Способ определения биогенности породы отвалов угольных шахт

(23) Приоритет Опубликовано 15,04,82. Бюллетень %14Вата опубликования описания 15. 04. 82 пв делам нзвбретеннй н открытий(72) Авторы изобретения Всесоюзный научно-исследовательский и проектно-,конструкторский институт окруиающей-прйродщщ": 1среды в угольной промышленности(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОГЕННОСТИ ПОРОДЫ ОТВАЛОВ УГОЛЪНЫХ ШАХТ Изобретение относится к сельскому и лесному хозяйству, а именно к определению биогенности породы промышленных отвалов при их биологической рекультивации.Известен способ индикации микроор 5 ганиэмов группы кишечной палочки в воде на питательных подкладках,изготовленных излистовой фильтровальной бумаги пропитанных мясо-пептоннымЭ0 бульоном Хотингера с индикатором тетразолий хлористым, Выращивание микроорганизмов производится при 30- 37 С в течение 10-14 цНедостатком этого способа является то, цто он позволяет определять только бактерии группы кишечной палочки и используется как ориентировочный, так как имеет большую ошибку определения.20 Известен способ индикации бактерийна агариэованных средах в чашкахПетри (метод Коха), -который заключается в том, что готовится ряд разведений мясо-пептонного агара встерильных пробирках (методпредельных разведений), после чеговысевается определенный объем (1 мл)исследуемой суспензии в чашки Петри,заполненные (10 мл) мясо-пептоннымагаром. Выращивание бактерий производится в термостате при 30 С в течение 2-3 сут, затем подсчитываетсяколичество выросших колоний 12,Недостатками данного способа являются большой расход питательной среды, большое количество специальнойпосуды и длительность определения,цто создает определенные неудобствав экспедиционных условияхЦель изобретения - ускорение определения биогенности пород отваловугольных шахт при биологической рекультивации.Поставленная цель достигается тем,что посев суспензии пород производятна полоски бильтровальной бумаги,3 920070 пропитанной 3-53-ным мясо-пептонным агаром, содержащим индикатор 2,3,5- -трифенилтетразолий хлорид.Сапрофитные микроорганизмы развивающиеся на мясо-пептонном агаре,дают представление об общей биогенности почвы, так как микроорганизмы, расту" щие на мясо-пептонном агаре, входят в состав различных сообществ (микроорганизмы, разлагающие органоминеральный комплекс породы) и являются диагностическим показателем биогенности отвальных пород, подвергаемых рекультивацииДлл индикации биогенности используют обеззоленные Фильтры с белой лентой (среднефильтрующие), при пропитке которых мясо-пептонный агар рас пределяется равномерно по фильтру,При применении обеззоленных Фильтров с синей лентой (медленнофильтрующие) и фильтров с красной лентой (быстрофильтрующие), как показывают исследования, мясо-пептонный агар распределяется не равномерно, что влияет на рост микроорганизмов и сказывается на точности анализов.На основании экспериментальных цанных установлено, что на индикаторчых питательных бумажках, пропитанных мясо-пептонным агаром в кЪнцентрации меньше 3, рост сапрофитных микроорганизмов не обнаруживается, так как для их развития недостаточно питательного субстрата, Мясо-пептонный агар в концентрации больше 53 не впитывается фильтровальной бумажкойВыращивание сапрофитных микроорганизмов на индикаторных питательных бумажках обеспечивает быстрое определение биогенности породы в течение 5-9 ч Методика проведения испытаний заключается в следующем.Полоски Фильтровальной бумаги(2 х 8,5 см)(обеззоленные фильтры с белой лентой) выдерживают в боксе под бактерицидными лампами в течение 10 мин (по 5 мин на каждой стороне). Мясо-пептонный агар стерилизуют во автоклаве в течение 20 мин, при 120 СВодный раствор индикатора 2,3,5-трифенилтетразолий хлорида в концентрации 23 стерилизуют в пробирках отдельно. Затем приливают к мясо-пептонному агару до концентрации индикатора0,2 , Полоски фильтровальной бумаги, прикрепленные держателем к 5 10 0 25 30 35 40 45 50 штативуопускают Б стерильный мясопептанныи агар с индикаторомПриэтом полоски фильтравальной бумагивпитывают мяса"пептанный агар в течение 5 ч " 0,6-0,8 г, Пропитываниеполосок Фильтровальной бумаги произ. -водят при включенных облучателях,Полоски пропитанной фильтровальнойбумаги перекладывают на стерильнуюОбумагу и подсушивают при 60 С в течение 1 ч в сушильном шкафу. Готовятсуспензию породы (1 г) в стерильнойваде (100 мл) и пропитывают ею полоски полученных индикаторных