Способ получения бактериального препарата мацерирующего действия для мочки льна

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК О АНИЕ ИЗОБРЕТЕ ОРСИОМ ИДЕТЕЛЬСТВ Р 39.Шурупова и 10-30 5-15 О, 5-1,0 3-10 кт 2-100,16-0,3 млбактерий и коэффициен,7-0,9, а выдеральной жидкосылительной суш обм.Ъ хлористо ний го нат Сл СУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии(56) 1.Аврова Н.П, Синтез пектолити ческих ферментов Совсгдцп Ге 1- ьгпецв и гидролиз ими пектоновых веществ льносоломы.-Прикладная биохимия и микробиология, 1975, Р 11, с. 735.2. Авторское свидетельство СССР У 293045, кл. С 12 Й 1/02, 1969. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАБТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА МАПЕРИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ МОЧКИ ЛЬНА, предусматривающий выращивание бектерий С 8 оз 1- Г 1 с)10 п Я е г зечв в анаэробных условиях на жидкой питательной среде, содержащей источник углерода, сернокислый аммоний в качестве источника азота, источник кальция, хлорное железо и кукурузный экстрак ЯО 1049 3(5 П С 12 й 1/02; С 12 в качестве стимулятора роста, с ос ледующим выделением бактериальны спор из культуральной жидкости сушкой и смешиванием полученного концентрата спор с мелом, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его качества, в качестве источника углерода используют крахмал и кукурузную муку, а в качестве источника кальция - приро,".- ный мел, при содержании компонентове, г/л водопровод в питательной средной воды:КрахмалКукурузная мукаСернокислый аммМел природныйКукурузный экст50-ный растворхлорного железапри этом выращиванведут при рН 5,8-7те заполнения средление спор из культи осуществляют ракой в присутствииИзобретение относится к техни" ческой микробиологии, В частности к способам производства бактериальных препаратов, и может быть использовано для ускорения мочки льна, повышения выхода длинного Волокна и улучшения его качества.Известен способ получения бактериального препарата путем культивирования ИВЬ 1 и д 1( и ЕеГВ 1 пео.и " 1 . Недостаком этого способа являетсян из к ий выход преп ара та .Наиболее близким к изобретениюпо технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения бактериального препарата мацерирующего действия для мочки льна,предусматривающий выращивание бактерий 0 Рсс Ь и-,с 1 ип ее РВи 6(.га В анаэробных услов иях на жидкой пита тель нойсреде, содержащей источник углерода,сернокисль(й аммоний В качестве источника азота, источник кальция,хлорное железо и кукурузный экстрактв качестве стимулятора роста, с последующим Выделением бактериальпыхсгор из культуральной жидкости сушксй и смешиванием полученного кон -центрата спор с мелом.В качестве источника углеродаиспользуют сухую картофельную мезгу, выделение концентрата спор осуществляют сепарированием с последующей калориферной сушкой .2.,Недостатки известного способаосновной компонент питательной средыСухая картофельная мезга с содержанием крахмала 50-60 Ъ) не выпускаетсязаводским способом. Возить для про-.Иэводства Влажкую мезгу (70-80 Ъ-нойвлажности) экономически невыгодно.Кроме того, картофель часто подвергается замораживанию при транспортировке и заболеваниям при хранении. Мезга из такого картофеля Вообще становится непригодной для выращивания микроорганизмов. Мезга нестандартна по составу, что такжевлияет на Выход препарата,Кроме того, применение сепарирования культуральной жидкости при1 тделении спор С 8. ".