Способ определения количества инфузорий

(З 1) С 12 М 3/00 ЕННЫЙ НОМИТЕТ СС ЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКР ОСУДАРС ПОДЕЛАМ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЬСТ В СИОМУ СВ Н АВ учно-исследовный институт ьев А. Д рахнмеиы при био(54) ЧЕСТ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИФУЗОРИИ путем их подсчета О 01 02 0 6 07иг,1 ОУ 1 а И 1,2 /.вс(71) Украинский нательский ветеринар(56) 1. Шаблий В. Я ИгнатИспользование инфузории Тетпириформис как тест-объекталогических исследованиях в селхозяйстве. ВАСХНИЛ, М., 1978. предусматривающий предварительноевведение в анализируемую пробу субстрата реагента, о т л и ч а ю щ ис я тем, что, с целью повышенияточности, перед подсчетом анализируемую пробу субстрата с реагентомперемешивают с последующим центрифугированием в течение 15-20 минпри 1-2 тыс, об/мин и отстаивают30-60 мин, при этом в качестве реагента используют 4,0-0,6 Х-ный раствор хлористого натрия рН 7,1-7,3,а определение количества инфузорийосуществляют путем их автоматического подсчета в надосадочной жидкости.75 2ливать биологическую ценность продук= тов животноводства и кормов.Использование счетчика микрочас" тиц Пикоскеля значительно сокращает время определения, но беэ предварительной подготовки пробы проведение способа и получение точных результа -. тов невозможно из-за закупорки измерительного капилляра прибора,Концентрация раствора хлористого натрия, время, скорость центрифугирования и другие параметры подобраны экспериментальным путем.На фиг; 1 показан график зависи- . мости влияния концентрации хлористого натрия на активность инфузорий Тетрахимена пириформис; на фиг. 2 - график зависимости концентрации водородных ионов (рН) среды на активность инфузорий 1 етрахимена пириформис; на фиг, 3 - влияние режимов центрифугирования на активность инфузорий Тетрахимена пириформис.Способ заключается в следующем: 1 мл питательной среды с выросшими инфузориями разводят 50 мл 0,4- 0,6 Е-ным раствором хлористого натрия (рН 7,1-7,3), тщательно смешивают и центрифугируют 15-20 мин при 1- 2 тыс.об/мин. При этом механические частички, погибшие и частично живые инфузории осаждаются. Содержимоецентрифужных пробирок отстаивают30-60 мин, За это время живые инфу-.зории поднимаются в надосадочнуюжидкость. Далее осторожно берут15-20 мл надосадочной жидкости, вносят в стаканчик и производят подсчетна счетчике микрочастиц Пикоскеля.При этом способе инфузории не фиксируютРасчет полученного результатаосуществляют по формулеН Ь Егде и - количество инфузорий в 1 мл;Ь " коэффициент деления счетчика;Е - результат счета на цифровом.индикаторном табло;Н - коэффициент разбавления;Ч - измерительный объем приббра(для Пискокеля 0,378). 11628 Изобретение относится к биологии и может быть использовано при определении биологической ценности продуктов и кормов.Известен способ определения количества инфузорий путем их подсчета, предусматривающий предварительное введение в анализируемую пробу субстрата реагента 113.Недостатки этого способа - низкая 10 точность, длительность, трудоемкость.Целью изобретения является повьппение точности.Поставленная цель достигается тем,15 что согласно способу определения количества инфузорий путем их подсчета, предусматривающему предварительное введение в анализируемую пробу субстрата реагента, перед под счетом анализируемую пробу субстрата с реагентом перемешивают с последующим центрифугированием в течение 15- 20 мин при 1-2 тыс.об/мин и отстаивают 30-60 мин, при этом в качестве 25 реагента используют 0,4-0,6 Е-ный раствор хлористого натрия рН 7,1- 7,3, а определение количества инфузорий осуществляют путем их автоматического подсчета в надосадочной 30 жидкости Предварительная подготовка пробы, предусматривающая разведение испытуемого субстрата 0,4-0,6 Х-ным раствором хлористого натрия рН 7,1-7,3 с последующим тщательным перемешиванием,Особенно важным в определении биологической ценности продуктов с использованием тест-объекта инфузорий является установление степени 35 влияния этого продукта на жизнедеятельность инфузорий. Наличис каких- либо нежелательных веществ в продукте или низкая усвояемость белков продукта сказывается на росте и развитии инфузорий, что проявляется в виде, замедления роста, снижения активности ее движения, вплоть до гибели инфузорий . Поэтому, определяя качество продуктапрежде всего ориентируются на количество живых, активных инфузорий. Согласно суще. ствующему методу подсчета количества инфузорий в камере Фукс-Розенталя их фиксируют раствором Формалина или другого вещества (т.