бумажекв течение 5-7 с, запаивают лх в стерильные полиэтиленовые пакетики ипомещают в термастат при 28-30 СоЧерез 5 ч подсчитывают рост бзктериальных колоний с помощью микроскопа,П р и м е р 1. Определяется биогенность токсичной породы с отвалашихты, состоящей из аргиллитов, алевролитов и кварцевых песчанников свключениями пирита и содержащей следующие элементы, 2: общий углерод 9,9;общее железо 47,7; общий алюминий8,7; общий азот 0,21; общая сера 1,1;фосфаты 1,92; калий 0,01; медь0,002; бор 0,17; марганец 0,27. Образцы породы отбирают перед рекультивационными работами и после окультуривания породы с глубины,в см: 0-5,5-10, 10-20, Затем готовят водные суспензии. из расчета 1 г породы на100 мл стерильной дистиллированнойводы.Выращивание и индикацию сапрофитныхмикроорганизмов проводят на индикаторных бумажках, пропитанных 5-ныммясо-пептонным агаром с индикатором2,3,5-трифенилтетразолием хлоридом,по методике, описанной выше. Времявыращивания микроорганизмов на индикаторных бумажках 5 ч,П р и м е р 2 . Определяют биогенность пород с помощью индикаторных бумажек, пропитанных ч.1-ныммясо-пептонным агаром, с индикатором 2,3,5-трифенилтетразолием хлоридом. Время выращивания микроорганизмов 7 ч. П р и м е р 3 Определяют биогенность пород путем выращивания микроорганизмов на индикаторных бумажках,пропитанных 3;-ным мясо-пептоннымагаром с индикатором 2,3,5-трифенилтетразолием хлоридом. Время выращивания микроорганизмов 9 ч,920070 Т а б л и ц а 1 11 "0 Количество сапрофитных микро- организмов 0 ь,мг/100 г Глубинавзятияпородного образ"ца, см Гумус,Выросших на индикаторных бумажка с содержанием агара,Выросшихв чашкахПетри 0-5 2,495-10 2,28 10-20 1,99 0-5 2,62 5-10 2,19 10-20 1,92 2,16 0-5 5-10 1,98 10-20 1,80 низкой йиогенностью, т,е. в породе содержится незначительное количество сапрофитных микроорганизмов, что подтверждается невысоким содержанием гумуса, азота и фосфора в породе.В табл. 2 представлены данные (по примерам 1-3) по определению биогенности отвальной породы, подвергнутой биологической рекультивации.Таблица 2 В табл. 1 представлены данные (по примерам 1 - 3) по определению биогенности в исходной отвальной породе до рекультивации, предложенным методом и методом с выращиванием микроорганизмов в чашках Петри. Из данных табл, 1 видно, что исходная порода отвала характеризуется Гуму Г,омг/100 Глуб Количество сапрофитных микро- организмовв йщ уо яти ородноо образа, см торных бумажкахагара,ыросших на индик с содержанием Выросшив чашкаПетри 0,1 7 10"920070 формула изобретения Составитель Д, СатароваРедактор Н.Киштулинец Техред Т,Маточка Корректор Л. Бокшан Заказ 2267/23 Тираж 505 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,Из табл, 2 видно, что в породе отвала, подвергнутой биологической рекультивации, биогенность значительно повышается, увеличивается количество микроорганизмов, повышается содержание гумуса, азота и подвижного фосфора,Совпадение результатов при подсчете количества сапрофитных микроорганизмов, выросших на индикаторных о бумажках и в чашках Петри 95-97";.Оптимальные результаты получены при выращивании микроорганизмов на индикаторных бумажках, пропитанных 5/-ным мясо-пептонным агаром, при инкубира вании в термостате в течение 5 ч.Таким образом, определение микроорганизмов в породах с помощью индикаторных бумажек может заменить их определение в чашках Петри на мясопептонном агаре, что исключает необходимость приготовления большого количества питательной среды и стерильной посуды, Кроме того, сокращается время выращивания микроорганизмов и отпадает необходимость в таких трудоемких определениях, как определение гумуса, азота, фосфора.Предложенный способ определения биогенности пород может применяться в экспедиционных условиях, кода неооходимо решить воспрос о пригодности отвапов угольных шахт к рекультивации и дать оценку интенсивностипочвообразовательного процесса наповерхности отвала при биологическойрекультивации. Способ определения биогенности породы отвалов угольных шахт путем приготовления суспензии, посева на питательную среду, инкубации и подсчета колоний микроорганизмов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения процесса определения, посев производят на полоски фильтровальной бумаги, пропитанной 3-5 ь-ным мясо-пептонным агаром, содержащим индикатор 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Корш Л.Е., Артемова Г,З Ускоренные методы санитарного бактериологического исследования воды, М