питательная среда и рабочее время. Предлагаемый способ может быть рекомендован и р.я микроклонального размножения других древесных растений с высоким содержанием фенольных соединений в тканях.Формула изобретения Способ микроклонального размножения грецкого ореха, включающслй вычленение эксплантата от материнского растения,высадку е О на пита гсльную среду Мурасиге - Скуга и культивирование до получения побега, отличающийся тем,что,сцепью повышения выхода рас. ений-рсгснерантов, в качесве материнсксго растения испопь, СПЛ;,т-.тСРи, Е ат И;ИО;,И И, ,.;П;,У аблица 1 Состаа сре о Р 1 С иа ка. ,ло 1 аа ос культисв 1 ООГ. а е" 1, фарг/л 1 л;поп нтск 1650 1 оОО 440 82 о 5 2,5;й 1 lНЯД:, 5 ЧТОоЯО 6 Н.Ое - плата 2 -,-1 ДТАе 80,7 Н 20инь, гор 40идр,еаинозитГли ииадид НБгидпксин НСи 1 ойай кислИЛ;г гСахарозаАгаррн 57 тра":инистых по%ГАВ 1;атсри 1 сеои и сте иихф и = 1 1 р 1 олафио .Р 11 Г,;:,1;(тец;О-,О1706478 ТаблицаЗ ч тао рззаиецихся зксплантатов,рованнь Из зеленых побего рования,0 Составитель С,Куаа Техред М.Моргентч Редакто Химчук ектор И Муск МР Подписноеомитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР Москва, Ж, Руас зя, аб 4/5 твенно-издательский комбинат "Патент", г. Ужтород, ул,Гагарина, 1 О Про Заказ 212 Тир ВНИИПИ Государственного 113035, 2,6 2,9 2 5