Способ определения производных бис-( -хлорэтиламина)

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН А ц 11 С 01 Я 31 08 АНИЕ ИЭ ТЕНИ ОРСКР 25 Н. Е. Коз в армацевтически 8) видетельство 19/04, 15.12 М. Н. и др. й хроматогра орых произво териалы конф х. 1 ММ,И, М,.ф 0.Примефии дных ерен,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(56)1.Авторское спо.заявке 9 321652. Колочевскаянение тонкослойнодля анализа некотхлорэтиламина. Мации молодых ученыс. 93-94,(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БИС- (-ХЛОРЭТИЛ )-АМИНА путемтонкослойной хроматографии в смесирастворителей с последующей обработкой полученной хроматограммы химичес-ким реагентом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения селективности и чувствительности способа,в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта,уксусной кислоты и воды в соотношении (1-3): 1:(4-6 ), в качестве химического реагента используют 2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-пиридини обработку ведут при 99-100 С ирН 11-12.гИзобретение относится к аналити"ческой химии, а именно к способаманализа производных бис-(р -хлорзтил )амина, и может быть использовано взаводских, контрольно-аналитическихлабораториях и в аптеках 5Известен способ определения производных бид-(ф- хлорэтил )-амина путем обработки анализируемой пробыраствором 1-изониконил-изопропилгкдразина при рН 10-11 и 90-100 С (1 3, 10Недостаток способа состоит в егоотносительно невысокой точности.Наиболее близким по техническойсущности и достигаемому результатуявляется способ определения производных бис-3-хлорэтил)-амина путемтонкослойной хроматографии анализируемой пробы в смеси растворителей,содержащей хлороформ, метанол споследующим проявленкем хроматограммы реактивом Драгендорфа (2).Недостатком способа является егонелесективность, связанная с тем,что продукты его гидролиза дают аналогичную Реакцию, и невысокая чувствительность (0,20-0,28 мг/мл ).Пель изобретения - повышени селективности и чувствительности способа.Поставленная цель достигаетсясогласно способу определения производных бис-(р-хлорэтил )-амина путемтонкослойной хроматографии анализируемой пробы в смеси растворителейн-бутиловый спирт, уксусная кислотаи вода в соотношении 1-3:1:4-6, с по следующей обработкой хроматограммы2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )- -пиркдином при 99-100 С и рН 11-12,в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта, 40уксусной кислоты и воды в соотношении (1-3):1;(4-6 ), в качестве реагента используют 2-метил-окси,5-ди-(оксиметил )-пиркдин и .обработку ведут при 99-100 С и рН 11-12. 45П р и м е р 1, Определение сарколиэина.Реактивы и растворители: 5 раствор 2-метил-З-окси,5 ди-(оксиметил)- -пиридкна гидрохлорида, 20-ный раствор едкого натра, смесь н-бутиловогоспирта,. уксусной кислоты, воды в соотношении 2;1,"5, ацетон, 1-ные растворы сарколизина, хлорбутина допана,асалия, циклофосфана в ацетоне,На линию старта хроматографическойбумаги, диаметром 8 см на расстоянии23 см один от другого наносят 0,5 мл1-ного раствора исследуемых препаратов, Высушивают и в подвижную Фазу 60погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы,Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положенке растворителя и подсушивают. Высушеннь.е хроматограммы просматривают в уф-свете и отмечают положениепятен, затем проявляют путем последовательного погружения в 5-ныйраствор 2-метил-З-окси,5-ди:(оксиметил )-пиридина гидрохлоркдаи 20-ный раствор едкого натра на20-30 с. Хроматограммы высушиваютв сушильном шкафу при 100 ОС и отмечают положение пятна,На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждаетсядвумя способами. Элюат имеет полосупоглощения сЛ у 360 нм, что соответствует глюконовому альдегиду. Измеряют на спектрометре СфА оптическую плотность при 3 =360 нм.Г р и м е р 2, Определение хлорбутина,Реактивы и растворители: 5-ныйраствор 2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-пкридина гидрохлорида, 20-ныйраствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, водыв соотношении 2:1:5, ацетон, 1-ныерастворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне,На линию старта хроматографкческой бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят0,5 мл 1-ного раствора исследуемыхпрепаратов, Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положениерастворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы просматривают вУф-свете и отмечают положение пятен,а затем проявляют путем последовательного погружения в 5-ный раствор2-метил-З-окси,5-ди-оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20-ный раствор едкого натра на 20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шка-фу при 100 С и отмечают положениепятна.На хроматограмме имеется пятно,наличие которого подтверждается двумяспособами. Элюат имеет полосу поглощения сЛ=360 нм, что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряютна спектрофотометре СфА оптическуюплотность при Л,=360 .нм.