Способ определения недостаточности печени

(54) СПОСОБ О НОСТИ ПЕЧЕНИ (57) Изобрете не, касается и может быть ческой и эксп трансплантоло повышение точ а состоян митохонд объекти ации дрий митох ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЭОБР ОЬЮ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Ереванский филиал Всесоюзногонаучного центра хирургии АМН СССР(56) Тезисы 11 научной конференции.Ереван, 1981, с.182-184. ПРЕДЕЛЕНИЯ НЕДОСТАТОЧие относится к медицилинической биохимии спользовано в клинириментальной хирургии, гии. Цель изобретения - ости способа путем учентактных энергизованных адача решается за счетоценки Н /Са+ обменавьщеленных из биопсиИзобретение относится к медицине, а именно клинической биохимии, и может быть использовано в клинической и экспериментальной хирургии, трансплантологии.Цель изобретения - повышение точности способа за счет учета состояния интактных энергизованных митохондрий.Цель достигается путем измерения величины выхода Н ионов в суспензию митохондрий, индуцированного дробными добавками СаС 1 по 25 мИ 1 до сосрованной ткани печени больных людейи животных. Для этого измеряют величины выхода Н ионов в суспензию митохондрий (индуцированного дробнымидобавками СаС 1 по 25 мкК до полногонасыщения ими спонтанного выбросаиэ митохондрий) с помощью поочередного внесения в инкубационную смесь сзаранее добавленным сукцинатом АДФи глутамата и последующим определением отношения уровня накопленного вмитохондриях кальция в присутствиисукцината после фосфорилирования АДФк его уровню после влияния на окисление сукцината глутаматом. Приуменьшении значения этого отношенияниже 1,21 ед диагностируется недостаточность печени. Способ повышает точность диагностики недостаточностипечени до 90,97, обеспечивает срочность выдачи результатов, не требуетдополнительных технических средстванализа. 2 табл. тояния насыщения им, и спонтанного выброса иэ митохондрий с помощью поочередного внесенияв инкубационную смесь с заранее добавленным сукцинатом АДФ и глутамата. Далее определяется их отношение, отражающее степень роста накопленного в митохондриях кальция в присутствии сукцината после фосфорилирования АДФ относительно его уровня после влияния на окисление сукцината углутаматом.После добавления АДФ и синтеза АТФ в присутствии сукцината слособность3 145530митохондрий к накоплению кальция увеличивается. Глутамат действует наспособность митохондрий к накоплениюкальция, изменяя интенсивность окисления сукцината(избирательно регулиру.ет активность специфического ферментаокисления сукцината). Это действиеглутамата проявляется при патологиии отсутствует в норме.Изменения способности митохондрий к накоплению кальция п действием АДФ и глутамата наиболее четко отражаются их отношением. При уменьшениизначения этого отношения ниже 1,21 диагностируется недостаточность печейи.Способ осуществляется следующимобразом.Крыс линии Вистар после подсадки20 им сердца от крыс линии Август в гетеротопическую позицию через 2" 12 сут забивают под эфирным наркозом. Крыс линии Август после введе ния им взвеси димфоцитов крови (106 клеток в объеме О, 1 мл) от крыс линии Вистар с заранее подсаженным им сердцем от крыс линии Август забивают через 3-7 сут под эфирным наркозом и быстро извлекают печень, из которой30 выделяют митохондрии общепринятым методом.У больных ,во время полостных операций по поводу резекции язвы 12- перстной кишки или рака желудка. биопсируют ткань печени, Из биоптата вы деляют митохондрии общепринятым метолом.Инкубацию митохондрий и регистра" цию величины закисления суспензии . митохондрий при выходе Н ионов под4.действием СаС 1 (добавляя дробно по 25 мкИ до состояния полного насыщения и последующего обратного выхода его) производят. в двух пробах. 1. проба : в инкубационную смесь последова тельно вводят сукцинат 9 мИ, глутамат 2 мИ, митохондрии, а затем СаС 1 , 2 проба: послед-вательно ввоФдят сукцинат 9 мИ, АДФ 200 мкМ, выжидают, пока из АДФ синтезируется 50 АТФ, а затем вносят СаС 1Измеряют величину выхода Н ионов в суспензию митохондрий в каждой из указанных смесей, т.е. после очередного добавления АДФ, который синтезируется в АХФ, и глутамата, и определяют отношение этих величин. Оно отражает степень роста накопленного в митохондриях кальция в присутствии сукцината (С) после фосфорилирования АДФ относительно его уровня после воздействия на окисление сукцината глутаматом (Гл)Дн С+АДФД Н С+ГлВремя с момента выделения митохондрий, в течение которого выдается результат анализа, составляет в среднем 20-25 мин, Для расчета укаэанного отношения нет необходимости измерять содержание митохондриального белка, При значениях 1,21 и ниже диагностируется недостаточность печени.