е 1 пе(п 1 приводитк гибели 55-б 8 Ъ спор, так какС 8.хе 0 з 1 пеип - строгий анаэроб, ивоздействие кислорода воздуха наспоры приводит к гибели большогоих количества,30 При этом следующая за сепарированием калориферная сушка также вызыВает гибель 20-35 Ъ спор, Общие потери спор при этом способе производства 60 препарата составляют 80-90 Ъ при среднем титре спор в ферментаторе 50-б 0 млн. в 1 мл культуральной жидкости, т.е. выход спор в препарате очень низок . 65 хоца пел(1 В Огэ:Родук 1 а и повьп 11 ениее Г г:с;.и г (:г с 1 и(ОстаЗЛЕННая ЕЛЬ ЛОГО ТИгпа,:ТСЯТЕМТС Ссгла С 1 г С .(,О," ПО;,ЧЕНИЯба(те иа.".ь о Г( ,"ат".:.: ап:рируюуСМа О 11 всЕ 1 у .:ЫсоаИва:ИЕ 1 ВК ТЕ -С 11 ОВ ;Я с 1ж - ,гп;(Л 11 ,са ТЕЛЬНО гД,Е ССДЕРж",.Ей ИС ТОН ИК УГЛЕСгДа .серно(ислый амОний В:(ачес"Ва ис"Оч, ИКа саэота, ИСТОЧНИК КаЛЬ 1 тИЯ, ХпоРное железо и 1(укурузный экстрактВ КПЧЕСТВЕ СТИМУЛсТОРа РОСТа р Сг Оследую(Нм Выцелением бактериальНЬХ СПОР ИЗ КУЛЬ" УРаЛЬНОй жИгКОСТИСУМСКОЙ И СМ(:.:.,Вс 1 НИЕМ ПОЛУЧЕННОГОконцентрата стОр с мез(ом,. ис.Ользу 1(т кр,х-л .". 1( кур, з 1 ую .:, (у ка.Оцн - : - В качзс- е,, О.ы 1 3 кальВ СЦ,-.1 0-30т1 Гг, -0;.,и,; .сс илит"иа Г )ет 1 стаз;1 е: В вице 1 е с та ив - ных (леток 1 т; - ,б;, - ,1ПрОцссо нь(ра"ива 1 Няфср -5 с. т при 35 - 37 ", (Оз 1 сфициенте за 1 О,111:;1 к" я г-)г-тс,1: - 0 .:срн ссоепы -"8 - 7, 2, В ас Э".О-"-,; уГЛОВИ 1 Х бЕЗпргме:;ив .н 11 я 11 ри изб-., точноа В(1 е -нии О, 2-0, 1 ати,да,под:(истнето я,. для усредненияреды Пере". 3 О - ч(1 ч- .ращ 1 гаа 11 ия далее через кап,сье б-.- , несбходидобавляю .; Ористый .,-,. рий В коли- ЧЕСТВЕ . " -.-. РЕЗс 7,(Ь аЬ ИОП Такийэтих Опора:.и приведены " табл, 2.этот СПОСОб 1 сОЗЗО.НЕТ Полу. ТИТЬ С УХОЙ КОНЦЕ НтвсаТ С СО ПЕР (а НИЕ.". СПОР 8-15 м.с 1 рд/, Кокцен-".:т г гац а-ти 104953820эуют мелом до содержания спор в, нем 0,8-1,2 млрд/г.Выращивание продуцента на предлагаемой среде и применение распылительного способа высушивания повышает жизнеспособность спор, увеличивает срок хранения препарата с 8 мес.до 1-1,5 лет без снижения количества спор и позволяет уменьшить дозупрепарата в мочке льна с 1 до 0,5 кгльносоломы. 10Влияние способа сушки спор Се, ЕеГ 1 еигп на сохранение Их титра впрепарате показано в табл.З.Влияние способа получения препарата на мочку льна показано в 15табл.4.П р и м е р 1 . Исходная культураСЕ, ЕеЕз 1 пеип хранится в ампулах подвакуумом в лиофильно высушенном состоянии,Для приготовления посевногоматериала ампулу вскрывают, проверяют на чистоту посевом на мясо-пептонный бульон. Содержимое ампулы сьь:вают 10 мл стерильной водопроводной воды и засевают по 8,1 об. в питательную среду, в которой выращиваюткультуру в анаэробных условиях 2 сут.при 35-37 С.Отбродившую культуру выннуают иэтермостата, подсчитывают количество 30спор с помощью камеры Горяева, микроскопируют и используют в дальнейшем в качестве посевного материаладля ферментеров.Для массового выращивания СО.