е. их убивают) и все имеющиеся инфузории, не исключая ранее погибших, подсчитывают,оПри осуществлении предлагаемого 55 способа определяют количество только живых инфузорий, что, в свою очередь дает возможность более точно устанавобуславливает сохранение максимальной биологической активности инфузорий Тетрахимена пириформис. Крометого, отделение испытуемых продуктовот выросших инфузорий путем центрифугирования в течение 15-20 мин при1-2 тыс,об/мин с последующим отстаиванием 30-60 мин, отбором 15-20 миннадосадочной жидкости со всплывшимиинфузориями для целлоскопическогосчета позволяет получить точныйдостоверный результат. Посколькув определенных продуктах и кормахмогут присутствовать те или иныетоксические агенты становится очевидным, что погибшие в результатеэтого инфузории являются фоном, затрудняющим дать .достоверную оценку.Поэтому, учитывая живые, активныеинфузории и исключая погибшие, исследователь получает возможность датьнаиболее объективное заключение покачеству испытуемого продукта всравнении с контрольным продуктомили стандартом.П р и м е р. Необходимо выбратьнаиболее рациональную технологиюизготовления корейки. Корейка В 1созревание при 2-4 С; корейка В 2 -созревание при 15-18 С; корейкаВ 3 - созревание при 40-43 С; контроль - созревание при 0-3 С .Этот вопрос решают путем определения биологической ценности натест-объекте инфузории Тетрахименапириформис.Берут 4 навески 0,9; 0,6; 0,3 и0,15 мг/мл, вносят в питательнуюсреду, выращивают согласно известнойметодики и подсчитывают известным ипредлагаемыми способами,В первом случае исполнитель заправляет камеру Фукса.-Розенталя ипод микроскопом считает инфузориив 10 квадратах. Всего необходимоподсчитать 4 пробы х 4 разведения =16 проб (160 квадратов),Для получения достоверных результатов необходимо опыт провести в3 повторностях, 16 х 3=48 проб (480квадратов). Для подсчета 48 пробнеобходимо 7-8 ч.Согласно предлагаемому исследуемые пробы разводят раствором хлорис 628754того натрия, смешивают и центрифугируют (30-40 мин) отстаивают (3060 мин) . Подсчет на счетчике микрочастиц 48 проб 15-20 мин,Таким образом, один человек свободно может за день исследовать 90100 проб.Непроизводительные затраты времени (переход от центрифуги до счетчи 1 О ка микрочастиц, заправка стаканчиков и т.д.) 20-30 мин.Итого 90-150 мин.Полученные результаты приведеныв таблице.15 Следовательно, наиболее рациональной является технология, по которойизготавливают корейку У 2,Проведенные исследования по изучению активности инфузорий в зависи 2 О мости от концентрации хлористогонатрия (фиг. 1) позволяют судить отом, что наиболее желательной является концентрация 0,4-0,67. Удовлетворительная активность сохраняется25 до концентрации 0,9 , а концентрация выше 1,27. является для инфузорий губительной.Концентрация ионов водорода (рН)среды (фиг. 2) имеет пик активностиЗО для инфузории в пределах 7,1-7,3.Среда рН ниже 5 вызывает резкуюатаксию инфузорий. Изменение рНсреды в щелочную сторону являетсяудовлетворительной до рН 8,0, послеЗ 5 чего крайне снижается активность,появляются атипичные формы инфузо-рий гПоявление атипичных форм такжеуказывает на отрицате.ьное действие40 запредельных параметров среды. Этообстоятельство учитывают при отработке различных параметров способа,Центрифугирование взвеси инфузорий при 1-2 тыс.об/мин не оказывает45 отрицательного воздействия на активность инфузорий (фиг. 37. Таким образом, предлагаемый способявляется более точным, достоверным,50быстрым и менее трудоемким по сравнению с известным камерным способомподсчета количества инфузорий, т.е,повышает эффективность методов токсико-биологической оценки,55одсчет счетчиком микро- частиц КЭБ ОБЦ Количество . КЭБ ОБЦ инфузорий в 1 млКоличествоинфузорийв 1 мн ЗО УУ 60 70 ВО 90 щФрау Рнсредо Корейка У 1 3,9 1 Оф Корейка У 2 4,3 10 ф Корейка РЗ 2,7 1 О Контрольный 33 10 1904 18 4,0 1 О 2430 130 4,4 10 883 81 2 6 10+ 931 100 3,21 О 1952 125 2486 137 850 81 902 1001162875 щыс.о 5)ти Составитель Н, АрцыбашеваРедактор В, Иванова Техред М.Надь Корректор И. Э.дейи 525ого комитетаий и открытииаушская наб ПодписноеСССР 4/5 ал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 аказ 4065/25 ВНИИПИ Го по дел 113035, Моск