П р и м е р 1. Крыса забита на 5-е суткиИзъята печень, выделены митохондрии и измерен выход Н+ ионов под воздействием СаС 1 в присутствии С+АДФ и С+Гл и С:Д Н С+АДФ------ =0,5 ед;ДН 3 С+ГлДН 1 С+Гл1, 45 ед (прототип),ЬНД СДиагностирована недостаточностьпечени.П р и м е р 2Крыса забита на2-е сутки. Изъята печень, выделенымитохондрии и измерен выход Н ионовпод воздействием СаС 1 в присутствииС+АДФ, С+Гл и СДН С+АДФ1 195 едьдДНС+ГлН 1 С+ Гл03 ед (прототип)дн+ сДиагностирована недостаточностьпечени.П р и м е р 3, Крыса забита на2-е сутки. Изъята печень, выделенымитохондрии и измерен выход Н" ионовпод воэдействием СаС 1 в присутствииС+АДФ, С+Гл и С;ДНС+АДФ1 48 еддуДН 1 С+ГлДН 1 С+Гл0,85 ед (прототип),1455305 Диагноз не установлен ни по предлагаемому способу, ни по прототипу, Он также не установлен по параметрам дыхания митохондрий (полярографический анализ).П р и м е р 4. Крыса забита на 3-е сутки, Изъята печень, выделены митохондрии и измерен выход Н ионов под воздействием СаС 1 в присутствии С+АДФ, С+Гл и С:ЬН 1 С+АДФ---= 0,53 ед;Д Н С+ГлДН 3 С+Гл.П р и м е р 5, Крыса забита на 5-е 20 сутки. Изъята печень, выделены митохондрии и измерен выход Н ионов под воздействием СаС 1 в присутствии С+АДФ, С+Гл и С:ДНС+АЛФ------ = 0,79 едедеДН 1 С+Гл6 НС+Гл= 0,86 ед (прототип),ДН 3 СДиагностирована недостаточность печени.П р и м е р 6, Крыса забита на 3-е сутки. Изъята печень, выделены митохондрии и измерен выход Н ионов под воздействием СаС 1 в присутствии С+АДФ, С+Гл и С: ДНС+Гл 5Диагностирована недостаточностьпечени.П р и м е р 8. Больная Д., 41 год.При клиническом и специальном обследовании поставлен диагноз язвеннойдеформации луковицы 12-перстной кишки, Проведена биопсия печени. Выделены митохондрии и измерен выход Нионов под воздействием СаС 1.Н 1 С+АДФ--- =085 еддуДН 3 С+Гл Д Н 1 С+Гл ЬН Д 2,937 ед. 25 П р и м е р 9. Больная Д., 70 лет.Гри клиническом и специальном обследовании поставлен диагноз: рак желудка. Проведена биопсия печени. Выделены митохондрии из биоптата и измерен выход Н ионов под воздействи" ем СаС 1 ДН С+АДФ- 0,646 ед; Диагностирована недостаточность 40 печени.Предлагаемым способом обследовано57 крыс. Результаты анализа приведены в табл.1 и 2.Точность диагноза недостаточности 45 печени у обследованных животных попредлагаемому способу при пересадкесердца и пересадке ли.фоцитов составляла соответственно 90,4 и 91,7 Х,в то время как точность диагноза поизвестному способу - 66,6 и 58,33,Предлагаемый способ позволяет диагностировать недостаточность печениу всех обследованных больных. 55 формула изобретения Д Н 1 С+АДФ- 1 0ЭДНС+Гл ед; Д Н 1 С+АДФ-- 1,21 ед;ДН 1 С+Гл6 Н Д С+Гл- = 0,83 ед (прототип). ДНД С Диагностирована недостаточность печени.П р и м е р 7. Больной А., 61 год, при клиническом и специальном обследовании поставлен диагноз рубцово- язвенной деформации луковицы 12- перстной кишки. Проведена биопсия печени. Выделены митохондрии из биоптата и измерен выход Н ионов под воздействием СаС 1 1,379 ед.Д 1 НС Диагностирована недостаточностьпечени. ДН 1 С+ГлДН 1 С+ Гл1,976 ед.ДНД С Способ определения недостаточности печени, включающий определение реакции митохондрий печени путем инкубаТ а б л и ц а 1 Результаты анализа Н /Саф обмена митохондрий печени по способу предлагаемому прототипу Ко Пересадк Контрол Пересадкали ль мфоцитов сердца лимфоцитов дца,86 1,4 1,9 1,3 7 1455305 8ции их в среде, содержащей сукцинат, бации, при этом в первую дополнительи регистрации выхода ионов водорода но добавляют АдФ, а во вторую - глуиз митохондрий после добавления хло- тамат, регистрируют величины выхода ристого кальция, о т л и ч а ю щ и й ионов водорода в первой и второй5с я тем, что, с целью повьппения средах, рассчитывают отношение первой точности способа за счет учета состо- величины к второй и при его значении яния интактных энергизованных мито-1,21 и ниже определяют недостаточ" хондрий, используют две среды инку- ность печени.Продолжение табл. 1 Результаты анализа Н /Сайф обмена митохондрий печени ло способу прототипу предлагаемому Пересадка онтроль оцитов лимфоцито Рдц 1,73,3 7 Отличие от контроля. блица Вид зксперимента оли-, ество очность диагоза, 7 по пособу ИВ 9 прото" предла" типу гаемому прототипу предлагаемому 21,4 66 Пересадкалимфоцитов 12 58,Составитель А.АгуреевЛ,Пчолинская Техред М.Дидык Корректор Г.Решетни еда 452/53 Тираж 788 П Государственного комитета по изобретения 113035, Москва, Ж, Раушская ЗаказВНИИПИ оизводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Контроль 2Пересадкасердца 2 1455305Количество животных с правильно установленным диагнозом поспособу писноеи открытиям при ГЕНТ ССС бд.4 Л