ЕеЕ- ,35Ыпеип в Ферментерах применяется питательная среда следующего состава,г/л: картофельный или кукурузныйкрахмал 19 (на абсолютно сухойвес); мука кукурузная 7 (на абсолютно сухой вес); экстракт кукурузный 4 (на технический вес); мелприродный обогащенный 6 и апжонийсернокислый 1. Среда содержит такжеО,З мл 50-ного раствора хлорногожелеза и 1 л водопроводной воды,Стерилизуют в течение 1 ч при 2 ати,РН после стерилизации 5,8. Коэффициент заполнения среды в ферментере0,8.50 Для засева ферментера используют посевной материал в виде вегетативных клеток в количестве 2 отобъема среды в ферментере или в виде спор в количестве 0,1-0,2Выращивание ведут в анаэробных условиях без перемешивания среды при 35-37 С с избыточным давлением в ферментере 0,2-0,4 ати,В процессе развития бактерий при 60 сбраживании крахмала, выделяютсягазообразные продукты (СО и Н 2) и среда подкисляется, Для усредне- ния среды через 30 ч выращиванип и далее через каждые 6 ч необходимо 65 включать мешалку на 0,5 мин. В конце ферментации в 1 мл культуральной жидкости содержится 250-300 млн.спор СЕ. Ее 0пеип .Затем в культуральную жидкость добавляют 1 об, хлористбго натрия и проводят распылительное высушивание.Сухой концентрат с содержанием спор 8-15 млрдуг размалывают и разбавляют мелом. Количествоспор в готовом препарате должносоставлять 0,8-1,2 млрд./г. Полученный сухой препарат расфасовывают в бумажные машки.Выход спор в препарате составляет 20-40к титру спор в культуральной жидкости.П р и м е р 2. Для массового вы.ращивания И. Ее Р 1 пеип в ферметерах использовалась питательная среда следующего состава, г/л водопроводной воды; крахмал картофельный или кукурузный 10 (на абсолютно сухой вес), кукурузная мука 5 (на абсолютно сухой вес), кукурузный экстракт 2 (на технический вес),мел природный обогащенный 3 и аммоний сернокислый 0,5.Среда содержит также 0,16 мл 50- ного раствора хлорного железа, Среду стерилизовали в течение 1 ч при 2 ати. рН после стерилизации 5,8-7,2. Коэффициент заполнения среды в фер" ментере О, 9. В конце ферментации в 1 мл культуральной жидкости содержалось 140200 МЛН. аПОП С ЕЕЕЗ 1 пЕип, ЧтО В2,8 - 4 раза больше по сравнению сизвестным способом.П р и м е р 3. Для массового выращивания Се,Еееь 1 пеип в ферментерахиспользовалась питательная среда следующего состава,г/л водопроводной во-.ды. крахмал картофельный или кукурузный 30 (на абсолютно сухой вес),кукурузная мука 15 (на абсолютно сухойвес), кукурузный экстракт 10 (натехнический вес, мел природный обогащенный 10 и аммоний сернокислый 1.Среда содержит также О,З мл 50-ногораствора. Среду стерилизовали в течение 1 ч при 2 ати. РН после стерилизации 5,8-7,2. Коэффициент заполнения среды в ферментере 0,7,В конце ферментации в 1 мл культу.ральной жидкости содержалось 130200 млн, спор СВ,ЕеЕэпеипч, что в2-4 раза больше по сравнению с известныч способом,Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет увеличить содержание спор и культуральной жидкости в 5-6 раэ, а вготовом препарате - в 4-6 раэ.Срокхранения препарата увеличиваетсяс 8 мес, до 1-1,5 лет, а время мочкильна сокращается на 10 ч.1049538 Таблица 1 Титр спор в ферментере млн/мл Количество посевного материала, % 280 220 Споры 200 4 280 0,1 270 Вариант Выход спор при калориферной сушке, % Выход спор при распылительной сушке, % 15-17 25-30 15-17 40 Сушка Титр спор через 1,5 года через 8 мес. через 1 год исходный Калорифернан 1,0 0,820 0,750 Распы"лительная 1,0 1,0 1,0 1,0 Вегетативные клетки 2.Вариант Доза препарата, кг Скорость мочки ч Ускорение мочки Контроль(без препарата 72 Препаратпо известному способу 20 14 58 1,0 Препаратпо предлагаемомуспособу 33 24 0,5 Заказ 8361/28 Тираж 523 П эдп ис ное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5