П р и м е р 3. Определение допана.Реактивы и растворители: 5-ныйраствор 2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-киридина гидрохлорида, 20-ныйраствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды всоотношении 2:1:5, ацетон, 1-ныерастворы сарколизина, хлорбутина,допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят0,5 мл 1-ного раствора исследуемыхпрепаратов. Высушивают и в подвижную:фазу погружают нижний конец жгутика,проходящего через центр круговой хроматограммы.5Через 10-15 мин хроматограммувынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают.Высушенные хроматограммы просматри.вают в УФ-свете и отмечают положе- Оние пятен, а затем проявляют путемпоследовательного погружения в 5-ныйраствор 2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и20-ный раствор едкого натра на 20- 3530 с. Хроматограммы высушивают всушильном шкафу при 100 С и отмечают положение пятна.На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается одвумя способами. Элюат имеет полосупоглощения с Л =360 нм, что соответствует глютаконовому альдегиду.Измеряют на спектрофотометре СФАоптическую плотность приЛ =360 нм.пахП р и м е р 4. Определение асалея.Реактивы и растворители: 5-ныйраствор 2-метил-З-окси,5-ди-(оксимети;,)-пиридина гидрохлорида,20-ныйраствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон,1-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфанав ацетоне.На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят 0,5 мл 1-ного раствора исследуемых препаратов, Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец 40жгутика, проходящего через центркруговой хроматограмьь,Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положениерастворителя и подсушивают. ВысушенИь 1 е хроматограммь просматривают в УФсвете и отмечают положение пятен, азатем проявляют путем последовательного погружения в 5-ный раствор2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20-ныйраствор едкого натра на 20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкаоФу при 100 С и отмечают положениепятна.На хроматограмме имеется одно пятно,55наличие которого подтверждается двумяспособами, Элюат имеет пол 6 су поглощения с 3 д=360 нм, что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФА оптическую плотность приЛ =360 нм.П р и м е р 5; Определение цикло" фосфана.Реактивы и растворители: 5-ный раствор 2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида,20-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон,1-ные растворысарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на растоянии 2-3 см один от другого наносят 0,5 мл 1-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и в подвижную Фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.Через 10-15 мин хроматограмму вынимаютиз камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы просматривают в УФ-свете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5-ный раствор 2-метил-З-окси,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20-ный раствор едкого натра на 20- 30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100 С и отмечают положение пятна.На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элкат имеет полосу поглошения с Л =360 нмъсХУ что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФА оптическую плотность при Л, ц= 360 нм.Результаты спектрофотометрического определения алкилирующих препаратов приведены в табл. 1.Данные чувствительности реакций приведены в табл. 2.Сравнительные данные количественного содержания противоопухолевых препаратов и продуктов из гидролиза при выборе оптимального соотношения растворителей приведены в табл, 3.Использование предлагаемого способа анализа препаратов противоопухолевого назначения по сравнению с известным способом обладает большей селективностью и чувствительностью.1027608 Таблица 1 Содержание,Сарколизин 98,73 Хлорбутин 1 Таблица 2 Препарат Чувствительность, по способу, мг/мл известному предлагаемому 0,20 0,18 0,17 0,28 0,26 Таблица 3 Препарат Соотношение рас-.творителей Т не выше 10 Со Т = 20-25 С с истекшим сро"ком годности активно- продукго веще- та гидства ролиза активного продуквещества та гид- ролиза активно продукго ве- та гидщества ролиза 80,5 17,8 1:1:6 2,7 34,5 91,7 39,4 21,8 5,3 1:1:б 90,9 90,1 4 О, 2 18,5 3,8 1:1;б 91,4 92,7 15,1 42,4 92;1 1:1:б 93,2 5,2 11,4:Асалей ДопанАсалейЦиклофосфан 97,97 99,13 99,02 98,15 Количественное содержание при 0,033 0,040 0,010 0,084 0,025, 7 Продолжение, табл, 3 Количественное содержание при Препарат Т = 20-25 С Т не выше 10 С с истекшим сроком годности активноговещества активного вещества 53,5 2:1:5 Циклофосфан 98,1 91,2 7,5 43,2 Относительная ошибка+5,7+7,1 СОставитель С. ХованскаяТехред М,Коштура Корректор, Л. Повх Редактор С. Юско Заказ 4730/48 Тираж 873 . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ХлорбутинДопанАсалей Соотношение рас-,творите- ,лей продуктов гидролиза активноПродукго ве- тов гидщества ролиза 80,1 80,9 продуктов гидролиза